分子标记技术及其在小麦遗传育种中的应用 被引量：3

1

作者 郭嘉义 黄卫东 许兴 《宁夏农林科技》 1999年第2期20-23,共4页

本文对遗传标记技术的发展历程作了简要回顾，对现在常用的几种分子标记技术的基本原理及特点进行了评述，并从三个方面重点介绍了ＲＦＬＰ技术在小麦遗传育种中的应用和研究进展：（１）分子遗传图谱的构建；（２）比较基因组的研究；... 本文对遗传标记技术的发展历程作了简要回顾，对现在常用的几种分子标记技术的基本原理及特点进行了评述，并从三个方面重点介绍了ＲＦＬＰ技术在小麦遗传育种中的应用和研究进展：（１）分子遗传图谱的构建；（２）比较基因组的研究；（３）农艺性状的分子标记与辅助育种技术。 展开更多

关键词 分子标记 RFLP 小麦 遗传育种

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宁夏主要春小麦品种间遗传多样性的RAPD检测 被引量：2

2

作者 郭嘉义 许兴 赵晓明 《宁夏农林科技》 2001年第2期4-7,共4页

对 4 0年代至今宁夏灌区种植的春小麦地方品种、引进品种和育成品种共 13份材料以及对照品种中国春进行了随机扩增多态性DNA(RAPD)分析。在 4 2个随机引物中只有 7个引物 (占 16 .2 2 % )可扩增出谱带清晰并呈现多态的RAPD产物。依据这 ... 对 4 0年代至今宁夏灌区种植的春小麦地方品种、引进品种和育成品种共 13份材料以及对照品种中国春进行了随机扩增多态性DNA(RAPD)分析。在 4 2个随机引物中只有 7个引物 (占 16 .2 2 % )可扩增出谱带清晰并呈现多态的RAPD产物。依据这 7个引物扩增谱带建立 0、1型数据 ,计算出 14个春小麦间的遗传距离 ,并进行聚类分析。试验结果表明 ,具有相同或相关亲本的品种 ,聚在同一组且距离较近 ,RAPD标记的聚类结果与春小麦的已知谱系基本一致 ,证明RAPD标记在小麦组群划分上是可行的。聚类结果同样表明 ,宁春系列品种间的遗传差异较小 ,遗传基础狭窄 ,这也是近 2 0年来宁夏小麦育种始终处于“徘徊”状态和“爬坡” 展开更多

关键词 春小麦 RAPD 亲缘关系 品种 遗传多样性 杂交育种 亲本选配

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人类错配修复基因hMLH1和hMSH2错义突变真核表达载体的构建及表达 被引量：2

3

作者 黄卫东 郭嘉义 《宁夏医科大学学报》 2010年第1期18-21,F0003,共5页

目的构建人类错配修复基因hMLH1和hMSH2错义突变真核表达载体并检测它们在瞬时转染细胞中的蛋白表达。方法重组pcDNA3.1-hMLH1-wt和pcDNA3.1-hMSH2-wt质粒为模板,用定点诱变的方法分别构建hMLH1基因和hMSH2基因错义突变真核表达载体,将... 目的构建人类错配修复基因hMLH1和hMSH2错义突变真核表达载体并检测它们在瞬时转染细胞中的蛋白表达。方法重组pcDNA3.1-hMLH1-wt和pcDNA3.1-hMSH2-wt质粒为模板,用定点诱变的方法分别构建hMLH1基因和hMSH2基因错义突变真核表达载体,将诱变前后的重组质粒瞬时转染至HCT-116细胞(hMLH1基因缺陷型)或LoVo细胞(hMSH2基因缺陷型)中,免疫印迹法和免疫荧光法分别检测这两种基因在各自的转染细胞中的蛋白表达。结果测序证实,定点突变成功,构建出hMLH1基因错义突变pcDNA3.1-hMLH1-T117M和pcDNA3.1-hMLH1-V384D真核表达载体以及hMSH2基因错义突变pcDNA3.1-hMSH2-L390F、pcDNA3.1-hMSH2-Q419K和pcDNA3.1-hMSH2-Q629R真核表达载体。结果表明转染后,除hMLH1-T117M突变体蛋白表达缺失外,其余的野生型及突变型真核表达载体在转染细胞中均能表达相应的蛋白。结论成功构建了在人的肿瘤细胞系中能有效表达的两种hMLH1基因错义突变和三种hMSH2基因错义突变的真核表达载体,为进一步研究这些错义突变的病因学作用和功能意义奠定了实验基础。 展开更多

