人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因腺病毒载体的构建及包装 被引量：3

1

作者 任充华 张婷婷 +3 位作者 杨涵江 王昕 陈知龙 张智英 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2012年第7期39-43,50,共6页

【目的】构建能够表达人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的腺病毒。【方法】通过对PCI-neo-hTERT质粒的改造,依次构建出JMB293-hTERT、pAdTrack-hTERT载体,将pAdTrack-hTERT经PmeⅠ线性化后与pAdEasy-1载体共转化到BJ5183细菌中进行重组,经... 【目的】构建能够表达人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的腺病毒。【方法】通过对PCI-neo-hTERT质粒的改造,依次构建出JMB293-hTERT、pAdTrack-hTERT载体,将pAdTrack-hTERT经PmeⅠ线性化后与pAdEasy-1载体共转化到BJ5183细菌中进行重组,经卡那霉素抗性筛选获得重组腺病毒载体pAdEasy-hTERT。将pAdEasy-hTERT PacⅠ酶切线性化并回收后,转染HEK293人胚肾细胞,培养7d后,收集细胞并反复冻融,收集细胞裂解液;反复扩增3次后,测定重组hTERT腺病毒的滴度。【结果】①利用酶切连接的方法得到了穿梭载体pAdTrack-hTERT;②通过同源重组将外源目的基因hTERT整合到腺病毒骨架载体中,得到重组质粒pAdEasy-hTERT;③成功获得了滴度为6.73×1010 GFU/mL的高滴度腺病毒颗粒。【结论】含有hTERT基因的重组腺病毒颗粒包装成功,为后续哺乳动物原代细胞永生化研究奠定了基础。 展开更多

关键词 人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因 重组腺病毒 细胞永生化

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阿维链霉菌aveC基因缺失对产素调控的影响 被引量：1

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作者 彭敏 杨红文 +2 位作者 陈知龙 彭音 杨在清 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期63-66,共4页

通过构建仅含有aveC基因两端交换臂的缺失载体,与阿维链霉菌(Streptomyces avermitilis)染色体中aveC基因发生同源重组,以阻断该基因,从而获得aveC缺失突变株。并经摇瓶发酵和高效液相色谱检测不同阿维菌素组分产量。结果显示,aveC缺失... 通过构建仅含有aveC基因两端交换臂的缺失载体,与阿维链霉菌(Streptomyces avermitilis)染色体中aveC基因发生同源重组,以阻断该基因,从而获得aveC缺失突变株。并经摇瓶发酵和高效液相色谱检测不同阿维菌素组分产量。结果显示,aveC缺失突变株的阿维菌素的总产量与出发菌株的总产量差异不显著;而阿维菌素组分1的产量下降约58%,组分2的产量提高约52%。 展开更多

关键词 阿维菌素 aveC 基因缺失 产素

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分歧多于保守:人、小鼠、大鼠和猪中klf家族进化分析 被引量：2

3

作者 杨红文 陈知龙 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期508-514,共7页

为研究人、猪、大鼠、小鼠中klf家族的进化特征,笔者用Clustal X和MEGA,在线软件GSGD,K es-timator和PAML,在线软件MEME\MAST和InterProScan,PSORT II分别构建进化亲缘关系树、分析基因结构、鉴定选择压力、注释蛋白质模体和确定核定位... 为研究人、猪、大鼠、小鼠中klf家族的进化特征,笔者用Clustal X和MEGA,在线软件GSGD,K es-timator和PAML,在线软件MEME\MAST和InterProScan,PSORT II分别构建进化亲缘关系树、分析基因结构、鉴定选择压力、注释蛋白质模体和确定核定位信号。结果显示:进化亲缘树及基因结构分析都将KLF家族分为α,β,γ,δ和ε5个亚类,亚类内各基因结构相似,家族各成员基因随机分布于不同染色体,klf1和klf2紧密簇集,猪klf17定位于6号染色体而非15号染色体,猪的两对旁系同源基因:klf9和klf9a,klf10和klf10a,及相似家族成员klf1和klf2,分别起源于近期和远期的基因串联复制事件;适应性进化选择压力分析表明,klf13和klf17经历了正选择,其他基因都受到严格的负选择作用;KLF蛋白羧基端都有3个高度保守的串联锌指结构,核定位信号(NLS)位于3串联锌指内或其紧邻上游,氨基端模体则相对多样化,KLF3,KLF4,KLF8和KLF12以其共有的PVDLS/T模体(单字母氨基酸缩写)结合转录辅因子CtBP(C-terminus-binding protein)进而调控靶基因转录,KLF9,KLF10,KLF11,KLF13,KLF14和KLF16共享转录辅因子Sin3结合结构域SID(Sin3-interacting domain),KLF7中发现的亮氨酸拉链模体表明其以二聚体的形式参与转录调控。klf家族基因结构和氨基端模体的多样化、羧基端保守锌指结构及进化中经历的负选择压力表明家族进化中经历了转录调控方式和调控功能的多样化,同时保留了结合富含GC启动子的基本模式。 展开更多

