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烟草环斑病毒DB-RT-Realtime PCR检测方法研究 被引量：11
1
作者 郑耘 杨伟东 +4 位作者 陈枝楠 李明福 章桂明 余道坚 张永江 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期117-120,共4页
本研究首次应用直接结合反转录实时荧光PCR技术(direct binding reverse transcription realtime PCR,DB-RT-Re-altime PCR)检测烟草环斑病毒,由于综合运用了PCR管吸附病毒外壳蛋白、病毒核酸分子杂交、高灵敏度实时荧光PCR技术的优点,... 本研究首次应用直接结合反转录实时荧光PCR技术(direct binding reverse transcription realtime PCR,DB-RT-Re-altime PCR)检测烟草环斑病毒,由于综合运用了PCR管吸附病毒外壳蛋白、病毒核酸分子杂交、高灵敏度实时荧光PCR技术的优点,从而使病毒检测在特异性、灵敏度、稳定性等技术指标上比传统的DAS-ELISA方法都有所提高,解决了烟草环斑病毒检测工作中由于隐症、干扰物质存在而影响检测结果的问题,为病毒检测提供了一个快速、简便有效的检测方法。 展开更多
关键词 烟草环斑病毒 反转录PCR 检测
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香蕉抗病基因工程 被引量：10
2
作者 郑耘 肖火根 +1 位作者 李华平 范怀忠 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2003年第8期39-42,共4页
长期以来 ,香蕉生产遭受病害的严重威胁 ,制约了其发展 ,目前 ,随着转基因抗病香蕉基因工程技术的日趋成熟 ,为培育抗病香蕉品种开辟了新途径。
关键词 香蕉 抗病基因工程 转基因 育种
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李痘病毒适生区预测及模型选择 被引量：4
3
作者 郑耘 杨伟东 +4 位作者 章桂明 陈枝楠 陈富华 王颖 龙海 《植物检疫》 北大核心 2009年第3期1-4,共4页
李痘病毒是危害核果类果树的重要病原物,具有传播迅速的特点,已被多个国家列为检疫性有害生物。本文尝试利用Dymex模型和Maxent模型预测李痘病毒在中国的潜在适生区,通过试验验证和对预测模型技术参数AUC的比较分析,认定利用Maxent模型... 李痘病毒是危害核果类果树的重要病原物,具有传播迅速的特点,已被多个国家列为检疫性有害生物。本文尝试利用Dymex模型和Maxent模型预测李痘病毒在中国的潜在适生区,通过试验验证和对预测模型技术参数AUC的比较分析,认定利用Maxent模型预测的李痘病毒在中国的潜在适生区具有一定的科学性,对我国制定植物检疫法规具有一定的参考价值,同时也为今后其它植物病毒的定量风险分析工作提供有益的借鉴。 展开更多
关键词 李痘病毒 定量风险分析 Maxent模型
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香蕉束顶病毒NSP株系DNA组分5的克隆和序列分析 被引量：2
4
作者 郑耘 李华平 +1 位作者 肖火根 范怀忠 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期289-292,共4页