关键词 HMLH1 hMSH2错义突变 定点突变 真核表达载体 转染 蛋白表达

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籽瓜枯萎病种子带菌率及重茬土壤致病率的研究 被引量：11

4

作者 鲁占魁 郭嘉义 《甘肃农业科技》 1998年第2期44-45,共2页

籽瓜种子带枯萎病菌率高达４７．２２％～４８．８９％，是新红宝西瓜的１１．１４～１１．５７倍；重茬籽瓜田土壤致病率比重茬西瓜田增加０．９２～４０．８７倍。

关键词 籽瓜 枯萎病 种子带菌率 重茬土壤致病率

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旱直播稻田杂草发生规律及防除技术研究 被引量：2

5

作者 赵怡红 康萍芝 郭嘉义 《宁夏农林科技》 1997年第5期45-46,共2页

旱直播稻田杂草发生规律及防除技术研究赵怡红康萍芝郭嘉义（宁夏农林科学院植保所银川７５０００２）水稻旱直播栽培是一种省工、节能、高效率的栽培方式。但旱直播要求浅灌水、间歇灌溉，苗期生长缓慢，易引起杂草危害，且杂草种类多... 旱直播稻田杂草发生规律及防除技术研究赵怡红康萍芝郭嘉义（宁夏农林科学院植保所银川７５０００２）水稻旱直播栽培是一种省工、节能、高效率的栽培方式。但旱直播要求浅灌水、间歇灌溉，苗期生长缓慢，易引起杂草危害，且杂草种类多、数量大，与水稻共生时间长，对水稻... 展开更多

关键词 稻田 旱直播 杂草 发生规律 除草

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枸杞流胶病因及防治研究报告 被引量：1

6

作者 鲁占魁 郭嘉义 +2 位作者 樊仲庆 茹庆华 李润怀 《宁夏农林科技》 1998年第2期43-44,共2页

枸杞流胶病因及防治研究报告鲁占魁郭嘉义樊仲庆茹庆华李润怀（宁夏农林科学院植保所银川７５０００２）（宁夏农林科学院枸杞研究所枸杞流胶病宁夏始见于６０年代，８０年代严重发生。常常造成枸杞半边或整个树冠枯死。直接经济损失１... 枸杞流胶病因及防治研究报告鲁占魁郭嘉义樊仲庆茹庆华李润怀（宁夏农林科学院植保所银川７５０００２）（宁夏农林科学院枸杞研究所枸杞流胶病宁夏始见于６０年代，８０年代严重发生。常常造成枸杞半边或整个树冠枯死。直接经济损失１ｈｍ２在６０００元以上。此病在国内... 展开更多

关键词 枸杞 流胶病 病因 防治

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利用改良的CRISPR/Cas9n double nick系统构建DPF2基因敲除的人胰腺癌PANC-1细胞株

