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利用CRISPR/Cas9技术编辑MODD增强水稻休眠性
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作者 郭乃辉 张文忠 +1 位作者 圣忠华 胡培松 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期227-235,共9页
【目的】休眠是水稻重要的农艺性状。适当的休眠可以抑制水稻的穗发芽现象,是确保产量和品质的关键因素。然而,水稻休眠调控的基因及其调控网络仍需进一步研究。已知基因MODD编码未知功能的蛋白,负向调控水稻脱落酸信号和抗旱性,但其调... 【目的】休眠是水稻重要的农艺性状。适当的休眠可以抑制水稻的穗发芽现象,是确保产量和品质的关键因素。然而,水稻休眠调控的基因及其调控网络仍需进一步研究。已知基因MODD编码未知功能的蛋白,负向调控水稻脱落酸信号和抗旱性,但其调控水稻休眠的功能未知。研究MODD在调控水稻休眠中的功能,有助于完善水稻休眠调控网络,同时为抗穗发芽遗传育种提供新的理论基础和种质资源。【方法】根据RGAP数据库公布的基因序列,构建MODD的CRISPR-Cas9敲除载体,通过农杆菌介导的遗传转化方法转化中花11(ZH11)愈伤组织,从而获得水稻转基因植株;利用PCR扩增、测序技术及qRT-PCR技术筛选并鉴定MODD敲除纯合系;根据2个突变系(KO-1和KO-2)的CDS得到突变系的氨基酸序列,然后,用DNAMAN对比ZH11和2个突变系(KO-1和KO-2)的蛋白序列;利用Linux系统筛选出MODD在水稻中的同源基因;取开花后35d的种子,调查ZH11和敲除系的发芽率;利用酵母单杂和LUC试验验证MODD的上游基因。【结果】查找到水稻中有6个MODD的同源基因,分别为LOC_Os07g41160、LOC_Os03g30570、LOC_Os03g53630、LOC_Os04g35430、LOC_Os03g17050和LOC_Os06g01170;成功构建了敲除载体,并转入ZH11中,获得2个纯合突变系(KO-1和KO-2);qRT-PCR结果表明,2个突变系(KO-1和KO-2)的MODD表达量显著降低;蛋白序列分析表明,KO-1和KO-2的移码突变造成了蛋白翻译的提前终止;发芽率结果显示,2个突变系(KO-1和KO-2)的发芽率在吸水第3天比ZH11分别显著降低了15%和15%;之后差异逐渐扩大,在第6天差异达到最大,比ZH11分别显著降低35%和35%;2个突变系(KO-1和KO-2)的穗发芽现象显著低于ZH11;酵母单杂试验结果表明,在酵母中,ABI5可以结合MODD的启动子区域,并且进一步把结合范围缩小至300 bp以内;LUC结果显示,加入ABI5的荧光值是单独加NONE空载荧光值的2.6倍,说明ABI5可以激活MODD的表达。【结论】敲除MODD可以增加种子的休眠,MODD可能通过ABA信号途径调控种子休眠。 展开更多
关键词 水稻 休眠 ABI5 MODD
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NRL3 Interacts with OsK4 to Regulate Heading Date in Rice
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作者 CHEN Wei CAI Yicong +12 位作者 Shakeel AHMAD WANG Yakun AN Ruihu TANG Shengjia guo naihui WEI Xiangjin TANG Shaoqing SHAO Gaoneng JIAO Guiai XIE Lihong HU Shikai SHENG Zhonghua HU Peisong 《Rice science》 SCIE CSCD 2022年第3期237-246,共10页
NRL3 is essential for the growth and development of rice leaves.In this study,we found that the loss function of NRL3 also delayed heading date under natural long daylight and short daylight conditions.The yeast two-h... NRL3 is essential for the growth and development of rice leaves.In this study,we found that the loss function of NRL3 also delayed heading date under natural long daylight and short daylight conditions.The yeast two-hybrid and the bimolecular fluorescence complementation proved that NRL3interacts with OsK4,a Snf1-related kinase.OsK4 localized to the nucleus and expressed in various rice tissues.The rhythmic expression pattern of Os K4 was similar to NRL3 under long daylight and short daylight conditions.Knock-out mutants of Os K4 exhibited early heading under long daylight conditions,indicating that it acts as a negative regulator of heading date in rice.Interestingly,the OsK4 mutant under the nrl3 mutant background rescued the late heading phenotype of nrl3 under long daylight conditions,suggesting that Os K4 functions downstream of NRL3.Moreover,both NRL3 and Os K4 controlled heading date through regulating the expression of Hd3a and RFT1 genes.These findings shed light on the heading date regulation in rice and provide a sound theoretical base to improve regional adaptability of rice. 展开更多
关键词 Oryza sativa heading date NRL3 gene OsK4 gene negative regulator loss function
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