本文利用PCR技术扩增得到香蕉束顶病毒(BBTV)NSP株系DNA组分5的全基因,该基因全长为1 013 nt,具有一个开放阅读框,编码161个氨基酸.NSP株系与南太平洋组澳大利亚、夏威夷、埃及分离物DNA组分5核苷酸和编码的氨基酸序列相比较,核苷酸序... 本文利用PCR技术扩增得到香蕉束顶病毒(BBTV)NSP株系DNA组分5的全基因,该基因全长为1 013 nt,具有一个开放阅读框,编码161个氨基酸.NSP株系与南太平洋组澳大利亚、夏威夷、埃及分离物DNA组分5核苷酸和编码的氨基酸序列相比较,核苷酸序列同源率介于88%～89%之间,氨基酸序列同源率介于76%～79%之间,借助进化树分析和生物信息学研究方法,发现NSP株系组分5同样含有保守的与植物体内Rb蛋白结合的、能够调节寄主体内DNA复制相关蛋白积累的功能基序--LYCDE;并预测了蛋白质二级结构和性质. 展开更多
关键词 香蕉 束顶病毒 DNA-5组分 序列分析
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侵染唐菖蒲和百合3种病毒的多重RT-PCR检测方法 被引量：3
5
作者 郑耘 陈枝楠 +2 位作者 陈富华 毛海滨 李一农 《植物检疫》 北大核心 2010年第3期19-22,共4页
本文针对侵染百合和唐菖蒲的南芥菜花叶病毒、百合无症病毒和菜豆黄花叶病毒，建立了同时检测3种病毒的多重RT—PCR检测方法。该方法根据上述3种病毒保守的衣壳蛋白基因序列，设计特异性引物，优化了反应条件。通过对9种不同寄主和6种... 本文针对侵染百合和唐菖蒲的南芥菜花叶病毒、百合无症病毒和菜豆黄花叶病毒，建立了同时检测3种病毒的多重RT—PCR检测方法。该方法根据上述3种病毒保守的衣壳蛋白基因序列，设计特异性引物，优化了反应条件。通过对9种不同寄主和6种病毒的检测，验证该检测方法具有很高的特异性、稳定性，其灵敏度为植物总RNA稀释10^1～10^2倍。特别是，该方法缩短了检测周期，适合于植物病毒快速检测工作的需要。 展开更多
关键词 南芥菜花叶病毒 百合无症病毒 菜豆黄花叶病毒 PCR
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植物隔离检疫温室相关标准的气密性要求比较与探讨 被引量：2
6
作者 郑耘 卢小雨 +8 位作者 冯建军 张伟锋 张雪颖 康林 李芳荣 龙海 李一农 王红英 章桂明 《植物检疫》 北大核心 2012年第6期61-64,共4页
气密性是实验室生物安全的核心要求,是实现隔离检疫功能,防止有害生物发生逃逸的重要技术保证。为此,我国颁布的国家强制性标准《实验室生物安全通用要求》对医学体外和动物活体操作实验室的气密性要求做出了具体的规定。本文介绍了《... 气密性是实验室生物安全的核心要求,是实现隔离检疫功能,防止有害生物发生逃逸的重要技术保证。为此,我国颁布的国家强制性标准《实验室生物安全通用要求》对医学体外和动物活体操作实验室的气密性要求做出了具体的规定。本文介绍了《实验室生物安全通用要求》中气密性要求的主要内容和技术指标,并将其与多个植物隔离检疫温室标准和文献中的气密性要求进行比较,建议根据植物隔离检疫试验对象的特点,对植物隔离检疫温室的布局、设施设备和技术指标进行调整和补充,以利于植物隔离检疫温室的建设和管理。 展开更多
关键词 植物隔离检疫温室 标准 气密性
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香蕉束顶病毒NS株DNA组分5的克隆和序列分析 被引量：1
7
作者 郑耘 阮小蕾 +2 位作者 李华平 肖火根 范怀忠 《中国病毒学》 CAS CSCD 2005年第3期311-314,共4页
本文利用PCR技术扩增得到香蕉束顶病毒(BBTV)NS株DNA组分5的全基因,该基因全长为1014nt,具有一个开放阅读框,编码146个氨基酸,蛋白质二级结构包括6个α螺旋,7个β折叠。NS株系与南太平洋组澳大利亚、夏威夷、埃及分离物DNA组分5核苷酸... 本文利用PCR技术扩增得到香蕉束顶病毒(BBTV)NS株DNA组分5的全基因,该基因全长为1014nt,具有一个开放阅读框,编码146个氨基酸,蛋白质二级结构包括6个α螺旋,7个β折叠。NS株系与南太平洋组澳大利亚、夏威夷、埃及分离物DNA组分5核苷酸和编码的氨基酸序列相比较,核苷酸序列同源率介于88%～89%之间,氨基酸序列同源率介于80%～88%之间。NS株系与其它分离物在编码成视网膜细胞瘤蛋白(Retinoblastomaprotein,Rb)的基元序列“LXCDE”附近的二级结构上表现明显的差异,推测这种差异可能影响与植物中Rb蛋白的结合效率。 展开更多