7

作者 黄卫东 张文胜 +1 位作者 陈一帆 郭嘉义 《宁夏医科大学学报》 2023年第12期1189-1193,共5页

目的利用改良的CRISPR/Cas9n double nick系统构建DPF2基因敲除的PANC-1人胰腺癌细胞模型。方法设计两对靶向DPF2基因第四外显子上下游的单链向导RNA(single guide RNA,sgRNA),化学合成sgRNA寡核苷酸序列,并克隆至pGL3-U6-sgRNA-PGK-pur... 目的利用改良的CRISPR/Cas9n double nick系统构建DPF2基因敲除的PANC-1人胰腺癌细胞模型。方法设计两对靶向DPF2基因第四外显子上下游的单链向导RNA(single guide RNA,sgRNA),化学合成sgRNA寡核苷酸序列,并克隆至pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin真核表达质粒中。将克隆正确的DPF2-sgRNA重组真核表达质粒与Cas9真核表达载体pST1374-N-NLS-flag-linker-Cas9共转染至PANC-1细胞中,通过嘌呤霉素和杀稻瘟菌素筛选阳性转染细胞,进一步通过有限稀释法筛选获得单克隆细胞株。提取细胞基因组DNA对敲除位点进行聚合酶链反应(PCR)鉴定和测序鉴定。Western blot检测细胞中DPF2蛋白表达情况。结果sgRNA成功插入pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin中且序列正确。PCR扩增鉴定和测序结果表明,PANC-1细胞中一段包括完整第四外显子在内的长度为401 bp的DPF2基因片段被敲除。Western blot检测结果表明,DPF2基因敲除细胞中的DPF2蛋白表达缺失。结论通过改良的CRISPR/Cas9n double nick基因编辑系统成功构建DPF2基因敲除PANC-1稳定细胞株。 展开更多

关键词 DPF2基因 CRISPR/Cas9n double nike系统 基因敲除 PANC-1细胞株

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铜绿假单胞菌含Pilz结构域蛋白基因的克隆及原核表达

8

作者 黄卫东 郭嘉义 《宁夏医科大学学报》 2010年第5期564-567,F0003,共5页

目的克隆铜绿假单胞菌含Pilz结构域蛋白基因并构建其原核表达载体,为进一步研究这七种含Pilz结构域蛋白是否为第二信使c-di-GMP潜在的受体分子奠定实验基础。方法提取铜绿假单胞菌PAO1基因组DNA,用PCR方法从中扩增出七种功能未知的含Pil... 目的克隆铜绿假单胞菌含Pilz结构域蛋白基因并构建其原核表达载体,为进一步研究这七种含Pilz结构域蛋白是否为第二信使c-di-GMP潜在的受体分子奠定实验基础。方法提取铜绿假单胞菌PAO1基因组DNA,用PCR方法从中扩增出七种功能未知的含Pilz结构域蛋白基因,将其克隆到原核表达载体pET32a中,在大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定。结果成功扩增出七种含Pilz结构域蛋白基因并构建其原核表达载体,测序结果与NCBI数据库收录序列相一致。SDS-PAGE检验证明目的基因在大肠杆菌BL21中获得高效表达。结论从铜绿假单胞菌基因组中成功地克隆了七种含Pilz结构域蛋白基因,其构建的原核表达载体在大肠杆菌BL21中获得了高效表达。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌 c-di-GMP第二信使 Pilz结构域蛋白 基因克隆 原核表达载体构建

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西瓜枯萎病的防治试验示范报告

9

作者 鲁占魁 王国珍 郭嘉义 《内蒙古农业科技》 1998年第4期21-22,共2页

西瓜枯萎病的防治试验示范报告鲁占魁王国珍郭嘉义（宁夏农林科学院植保所，银川７５０００２）１９８６～１９８８年，我们采用抗病品种和土壤施药的方法，进行西瓜枯萎病的防治试验，取得良好效果，现报告如下。１材料和方法１．１应... 西瓜枯萎病的防治试验示范报告鲁占魁王国珍郭嘉义（宁夏农林科学院植保所，银川７５０００２）１９８６～１９８８年，我们采用抗病品种和土壤施药的方法，进行西瓜枯萎病的防治试验，取得良好效果，现报告如下。１材料和方法１．１应用抗病品种的试验、示范试验田：１９... 展开更多

关键词 西瓜 枯萎病 防治措施 试验示范

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人紫杉醇耐药细胞株LoVo/TAX的建立及其耐药机制研究 被引量：2

