为探讨外源基因人基质金属蛋白酶组织抑制物-1（human tissue inhibitor of metalloproteinase-1，hTIMP-1）基因在转基因小鼠家系染色体上的整合和精确定位，应用Southern印迹检测外源基因在染色体上整合的位点及拷贝数，结果表明，外...为探讨外源基因人基质金属蛋白酶组织抑制物-1（human tissue inhibitor of metalloproteinase-1，hTIMP-1）基因在转基因小鼠家系染色体上的整合和精确定位，应用Southern印迹检测外源基因在染色体上整合的位点及拷贝数，结果表明，外源基因是以单拷贝、单位点形式整合；应用荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）技术检测F4～F20代转基因小鼠中外源基因的整合．结果证明，该家系转基因小鼠自F4代起是纯合子，外源基因整合在17号染色体E区；反向PCR法（Inverse PCR，IPCR）克隆出约3．8kb外源基因整合位点处的侧翼序列．分析表明，外源基因整合在17号染色体E1.3区，ALK（anaplastic lymphoma kinase，ALK）基因第23个内含子区域、结果提示，获得的转基因小鼠为纯系，外源基因hTIMP-1已稳定整合在转基因小鼠染色体上，并能遗传给后代．展开更多
通过RT-RCR得到线虫f a t-1基因全长,将其N端亲水区克隆至原核表达载体pGEX-4T-2中,构建重组质粒pGEX-f a t1-N,将其转化大肠杆菌,并进行诱导表达。对表达产物G ST-f a t1-N融合蛋白进行纯化,制备其抗体,并对抗体效价进行了检测。结果表...通过RT-RCR得到线虫f a t-1基因全长,将其N端亲水区克隆至原核表达载体pGEX-4T-2中,构建重组质粒pGEX-f a t1-N,将其转化大肠杆菌,并进行诱导表达。对表达产物G ST-f a t1-N融合蛋白进行纯化,制备其抗体,并对抗体效价进行了检测。结果表明,线虫f a t-1基因能在大肠杆菌中表达,制备的抗体能识别在原核表达系统内表达的G ST-f a t1-N融合蛋白,且效价很高,达到1∶107。展开更多
文摘通过RT-RCR得到线虫f a t-1基因全长,将其N端亲水区克隆至原核表达载体pGEX-4T-2中,构建重组质粒pGEX-f a t1-N,将其转化大肠杆菌,并进行诱导表达。对表达产物G ST-f a t1-N融合蛋白进行纯化,制备其抗体,并对抗体效价进行了检测。结果表明,线虫f a t-1基因能在大肠杆菌中表达,制备的抗体能识别在原核表达系统内表达的G ST-f a t1-N融合蛋白,且效价很高,达到1∶107。