关键词 香蕉束顶病毒 DNA组分5 序列分析
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香蕉束顶病毒复制酶和黄瓜花叶病毒衣壳蛋白融合基因植物表达载体的构建 被引量：1
8
作者 郑耘 李华平 +1 位作者 肖火根 范怀忠 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期18-21,共4页
利用重组PCR技术将香蕉束顶病毒的复制酶基因和黄瓜花叶病毒的衣壳蛋白基因融合重组,并与植物表达载体pBI121连接,构建了抗香蕉束顶病和香蕉花叶病的双价植物表达载体,通过冻融法转化载体入根癌农杆菌LBA4404,获得了工程农杆菌pBI121.F... 利用重组PCR技术将香蕉束顶病毒的复制酶基因和黄瓜花叶病毒的衣壳蛋白基因融合重组,并与植物表达载体pBI121连接,构建了抗香蕉束顶病和香蕉花叶病的双价植物表达载体,通过冻融法转化载体入根癌农杆菌LBA4404,获得了工程农杆菌pBI121.FBC,从而为培育抗病转基因香蕉品种奠定了基础. 展开更多
关键词 香蕉束顶病毒 黄瓜花叶病毒 融合基因
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李痘病毒及其风险分析 被引量：3
9
作者 郑耘 杨伟东 +2 位作者 陈枝楠 王颖 龙海 《植物检疫》 2008年第4期239-242,共4页
李痘病毒是危害核果类果树的重要病原物,具有传播迅速的特点,已被多个国家列为检疫性有害生物。本文对李痘病毒生物学特性等方面进行综述,通过分析该病毒的传播和定殖规律,并根据我国的具体生态情况,对其传入的可能性进行风险分析,结果... 李痘病毒是危害核果类果树的重要病原物,具有传播迅速的特点,已被多个国家列为检疫性有害生物。本文对李痘病毒生物学特性等方面进行综述,通过分析该病毒的传播和定殖规律,并根据我国的具体生态情况,对其传入的可能性进行风险分析,结果认定其传入的可能性较大,需要制定严格的检疫措施,严防传入中国。 展开更多
关键词 李痘病毒 风险分析
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负压型植物隔离检疫温室的给排水系统设计及其生物安全性评价 被引量：1
10
作者 郑耘 龙海 +5 位作者 冯建军 王红英 卢小雨 张伟锋 徐浪 余道坚 《植物检疫》 北大核心 2015年第4期7-10,共4页
给排水系统的消毒处理部分是植物隔离检疫温室生物安全性的重要保障,可防止有害生物随水发生逃逸,或产生交叉污染,对于保证试验的可靠性、准确性以及确保生态安全具有重要的意义。本文根据负压型植物隔离检疫温室的特点设计了给排水系统... 给排水系统的消毒处理部分是植物隔离检疫温室生物安全性的重要保障,可防止有害生物随水发生逃逸,或产生交叉污染,对于保证试验的可靠性、准确性以及确保生态安全具有重要的意义。本文根据负压型植物隔离检疫温室的特点设计了给排水系统,其消毒处理部分采用砂石沉淀、活性炭、反渗透、超滤、紫外和臭氧等多种方式消毒处理有害生物,初步建立了给排水系统的生物安全评价指标。试验检测结果表明,消毒处理部分可有效处理全部有害生物,符合实验室生物安全要求。 展开更多
关键词 植物隔离检疫温室 给排水系统 消毒处理 生物安全评价
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荷兰进口百合中检出百合无症病毒 被引量：1
11
作者 郑耘 陈富华 +2 位作者 崔澍 陈枝楠 吴琼 《植物检疫》 2005年第3期158-159,共2页
本文采用DAS- ELISA、RT- PCR方法从隔离试种的进口荷兰百合中检出百合无症病毒,并通过对RT- PCR产物进行序列分析验证,确认进口的百合携带有百合无症病毒(LSV)。