10

作者 郭嘉义 陈一帆 +3 位作者 李云鸿 张敏 张燕 黄卫东 《现代肿瘤医学》 CAS 2018年第1期4-9,共6页

目的:以体外建立的人结肠癌紫杉醇(paclitaxel,TAX)耐药细胞株LoVo/TAX为模型,探讨结肠癌紫杉醇获得性耐药潜在的分子机制。方法:对LoVo亲本细胞及LoVo/TAX耐药细胞进行对比分析,采用光镜及透射电镜观察细胞形态,MTT法检测细胞药物敏感... 目的:以体外建立的人结肠癌紫杉醇(paclitaxel,TAX)耐药细胞株LoVo/TAX为模型,探讨结肠癌紫杉醇获得性耐药潜在的分子机制。方法:对LoVo亲本细胞及LoVo/TAX耐药细胞进行对比分析,采用光镜及透射电镜观察细胞形态,MTT法检测细胞药物敏感性,流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR方法和Western blot方法分别检测多药耐药相关基因、微管蛋白相关基因以及凋亡和细胞周期调控相关基因的转录和翻译水平。结果:与亲本细胞相比,LoVo/TAX对紫杉醇高度耐药,细胞形态也有明显变化,其G_2/M期阻滞降低(P<0.05),凋亡率显著下降(P<0.01),MRP、MAP-Tau和CDK1基因表达水平提高(P<0.05)。结论:多药耐药相关蛋白MRP1、微管相关蛋白MAP-Tau以及细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)过表达可能是引起结肠癌细胞对紫杉醇耐药的主要原因。 展开更多

关键词 结肠癌细胞 紫杉醇耐药 MRP1 MAP-Tau CDK1

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人结肠癌紫杉醇耐药细胞株的建立及耐药相关基因mRNA表达的研究 被引量：1

11

作者 陈一帆 张燕 +2 位作者 王强 黄卫东 郭嘉义 《宁夏医科大学学报》 2017年第5期545-549,F0002,共6页

目的建立紫杉醇耐药细胞株LoVo/Taxol,探讨结肠癌细胞紫杉醇获得性耐药的可能机制。方法反复用紫杉醇处理结肠癌LoVo细胞,诱导建立结肠癌紫杉醇耐药细胞株LoVo/Taxol;通过MTT法检测细胞药物敏感性,光学显微镜和透射电镜观察细胞形态学变... 目的建立紫杉醇耐药细胞株LoVo/Taxol,探讨结肠癌细胞紫杉醇获得性耐药的可能机制。方法反复用紫杉醇处理结肠癌LoVo细胞,诱导建立结肠癌紫杉醇耐药细胞株LoVo/Taxol;通过MTT法检测细胞药物敏感性,光学显微镜和透射电镜观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR法测定细胞中多药耐药基因MDR1、MRP1、LRP、GST-π和TopoⅡ的表达。结果建立的紫杉醇耐药细胞株LoVo/Taxol对紫杉醇的耐药指数为42,为高度耐药;对阿霉素及5-氟脲嘧啶也产生强烈的交叉耐药,耐药指数分别为796和187。相较于亲本细胞LoVo,LoVo/Taxol细胞形态发生明显的变化,G2/M期阻滞和细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。在五种经典的耐药相关蛋白中MRP1、MDR1基因m RNA的转录水平分别提高了37倍和2倍,LRP、GST-π基因m RNA的转录水平分别下降了11倍和3倍(P均<0.05),To Po II基因转录水平无明显变化。结论成功建立的人结肠癌紫杉醇耐药细胞株LoVo/Taxol为典型的多药耐药细胞模型,其耐药机制可能与MRP1基因的过表达有关。 展开更多

关键词 紫杉醇 多药耐药 结肠癌 LoVo/Taxol细胞株 MRP1

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应用Bac-to-Bac系统高效表达人类错配修复基因hMLH1及其错义突变体

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作者 郭嘉义 张燕 +2 位作者 满耕孝 朱明星 黄卫东 《宁夏医科大学学报》 2017年第10期1151-1154,共4页