关键词 klf家族 进化特征 亲缘关系 基因结构 选择压力 结构域和模体

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水产动物病害学理论与实践教学的创新改革研究 被引量：1

4

作者 凌飞 王高学 陈知龙 《安徽农业科学》 CAS 2013年第9期4208-4209,4211,共3页

为了培养学生的创新精神和实践能力,针对水产动物病害学理论与实践教学中存在的一些缺点和不足,探讨了水产动物病害学理论与实践教学创新改革的措施,包括教学内容与结构的优化,利用教学基地开辟第二课堂以及理论与实践教学方法等方面。... 为了培养学生的创新精神和实践能力,针对水产动物病害学理论与实践教学中存在的一些缺点和不足,探讨了水产动物病害学理论与实践教学创新改革的措施,包括教学内容与结构的优化,利用教学基地开辟第二课堂以及理论与实践教学方法等方面。最后,提出了进一步改革水产动物病害学教学的方向。 展开更多

关键词 水产动物病害学 理论教学 实践教学 创新改革

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畜牧专业细胞生物学教学改革的探索与实践 被引量：3

5

作者 李晓 陈知龙 +1 位作者 潘传英 曾文先 《安徽农学通报》 2015年第18期148-149,共2页

细胞生物学是支撑现代畜牧学科发展的基础课程之一,但是目前农林院校畜牧专业的细胞生物学教学仍停留在简单模仿综合院校"三生"专业或医学专业的层面上,很难满足培养优秀畜牧人才的需要。为探索适合畜牧专业的细胞生物学教学... 细胞生物学是支撑现代畜牧学科发展的基础课程之一,但是目前农林院校畜牧专业的细胞生物学教学仍停留在简单模仿综合院校"三生"专业或医学专业的层面上,很难满足培养优秀畜牧人才的需要。为探索适合畜牧专业的细胞生物学教学方法,该文针对教学内容、教学方法和考核方式等方面的改革进行了一些探索和尝试。 展开更多

关键词 畜牧专业 细胞生物学 教学改革

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《动物基因工程》优质课程建设的探索和实践

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作者 王昕 陈知龙 张智英 《家畜生态学报》 北大核心 2013年第12期89-91,共3页

优质课程建设是高等学校教学质量与教学改革工程的重要组成部分,对促进教师队伍、教学内容、教学方法、教学管理、教材建设等起到了积极的推动作用。本文论述了《动物基因工程》课程建设的意义,对优质课程建设作了一些有益的探索和实践... 优质课程建设是高等学校教学质量与教学改革工程的重要组成部分,对促进教师队伍、教学内容、教学方法、教学管理、教材建设等起到了积极的推动作用。本文论述了《动物基因工程》课程建设的意义,对优质课程建设作了一些有益的探索和实践,从中得出一些体会,为从根本上提高《动物基因工程》的教学质量,提升授课效果奠定了基础。 展开更多

关键词 优质课程 探索 实践

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一种新型提高HDR效率的 CRISPR/Cas9-Gal4BD 供体适配基因编辑系统 被引量：4

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作者 张潇筠 徐坤 +7 位作者 沈俊岑 穆璐 钱泓润 崔婕妤 马宝霞 陈知龙 张智英 魏泽辉 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期708-719,共12页

近年来,CRISPR基因编辑及衍生技术迅速发展,在生命科学、生物医学研究以及动植物育种领域得到了广泛应用。基于DNA双链断裂(double-stranded break,DSB)同源指导修复(homology-directed repair,HDR)机制的基因敲入和点编辑是基因编辑的... 近年来,CRISPR基因编辑及衍生技术迅速发展,在生命科学、生物医学研究以及动植物育种领域得到了广泛应用。基于DNA双链断裂(double-stranded break,DSB)同源指导修复(homology-directed repair,HDR)机制的基因敲入和点编辑是基因编辑的重要策略,但效率偏低亟待提高。本文提出了驱动供体DNA富集至DSB处以提高HDR效率的新策略,并设计了一套CRISPR/Cas9-Gal4BD供体适配基因编辑系统(donor adapting system,DAS)。该系统主要利用Gal4 DNA结合域(Gal4 binding domain,Gal4BD)作为配体蛋白与Cas9融合表达,将Gal4BD结合序列(Gal4 binding sequence,Gal4BS)作为受体序列与双链DNA(double-stranded DNA,dsDNA)供体结合,以期提高HDR效率。使用HEK293T-HDR.GFP报告细胞系的初步研究结果表明当dsDNA供体同源臂在一定长度(100~60 bp)时该系统能够提高HDR效率2~4倍。进一步的优化研究表明,融合端口和融合使用连接子(linker)的选择会影响Cas9表达效果及活性,而GGS5作为Cas9-Gal4BD融合的连接子则影响较小。同时,本研究还发现Gal4BS-dsDNA供体的差异化设计也会影响HDR效率,将Gal4BS添加到dsDNA供体5′-端的效果最佳。综上所述,本研究利用CRISPR/Cas9-Gal4BD DAS在AAVS1和EMX1位点上实现了HDR编辑效率的提高,为进一步利用该系统进行动物分子设计育种研究提供了参考和借鉴。 展开更多