关键词 病毒 进口 检出 DAS-ELISA RT-PCR方法 RT-PCR产物 荷兰百合 隔离试种 序列分析
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负压型植物隔离检疫温室的气密性设计及其效果评价 被引量：1
12
作者 郑耘 张伟锋 +6 位作者 卢小雨 张雪颖 王红英 龙海 康林 刘建 章桂明 《植物检疫》 北大核心 2013年第5期14-16,共3页
植物隔离检疫温室的通风系统和围护结构是防止有害生物发生逃逸和交叉污染的重要技术屏障。深圳局根据国家标准"实验室生物安全通用要求(GB 19489)"和"隔离检疫圃分级(GB/T 23415-2009)"等的要求建设了一座负压型... 植物隔离检疫温室的通风系统和围护结构是防止有害生物发生逃逸和交叉污染的重要技术屏障。深圳局根据国家标准"实验室生物安全通用要求(GB 19489)"和"隔离检疫圃分级(GB/T 23415-2009)"等的要求建设了一座负压型植物隔离检疫温室。本文详细介绍了该负压型植物隔离检疫温室的通风系统和围护结构的组件、材料和施工工艺等情况,经检测其气密性效果符合负压型植物隔离检疫温室的要求。同时,针对植物隔离检疫温室的特殊性,探讨了其气密性检测项目和设计中的技术要求,从而为负压型植物隔离检疫温室的建设提供了一个实例。 展开更多
关键词 植物隔离检疫温室 气密性 效果评价
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鳄梨日斑类病毒研究进展 被引量：1
13
作者 郑耘 陈枝楠 +2 位作者 陈富华 李一农 娄定风 《植物检疫》 北大核心 2010年第6期42-44,共3页
鳄梨日斑类病毒是引起鳄梨日斑病害的病原物,可侵染樟科植物,造成严重的经济损失,是我国规定的进境植物检疫性有害生物。本文对该类病毒侵染寄主后的症状、地理分布、病原特性、检测方法和检疫措施等方面的研究进展进行了综述。
关键词 鳄梨日斑类病毒 研究进展
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从印度进口的洋葱中检出洋葱黄矮病毒 被引量：1
14
作者 郑耘 陈枝楠 +1 位作者 杨伟东 吴绍精 《植物检疫》 2007年第4期212-214,共3页
本文报道了从印度进口的洋葱中检出洋葱黄矮病毒。从印度进口的洋葱种球经过隔离试种,有1株洋葱幼苗发生整株矮化,叶片出现无规则的黄色条纹、皱缩等症状,经DAS—ELISA、RT-PCR检测和序列分析验证,确认该批从印度进口的洋葱鳞球茎中携... 本文报道了从印度进口的洋葱中检出洋葱黄矮病毒。从印度进口的洋葱种球经过隔离试种,有1株洋葱幼苗发生整株矮化,叶片出现无规则的黄色条纹、皱缩等症状,经DAS—ELISA、RT-PCR检测和序列分析验证,确认该批从印度进口的洋葱鳞球茎中携带有洋葱黄矮病毒(Onion yellow dwarfvirus)。 展开更多
关键词 洋葱黄矮病毒 RT-PCR DAS-ELISA
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从进境的唐菖蒲中检出菜豆黄花叶病毒 被引量：1
15
作者 郑耘 陈富华 +1 位作者 洪崇高 陈枝楠 《植物检疫》 2005年第6期357-359,共3页
本文将荷兰进口的唐菖蒲种球进行隔离试种,通过症状观察,从中发现一株唐菖蒲幼苗叶片出现花叶症状,经DAS-ELISA,RT-PCR检测和序列分析验证,确认该批从荷兰进口的唐菖蒲鳞球茎中携带有菜豆黄花叶病毒(Beanyellowmosaicvirus,BYMV)。
关键词 菜豆黄花叶病毒 RT-PCR 唐菖蒲
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MTT比色法在测定细胞活性中的影响因素 被引量：5
16
作者 郑耘 杨善民 +1 位作者 颜江华 陈瑞川 《福建医学院学报》 1995年第2期195-198,共4页