目的利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在Sf9昆虫细胞中实现人类错配修复基因h MLH1及其错义突变体的高效表达。方法分别用Bam HI和Not I双酶切构建于pc DNA载体中的全长野生型h MLH1基因及T117M和V384D错义突变型DNA片段,回收后定向克隆... 目的利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在Sf9昆虫细胞中实现人类错配修复基因h MLH1及其错义突变体的高效表达。方法分别用Bam HI和Not I双酶切构建于pc DNA载体中的全长野生型h MLH1基因及T117M和V384D错义突变型DNA片段,回收后定向克隆至p Fast Bac1转座载体中,经酶切鉴定后转化DH10Bac感受态细胞,PCR方法筛选阳性菌落,提取重组Bacmid,反复感染Sf9昆虫细胞,用SDS-PAGE和Western blot方法鉴定目的蛋白的表达。结果提取转染72h后的Sf9细胞总蛋白,用7%的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,可见分子量为85k Da清晰的蛋白条带,经Western blot方法证实该条带为h MLH1基因的表达产物。结论利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在Sf9昆虫细胞中大量表达出h MLH1野生型和T117M及V384D错义突变体蛋白,为进一步开展体外错配修复实验奠定了良好的基础。 展开更多

关键词 HMLH1基因 T117M错义突变 V384D错义突变 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统 Sf9昆虫细胞

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斜外侧椎间融合术结合椎板开窗术治疗多节段退变性腰椎侧凸应用体会 被引量：4

13

作者 秦世强 孙宇庆 +6 位作者 倪文卓 刘亚军 行勇刚 马成利 张巨龙 郭嘉义 卢志 《中国临床医生杂志》 2021年第7期838-842,共5页

目的对比经斜外侧椎间融合术(oblique lumbar interbody fusion,OLIF)结合后路椎板开窗术与经椎间孔腰椎椎体间融合术(transforaminal lumbar interbody fusion,TLIF)治疗多节段退变性腰椎侧凸的临床疗效。方法选择2017年12月至2020年6... 目的对比经斜外侧椎间融合术(oblique lumbar interbody fusion,OLIF)结合后路椎板开窗术与经椎间孔腰椎椎体间融合术(transforaminal lumbar interbody fusion,TLIF)治疗多节段退变性腰椎侧凸的临床疗效。方法选择2017年12月至2020年6月在北京朝阳中西医结合急诊抢救中心因多节段退变性腰椎侧凸合并腰椎管狭窄症住院患者56例。根据治疗方法不同分为OLIF组和TLIF组,每组28例。比较两组患者手术时间、术中出血量、术后引流量、下地时间、住院时间及并发症发生情况等;比较两组视觉模拟评分(Visual analogue scale,VAS)、功能障碍指数(Oswestry disability index,ODI)及两组在末次随访椎体间融合情况;比较两组手术前后腰椎矢状位Cobb角、冠状位Cobb角、顶椎中心偏移距离(sagittal vertical axis,SVA)、胸椎后凸角(thoracic kyphosis,TK)、腰椎前凸角(lumbar lordosis,LL),评价脊柱-骨盆参数改变情况。结果OLIF组手术时间、术中出血量、术后引流量、下地时间、住院时间、并发症发生率低于TLIF组,差异有显著性(P<0.05)。两组患者术后3d VAS评分、ODI指数均较术前比较,差异有显著性(P<0.05);术后3d和末次随访比较,差异无显著性(P>0.05)。OLIF组腰椎冠状位Cobb角、矢状位Cobb角、TK、LL、SVA较TLIF组改善明显,差异有显著性(P<0.05);两组间融合率比较,差异无显著性(P>0.05)。结论OLIF技术结合后路椎板开窗术治疗退变性腰椎侧凸可取得TLIF手术相似的临床效果,可以降低围术期手术风险及并发症,远期效果满意,能有效改善脊柱-骨盆参数。 展开更多

