化学发光酶免疫分析法检测食品中赭曲霉毒素 被引量：8

1

作者 邱云青 王伟 李凤琴 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第24期432-435,共4页

目的:建立检测食品中赭曲霉毒素(OA)快速灵敏化学发光酶免疫方法。方法:采用棋盘滴定法确定OA-BSA抗原的包被质量浓度、包被量以及一抗和二抗的工作稀释度,建立间接竞争抑制曲线,确定线性范围、检出限和回收率。结果:确定的检测工作条件... 目的:建立检测食品中赭曲霉毒素(OA)快速灵敏化学发光酶免疫方法。方法:采用棋盘滴定法确定OA-BSA抗原的包被质量浓度、包被量以及一抗和二抗的工作稀释度,建立间接竞争抑制曲线,确定线性范围、检出限和回收率。结果:确定的检测工作条件为:OA-BSA最佳包被质量浓度60ng/mL,抗OA单克隆抗体的最佳工作稀释度1:400,校正曲线线性范围6～400ng/mL,赭曲霉毒素的检出限为0.02ng/mL,50%抑制质量浓度145ng/mL,在100～2000ng/g添加水平的回收率范围为83.6%～105.8%。用所建方法对质控样品进行了分析,检测结果符合率达到100%。结论:所建方法准确、灵敏,适用于食品中OA的筛选。 展开更多

关键词 赭曲霉毒素 化学发光酶免疫分析 检测

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化学发光免疫分析技术在食品有害因素检测中的应用 被引量：12

2

作者 邱云青 李凤琴 《国外医学（卫生学分册）》 北大核心 2009年第6期371-374,共4页

国内屡屡发生的食物中毒和食品污染事件、国际间食品贸易危机和以食品为载体的生物恐怖事件,使食品安全成为政府和公众关注的焦点。创建并研制食品中有害物质现场快速检测技术和装备,对开展食品、中毒样品中有害残留的连续、动态现场监... 国内屡屡发生的食物中毒和食品污染事件、国际间食品贸易危机和以食品为载体的生物恐怖事件,使食品安全成为政府和公众关注的焦点。创建并研制食品中有害物质现场快速检测技术和装备,对开展食品、中毒样品中有害残留的连续、动态现场监控具有重要意义。本文就化学发光免疫分析技术基本原理及其在食品有害因素现场快速检测中的应用进行综述。 展开更多

关键词 化学发光免疫法 食品 有害因素 检测

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采用基因打靶技术构建结核分枝杆菌新基因Rv0901缺失株的研究 被引量：1

3

作者 邱云青 鲍朗 +3 位作者 赵计林 赵明才 张会东 吴悦涵 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期1507-1510,共4页

目的 :利用基因打靶技术构建基因打靶载体和基因缺失株 ,用于结核分枝杆菌基因Rv0 90 1功能的研究。方法 :结核分枝杆菌标准株H37Rv体外培养 ,对其Rv0 90 1基因及两侧序列进行体外扩增 ,连接载体及目的片段 ,切除目的基因 ,再引入筛选... 目的 :利用基因打靶技术构建基因打靶载体和基因缺失株 ,用于结核分枝杆菌基因Rv0 90 1功能的研究。方法 :结核分枝杆菌标准株H37Rv体外培养 ,对其Rv0 90 1基因及两侧序列进行体外扩增 ,连接载体及目的片段 ,切除目的基因 ,再引入筛选标志构建重组自杀质粒 ,分别用酶切及PCR鉴定 ;用电穿孔法将重组自杀质粒转入结核杆菌H37Rv株 ,用PCR鉴定。结果 :经鉴定PCR产物及插入片段大小与预期值相符 ,且为所需目的基因片段 ,成功切除靶片段 ;蓝白斑筛选证实标记基因插入片段插入方向正确 ;Rv0 90 1基因缺失株用PCR鉴定成功缺失了目的基因片段 2 5kb。结论 :成功构建了用于结核分枝杆菌基因打靶的置换型载体和Rv0 90 1新基因缺失株 ,为Rv0 90 展开更多