ＭＴＴ比色法在测定细胞活性中的影响因素郑耘，杨善民，颜江华，陈瑞川关键词：ＭＴＴ，甲化合物，细胞活性细胞活性检测试验一直是肿瘤药敏实验中的一项常规工作，目前采用的方法有多种，其中关于染色法、同位素法、集落形成法的研究... ＭＴＴ比色法在测定细胞活性中的影响因素郑耘，杨善民，颜江华，陈瑞川关键词：ＭＴＴ，甲化合物，细胞活性细胞活性检测试验一直是肿瘤药敏实验中的一项常规工作，目前采用的方法有多种，其中关于染色法、同位素法、集落形成法的研究较多，由于这些方法均有不少缺点，使... 展开更多
关键词 MTT 甲Za化合物 细胞活性 比色法 肿瘤 药敏试验
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一种适应亚热带海洋性气候特点的隔离检疫温网室 被引量：1
17
作者 郑耘 张雪颖 +2 位作者 杨伟东 陈枝楠 谭彦彩 《植物检疫》 2007年第1期7-9,共3页
按照隔离检疫温网室标准建设要求,深圳出入境检验检疫局建成一座设施完备、隔离条件严格的隔离检疫温网室。在建设中,考虑到深圳地处亚热带海洋性气候,高温高湿天气持续时间较长的特点,针对性地采用4种降温方法控制温度,解决了夏季高温... 按照隔离检疫温网室标准建设要求,深圳出入境检验检疫局建成一座设施完备、隔离条件严格的隔离检疫温网室。在建设中,考虑到深圳地处亚热带海洋性气候,高温高湿天气持续时间较长的特点,针对性地采用4种降温方法控制温度,解决了夏季高温难以控制的问题。同时,还采用计算机自动控制温度、湿度、光照、施肥、浇水等相关设备。通过半年时间的运行,所有设备运行稳定,确保了检疫和科研工作的顺利进行,并为同类温网室建设提供了有益的借鉴。 展开更多
关键词 隔离检疫温网室 亚热带海洋性气候
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过氧化物酶(PO)与甜瓜抗病性关系研究初报 被引量：4
18
作者 郑耘 王纯利 +1 位作者 程路明 陈富华 《长江蔬菜》 2002年第5期33-33,共1页
对不同抗病类型的甜瓜品系在接种白粉菌前后叶片内过氧化物酶(PO)变化进行研究,阐明其在抗病性中的作用,为抗性材料的筛选及抗病育种提供生理生化方面的鉴定依据。
关键词 过氧化物酶 甜瓜 抗病性 相关性 白粉病
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从盐田局送检的百合种球中检出百合斑驳病毒
19
作者 郑耘 陈富华 +2 位作者 崔澍 陈枝楠 吴琼 《植物检疫》 2005年第5期304-304,共1页
关键词 百合斑驳病毒 百合种球 盐田 PCR检测方法 PCR扩增产物 GENBANK 特异性扩增 检出 多聚蛋白基因 病毒检测
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负压型植物隔离检疫温室空气过滤器的生物安全性评价
20
作者 郑耘 张伟锋 +5 位作者 卢小雨 徐浪 龙海 王红英 林伟 余道坚 《植物检疫》 北大核心 2015年第6期32-34,共3页
空气过滤器可防止有害生物随气体传播或逃逸,是植物隔离检疫温室生物安全性的重要保障。本文根据负压型植物隔离检疫温室的特点,设计了送排风子系统的空气过滤器布局方案,选择了可耐高温、高湿、阳光直射、紫外线和农药消毒处理的空气... 空气过滤器可防止有害生物随气体传播或逃逸,是植物隔离检疫温室生物安全性的重要保障。本文根据负压型植物隔离检疫温室的特点,设计了送排风子系统的空气过滤器布局方案,选择了可耐高温、高湿、阳光直射、紫外线和农药消毒处理的空气过滤器。经过一年的隔离检疫实际操作。经检测,送排风子系统的空气过滤器对隔离种植的各类有害生物的过滤效果达到99.99%,符合"实验室生物安全通用要求"国家标准的生物安全性要求。该温室空气过滤器的布局方案可为同类型植物隔离检疫温室建设提供有益的借鉴。 展开更多
关键词 隔离检疫温室 空气过滤器 生物安全性
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