关键词 斜外侧椎间融合术 经椎间孔腰椎椎体间融合术 退变性腰椎侧凸

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张裕:开拓西部葡萄重镇

14

作者 郭嘉义 《西南航空》 2011年第12期49-49,共1页

葡萄醉了”张八万”的心 眼下正是葡萄收获的季节，我们来到位于新疆石河子生产建设农八师152团的张裕新疆酒庄有机葡萄种植基地．基地职工张成利头顶阳光采摘葡萄。“吐鲁番的葡萄熟了．阿那尔汗的心儿醉了…”穿行在葡萄丛中，张成... 葡萄醉了”张八万”的心 眼下正是葡萄收获的季节，我们来到位于新疆石河子生产建设农八师152团的张裕新疆酒庄有机葡萄种植基地．基地职工张成利头顶阳光采摘葡萄。“吐鲁番的葡萄熟了．阿那尔汗的心儿醉了…”穿行在葡萄丛中，张成利还不忘哼唱着这首新疆民歌，嘴角挂着喜悦。 展开更多

关键词 葡萄 新疆石河子 西部 种植基地 农八师 吐鲁番 季节 采摘

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谁为医疗风险埋单？一位临床医生的五大困惑

15

作者 郭嘉义 《中国健康月刊》 2005年第9期28-29,共2页

随着社会主义市场经济体制的建立与完善．社会保障制度和医疗卫生事业的改革也在逐步推进。医疗卫生方面出现了不少矛盾和问题．社会和民众对此议论纷纷。

关键词 医疗风险 临床医生 社会主义市场经济体制 医疗卫生事业 社会保障制度

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铜绿假单胞菌PA0861突变菌株表达谱检测分析 被引量：6

16

作者 李九龙 郭嘉义 +3 位作者 张燕 陈一帆 满耕孝 黄卫东 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第6期495-499,504,共6页

目的分析铜绿假单胞菌野生型菌株PAO1及PA0861突变菌株基因表达谱,探讨铜绿假单胞菌中GGDEFEAL基因PA0861的生物学功能。方法以野生型铜绿假单胞菌PAO1及PA0861基因转座子插入失活的突变体菌株为材料,利用结晶紫染色方法进行细菌生物膜... 目的分析铜绿假单胞菌野生型菌株PAO1及PA0861突变菌株基因表达谱,探讨铜绿假单胞菌中GGDEFEAL基因PA0861的生物学功能。方法以野生型铜绿假单胞菌PAO1及PA0861基因转座子插入失活的突变体菌株为材料,利用结晶紫染色方法进行细菌生物膜的表型分析;利用Microarray技术分析其基因表达谱的变化;采用半定量RT-PCR验证Microarray结果。结果 PA0861突变株生物膜的合成量在4、8、12h均高于PAO1(P<0.05),在12h时增加了近1倍;利用Microarray技术筛选出差异表达基因517个,其中319个上调,198个下调。生物分子功能注释和Pathway分类显示这些差异表达基因除涉及代谢过程中基本的物质变化和能量转换外,突变体PA0861中涉及铁载体生物合成基因的表达增高。半定量RT-PCR验结果一致。结论铜绿假单胞菌突株PA0861基因表达谱发生改变,其中铁载体生物合成基因高表达,提示c-di-GMP可能通过对铁载体的调控影响细菌生物膜的形成。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌 C-DI-GMP MICROARRAY 生物膜 铁载体

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铜绿假单胞菌PAO1中c-di-GMP代谢相关基因PA0575对表型的影响 被引量：3

17

作者 詹学良 姚严翔 +2 位作者 芦晓红 郭嘉义 黄卫东 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1927-1934,共8页