关键词 CRISPR/Cas9 基因编辑 供体DNA 供体适配 同源指导修复

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场——大型商业中心公共空间营造

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作者 陈知龙 《建筑创作》 2009年第8期92-99,92-93,共8页

购物可能会成为人们公共活动的唯一方式。—雷姆.库哈斯购物是一种很有意思的公共生活,同时它也是新的,可以说shopping mall在某种程度上是教堂的替代品。

关键词 商业中心 空间营造 购物中心 城市居民 购物广场 广场文化 公共空间 休闲方式

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干燥方式对大球盖菇品质及挥发性风味成分的影响

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作者 吴坤龙 李彦坡 +2 位作者 刘标 陈知龙 徐仰丽 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2024年第2期168-176,共9页

目的:筛选最为合适的大球盖菇干燥方式。方法:选用冷冻干燥、热泵干燥、热风干燥和微波干燥对新鲜大球盖菇进行干燥处理,考察其理化性质。结果:粗蛋白、粗脂肪、灰分、钾、钙、总黄酮、必需氨基酸、呈味氨基酸以及总氨基酸含量方面以冷... 目的:筛选最为合适的大球盖菇干燥方式。方法:选用冷冻干燥、热泵干燥、热风干燥和微波干燥对新鲜大球盖菇进行干燥处理,考察其理化性质。结果:粗蛋白、粗脂肪、灰分、钾、钙、总黄酮、必需氨基酸、呈味氨基酸以及总氨基酸含量方面以冷冻干燥的最高,16种氨基酸总量为16.88 g/100 g;复水率、色泽方面均为冷冻干燥的最佳;DPPH自由基清除率为热风干燥的最高达61.14%,清除率大小依次为热风干燥>热泵干燥>微波干燥>冷冻干燥;ABTS自由基清除率为热泵干燥的最高达67.97%,清除率大小依次为热泵干燥>热风干燥>微波干燥>冷冻干燥;大球盖菇单糖主要由葡萄糖和半乳糖组成,其中,冷冻干燥的葡萄糖含量最多,占总糖的36.79%;大球盖菇单糖分子量最大的为冷冻干燥的;不同干燥方式下大球盖菇挥发性风味存在差异,且与新鲜大球盖菇的差异较大,冷冻干燥大球盖菇中挥发性成分种类最丰富、部分成分含量较高。结论:冷冻干燥在营养成分、复水率、色泽、风味等方面较其他干燥方式均有优势,对大球盖菇品质影响最小,是最为合适的干燥方式。 展开更多

关键词 大球盖菇 干燥方式 营养成分 多糖 挥发性风味

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小果型蓝莓品种V_(3)高接生长适应性研究

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作者 余宏傲 吴尚君 +6 位作者 谢志亮 陈怡超 李飞 洪方磊 郑博升 吴坤龙 陈知龙 《浙江农业科学》 2024年第6期1379-1382,共4页

以目前生产上广泛种植的小果型加工蓝莓品种V_(3)为高接砧木,以生产上表现好的Jewel、Emerald、Star、O′neal, Misty共5个品种一年生新梢为接穗,采用切腹接或切接的方法高接换种。结果表明,5个品种高接后,基茎粗度、枝条长度、分枝数... 以目前生产上广泛种植的小果型加工蓝莓品种V_(3)为高接砧木,以生产上表现好的Jewel、Emerald、Star、O′neal, Misty共5个品种一年生新梢为接穗,采用切腹接或切接的方法高接换种。结果表明,5个品种高接后,基茎粗度、枝条长度、分枝数和成活率等明显优于地栽对照。嫁接3 a后,5个品种比较,Jewel和V_(3)组合的基茎粗度、枝条长度、分枝数和成活率指标明显优于其他组合,O′Neal和V_(3)组合生长势和成活率相对较差。嫁接3 a后产量和品质统计结果表明,5个品种高接3 a后的平均产量高于地栽,各组合的适应性均高于地栽对照,尤其是Jewel和V_(3)组合的产量是Jewel单纯地栽的2.78倍。 展开更多

