文摘目的 :探讨汉防己甲素衍生物HL-42和HL-49对三阴性乳腺癌MDAMB-231细胞增殖、克隆形成能力以及凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 :采用不同浓度的HL-42和HL-49分别作用MDA-MB-231细胞后,应用MTT法检测细胞的增殖情况;平板克隆形成实验检测对细胞克隆形成的影响;2和10μmol/L的HL-42和HL-49分别作用于MDA-MB-231细胞24 h后,应用FCM法检测对细胞凋亡的影响;分别采用半定量RTPCR法和蛋白印迹法检测细胞中Bloom综合征解旋酶(Bloom’s syndrome helicase,BLM)、人乳腺癌易感基因1(breast cancer susceptibility gene 1,BRCA1)和同源重组修复的关键酶Rad51 m RNA及蛋白的表达水平。结果:1.25~10μmol/L的HL-42和HL-49处理24、48和72 h后,MDAMB-231细胞的增殖受到抑制,呈时间和浓度依赖性(P值均<0.05),HL-42作用于MDA-MB-231细胞24、48和72 h的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)值分别为(8.27±0.27)(、3.92±0.39)和(2.72±0.14)μmol/L;相应的HL-49的IC50值分别为(5.30±0.45)、(3.19±0.32)和(1.64±0.12)μmol/L;而阳性对照顺铂的IC50值则为(61.96±3.83)、(29.08±4.11)和(16.19±2.53)μmol/L。0.2、0.5、1和5μmol/L的HL-42和HL-49均可抑制MDA-MB-231细胞克隆的形成(P值均<0.001)。2和10μmol/L的HL-42和HL-49均可诱导MDA-MB-231细胞凋亡,且有浓度依赖性(P值均<0.05)。2μmol/L的HL-42处理24 h后,MDA-MB-231细胞中的Rad51 mR NA及蛋白的表达水平无明显变化(P值均>0.05);10μmol/L的HL-42处理24 h后,MDA-MB-231细胞中的Rad51 m RNA及蛋白的表达水平下调(P值均<0.05);2和10μmol/L的HL-42处理24 h后,MDA-MB-231细胞中BLM和BRCA1 m RNA及蛋白表达水平无明显变化(P值均>0.05)。2μmol/L的HL-49处理24 h后,MDA-MB-231细胞中的BRCA1 m RNA及蛋白表达水平无明显变化(P值均>0.05),10μmol/L的HL-49处理24h后,MDA-MB-231细胞中的BRCA1 m RNA及蛋白表达水平下调(P值均<0.01);2和10μmol/L的HL-49处理24 h后,MDA-MB-231细胞中的BLM、Rad51 m RNA及蛋白表达水平下调(P值均<0.01)。结论 :汉防己甲素衍生物HL-42和HL-49可明显抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖并诱导其凋亡,作用机制可能是HL-42和HL-49部分阻断了细胞内DNA损伤修复通路。