【背景】铜绿假单胞菌PAO1中存在与环鸟苷二磷酸(cyclic-di-guanosine monophosphate,c-di-GMP)代谢相关基因PA0575。【目的】探讨铜绿假单胞菌PAO1中环鸟苷二磷酸代谢相关基因PA0575对运动能力及生物膜的影响。【方法】通过PCR对菌株... 【背景】铜绿假单胞菌PAO1中存在与环鸟苷二磷酸(cyclic-di-guanosine monophosphate,c-di-GMP)代谢相关基因PA0575。【目的】探讨铜绿假单胞菌PAO1中环鸟苷二磷酸代谢相关基因PA0575对运动能力及生物膜的影响。【方法】通过PCR对菌株遗传背景进行确认;利用刚果红结合实验及电转PcdrA-gfp质粒间接测量胞内c-di-GMP水平;利用泳动性(swimming)、蜂群泳动(swarming)、蹭行运动(twiching)和生物膜定量实验对细菌进行表型分析,并在运动培养基中添加抗生素研究其对运动能力的影响;针对PA0575基因进行融合蛋白表达载体的构建,并对蛋白进行原核诱导表达。【结果】3株突变体菌株的转座子插入突变位点不一致,胞内c-di-GMP水平检测结果显示,PA0575-1菌株的c-di-GMP含量高于野生型PAO1菌株(P<0.05),PA0575-2、PA0575-3菌株胞内c-di-GMP水平与野生型PAO1菌株无差异(P>0.05)。运动能力检测实验中,与野生型PAO1菌株相比,PA0575-1菌株泳动性增强(P<0.05);PA0575-2、PA0575-3菌株的泳动性、蜂群运动均增强(P<0.05);该基因不同位点的突变均导致氯霉素对菌株的运动能力产生抑制作用。生物膜定量结果显示,与野生型PAO1菌株相比,细菌培养18 h后PA0575-1的生物膜含量降低(P<0.05),PA0575-2、PA0575-3菌株的生物膜含量升高。最后成功构建了PA0575基因不同结构域的8个表达载体,并获得了异源表达蛋白。【结论】PA0575基因降低铜绿假单胞菌胞内c-di-GMP的水平,影响表型的同时也抑制了氯霉素抗性基因的表达。以上研究为PA0575基因对表型的影响奠定了基础。 展开更多

关键词 GGDEF/EAL结构域 PA0575转座子突变体 铜绿假单胞菌PAO1 环鸟苷二磷酸

原文传递

铜绿假单胞菌PAO1中c-di-GMP代谢相关基因PA2072的生物学分析 被引量：1

18

作者 席那仁 海娥 +2 位作者 张小敏 郭嘉义 黄卫东 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期2113-2126,共14页

【背景】铜绿假单胞菌为革兰氏阴性杆菌,是医院感染的常见条件致病菌之一。广泛存在于细菌中的第二信使分子环鸟苷二磷酸(cyclic-di-guanosine monophosphate,c-di-GMP)对细菌生理生化功能具有重要的调节作用。铜绿假单胞菌PAO1中存在参... 【背景】铜绿假单胞菌为革兰氏阴性杆菌,是医院感染的常见条件致病菌之一。广泛存在于细菌中的第二信使分子环鸟苷二磷酸(cyclic-di-guanosine monophosphate,c-di-GMP)对细菌生理生化功能具有重要的调节作用。铜绿假单胞菌PAO1中存在参与c-di-GMP代谢的基因PA2072。【目的】探讨铜绿假单胞菌PAO1中c-di-GMP代谢相关基因PA2072的生物学功能。【方法】运用PCR及分子克隆技术构建PA2072基因及各结构域的自杀载体,运用基因敲除方法获取PA2072基因的3个突变株;利用泳动性(swimming)、蜂群运动(swarming)、蹭行运动(twitching)和生物膜定量实验对细菌进行初步的表型分析,进一步通过刚果红染色法对菌株进行分析。【结果】成功构建PA2072基因敲除突变菌株及回补菌株;生物膜定量结果发现基因PA2072的敲除会影响细菌生物膜的形成,PA2072蛋白的不同结构域对生物膜的合成也起到了重要作用;细菌运动能力检测中发现PA2072相关基因的敲除对细菌运动能力也有一定影响。刚果红平板检测结果显示,与野生型PAO1菌株相比,PA2072敲除菌株菌苔呈红色,提示其胞内c-di-GMP含量升高。【结论】基因PA2072的敲除影响了铜绿假单胞菌胞的表型,可能由于铜绿假单胞菌胞内c-di-GMP水平变化引起,该结果为进一步研究基因PA2072的生物学功能奠定了基础。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌PAO1 环鸟苷二磷酸 PA2072敲除突变菌株