关键词 蓝莓 V_(3) 高接 砧穗组合 生长势 产量 品质

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杨梅“两疏一改”技术对树体生长与果实品质的影响 被引量：1

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作者 梁森苗 俞浙萍 +2 位作者 孙鹂 陈知龙 张淑文 《浙江农业科学》 2023年第11期2682-2686,共5页

开展了杨梅“两疏一改”关键技术研究与示范,对树体叶片、果实品质、土壤养分进行测定。结果表明,“两疏一改”处理显著提高了土壤pH值,丰富了有机质、水解性氮含量,分别比对照提高6.49%、24.19%、21.55%;“两疏”处理下,上述指标与对... 开展了杨梅“两疏一改”关键技术研究与示范,对树体叶片、果实品质、土壤养分进行测定。结果表明,“两疏一改”处理显著提高了土壤pH值,丰富了有机质、水解性氮含量,分别比对照提高6.49%、24.19%、21.55%;“两疏”处理下,上述指标与对照无差异,而有效态锰含量为4.79 mg·kg^(-1),显著高于其他处理。进一步测定叶片指标,发现两种处理下叶片叶绿素相对含量值比对照增加10.29%以上,而“两疏一改”处理对叶片生长作用更显著,叶长、叶宽分别比对照提高15.32%、15.96%;两种处理均提高了果实硬度、糖酸比,降低了总酸含量,“两疏一改”处理下作用显著,其果实硬度、糖酸比和柠檬酸含量分别比对照增加70.12%、33.10%、21.67%,总酸含量较对照降低26.11%。综上,“两疏一改”对改善土壤理化性质和营养、增强树体生长、提升果实品质的效果更明显。本研究结果可为杨梅产业提质增效提供重要依据及技术支撑。 展开更多

关键词 杨梅 “两疏一改” 土壤养分 果实品质

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杨梅“三疏一改”高质高效规范化栽培技术 被引量：1

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作者 梁森苗 张淑文 +4 位作者 吴昌旺 陈知龙 周作荣 邢美芳 商靓婷 《现代园艺》 2022年第20期34-35,44,共3页

针对杨梅产业上存在的树体高大、树冠密闭、树势衰弱等系列问题,引进省力化装备,分别实施疏伐过于密闭、病虫为害严重、结果过多衰老的杨梅树技术“一疏”方案,截大枝矮化、疏删透光的疏枝技术“二疏”方案,疏枝疏果、人工疏果技术“三... 针对杨梅产业上存在的树体高大、树冠密闭、树势衰弱等系列问题,引进省力化装备,分别实施疏伐过于密闭、病虫为害严重、结果过多衰老的杨梅树技术“一疏”方案,截大枝矮化、疏删透光的疏枝技术“二疏”方案,疏枝疏果、人工疏果技术“三疏”方案,果园全园翻耕、增施微生物肥的土壤改良技术“一改”方案,建立杨梅“三疏一改”示范基地开展技术试验,培养科技服务队进行技术应用,突破了杨梅生产瓶颈,促进了果形增大、品质提升、效益提高,保障杨梅高质高效、安全生产。 展开更多

关键词 杨梅 三疏一改 高效栽培 规范化技术

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4种薯蓣属植物GBSS基因的电子克隆与生物信息学分析 被引量：4

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作者 陈知龙 郑佳豪 +1 位作者 吴坤龙 张壹 《浙江农业科学》 2022年第8期1850-1854,共5页

多种薯蓣属植物全基因组测序工作的完成,为利用生物信息学手段对薯蓣属植物的基因进行电子克隆、结构与功能分析以及分子进化分析提供了便利。淀粉是薯蓣属植物地下块茎的重要组成成分,颗粒结合淀粉合成酶(GBSS)是淀粉合成过程中控制直... 多种薯蓣属植物全基因组测序工作的完成,为利用生物信息学手段对薯蓣属植物的基因进行电子克隆、结构与功能分析以及分子进化分析提供了便利。淀粉是薯蓣属植物地下块茎的重要组成成分,颗粒结合淀粉合成酶(GBSS)是淀粉合成过程中控制直链淀粉合成的关键酶。本研究以文成糯米山药GBSS基因序列为探针,电子克隆方法获得参薯、几内亚白山药、灌丛薯蓣和盾叶薯蓣4种薯蓣属植物的GBSS基因序列。通过生物信息学分析方法,比较分析4种薯蓣属植物GBSS基因结构、蛋白质结构及系统发育特点。结果可为进一步研究薯蓣属植物GBSS基因及其编码蛋白调控淀粉合成的分子机制提供科学依据。 展开更多

关键词 薯蓣属 GBSS基因 电子克隆 序列分析

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