原文传递

铜绿假单胞菌PAO1中环二鸟苷单磷酸代谢蛋白PA0285感应环境因素的研究

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作者 海娥 张慧敏 +3 位作者 高晓菁 张小敏 郭嘉义 黄卫东 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第6期653-658,共6页

目的分析铜绿假单胞菌中环二鸟苷单磷酸(c-di-GMP)代谢蛋白PA0285感应环境因素的作用,探讨其参与c-di-GMP信号转导的机制。方法通过PCR技术对pa0285转座子突变菌株进行遗传背景确认;以铜绿假单胞菌野生型PAO1和2株PA0285插入失活突变菌... 目的分析铜绿假单胞菌中环二鸟苷单磷酸(c-di-GMP)代谢蛋白PA0285感应环境因素的作用,探讨其参与c-di-GMP信号转导的机制。方法通过PCR技术对pa0285转座子突变菌株进行遗传背景确认;以铜绿假单胞菌野生型PAO1和2株PA0285插入失活突变菌株为研究对象,选定24种化合物,利用绿色荧光蛋白(GFP)报告基因融合法及刚果红结合试验,检测细菌胞内c-di-GMP水平;通过生物膜定量试验分析特定环境因素对细菌生物膜形成的影响;使用CAS平板法进一步分析PA0285在特定环境条件下对细菌分泌嗜铁素的调控。结果细菌基因组PCR结果表明转座子插入致pa0285基因失活;GFP报告基因融合法、刚果红结合试验及生物膜定量检测结果显示,与野生型PAO1相比,突变菌Δpa0285胞内c-di-GMP水平升高(F=88.92,P<0.01),生物膜合成增加(F=15.82,P<0.01);将异亮氨酸(Ile)或缬氨酸(Val)添加至培养基时,突变菌Δpa0285胞内c-di-GMP水平与PAO1相比降低(F=15.17,60.17,P<0.01),生物膜合成与PAO1比较差异无统计学意义(F=3.462,0.5018,P=0.10001,0.6287)。CAS定量检测结果显示,与野生型PAO1相比,突变菌Δpa0285分泌嗜铁素含量下降(F=58.22,P<0.01);CAS平板观察结果显示,无外源化合物添加时,突变菌Δpa0285菌落的螯合圈与野生型PAO1相比偏小,将精氨酸(Arg)、MgCl2、CaCl2添加至培养基时,突变菌Δpa0285的菌落螯合圈与PAO1相比大小相近;将Val和Ile添加至培养基时,突变菌Δpa0285的菌落螯合圈与野生型PAO1相比偏大。结论铜绿假单胞菌PAO1中代谢蛋白PA0285具有磷酸二酯酶(PDE)的活性;PA0285通过调控胞内c-di-GMP水平,进而影响生物膜合成及嗜铁素的分泌,以感应环境中氨基酸Val和Ile。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌PAO1 PA0285蛋白 环二鸟苷单磷酸 环境信号

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奉献诚心 倾注真情——记全国优秀教师杨琼华

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作者 郭嘉义 《云南教育（小学教师）》 1991年第Z1期23-24,共2页

她把诚心奉献给学生,把热忱和关怀倾注给学生,在祖国教书育人的园地中,辛勤耕耘,默默奉献。她就是1989年被国家教委命名表彰的“优秀教师”杨琼华。一、引导1988年春季,杨琼华老师在江城学校接受了一个五年级班,发现有的学生受不健康的... 她把诚心奉献给学生,把热忱和关怀倾注给学生,在祖国教书育人的园地中,辛勤耕耘,默默奉献。她就是1989年被国家教委命名表彰的“优秀教师”杨琼华。一、引导1988年春季,杨琼华老师在江城学校接受了一个五年级班,发现有的学生受不健康的录相及淫秽书刊影响,班里出现了抽烟,赌钱、偷窃。 展开更多

关键词 杨琼华 第三天 五年级 杨老师 淫秽录相 杨红 伤寒病 少林功夫 文化科学知识 请医生

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