关键词 基因敲除 基因 Rv0901 分枝杆菌 结核

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邱云青的诗

4

作者 邱云青 《唐山文学》 2017年第9期157-157,共1页

烟雨南湖，芰荷故友，一杯相属清欢。径桥于曲，微伫近鸥边。 倾座丝弦正沸，风华绝、泥醉梨园。萦梁久，融融语笑，何异浣林泉。

关键词 满庭芳 雅集 唐山 端午

原文传递

结核分支杆菌Rv0901基因置换型打靶载体的构建 被引量：2

5

作者 邱云青 鲍朗 +2 位作者 赵计林 赵明才 张会东 《四川生理科学杂志》 2003年第1期21-24,共4页

目的 :对结核杆菌H3 7Rv的Rv0 90 1基因进行体外扩增 ,构建基因打靶载体 ,利用基因打靶技术进行结核分支杆菌基因Rv0 90 1功能的研究。方法 :结核分支杆菌标准毒力株H3 7Rv体外培养 ,扩增目的基因 ,连接载体及目的片段 ,切除目的基因 ,... 目的 :对结核杆菌H3 7Rv的Rv0 90 1基因进行体外扩增 ,构建基因打靶载体 ,利用基因打靶技术进行结核分支杆菌基因Rv0 90 1功能的研究。方法 :结核分支杆菌标准毒力株H3 7Rv体外培养 ,扩增目的基因 ,连接载体及目的片段 ,切除目的基因 ,筛选阳性克隆 ,酶切鉴定。结果 :经酶切鉴定PCR产物及插入片段大小与预期值相符 ,鉴定证实PCR产物及插入片段为所需目的基因片段 ,成功切除靶片段。证实标记基因插入片段插入方向正确。结论 :成功构建了用于结核分支杆菌基因打靶的置换型载体 ,为随后将进行的Rv0 90 1基因敲除株的建立 ,Rv0 90 1基因功能的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 结核分支杆菌 Rv090l基因 基因敲除 基因打靶

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MBL免疫治疗结核病小鼠的实验研究

6

作者 邱云青 田苗 +1 位作者 张海青 李传友 《中国防痨杂志》 CAS 2007年第6期495-498,575,共5页

目的观察甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)对结核分枝杆菌感染小鼠的免疫治疗作用。方法将BALB/c小鼠18只随机分成MBL免疫治疗组、微卡治疗组和结核菌感染对照组,每组6只。小鼠感染结核分枝杆菌后第14、21、28 d各组腹腔... 目的观察甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)对结核分枝杆菌感染小鼠的免疫治疗作用。方法将BALB/c小鼠18只随机分成MBL免疫治疗组、微卡治疗组和结核菌感染对照组,每组6只。小鼠感染结核分枝杆菌后第14、21、28 d各组腹腔内分别注射MBL、微卡和生理盐水。治疗结束后第3周处死小鼠,观测各组小鼠体质量以及肺、脾脏湿重,观察肺脏病理改变,取肺、脾组织进行结核菌培养和菌落计数。结果治疗后第3周,治疗组小鼠体质量和脾脏质量高于对照组,肺脏质量低于对照组,且肺部病变较轻。MBL减轻结核病小鼠体质量下降,减少结核病小鼠肺和脾脏结核菌数量。结论MBL对结核病小鼠具有一定的免疫治疗作用。 展开更多

关键词 甘露聚糖结合凝集素 结核/治疗 免疫疗法

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MBL免疫治疗结核病小鼠的实验研究

7

作者 邱云青 田苗 +1 位作者 张海青 李传友 《结核病与胸部肿瘤》 2007年第4期255-259,共5页

目的观察甘露聚糖结合凝集素（mannan-bindinglectin,MBL）对结核分枝汗菌感染小鼠的免疫治疗作用。方法将BALB／c小鼠18只随机分成MBL免疫治疗组、微卡治疗组和结核菌感染对照组．每组6只。小鼠感染结核分枝杆菌．感染2周后分3次分别... 目的观察甘露聚糖结合凝集素（mannan-bindinglectin,MBL）对结核分枝汗菌感染小鼠的免疫治疗作用。方法将BALB／c小鼠18只随机分成MBL免疫治疗组、微卡治疗组和结核菌感染对照组．每组6只。小鼠感染结核分枝杆菌．感染2周后分3次分别腹腔内注射MBL、微卡或生理盐水。治疗结束后第3周处死小鼠，观测小鼠体重以及肺、脾脏湿重，观察肺脏病理改变，取肺、脾组织进行结核菌培养和菌落计数。结果治疗后第3周，治疗组小鼠体重和脾脏重量高于对照组，肺脏重量低于对照组，且肺部病变较轻。MBL减轻结核病小鼠体重下降．减少结核病小鼠肺和脾脏结核菌数量。结论MBL对结核病小鼠具有一定的免疫治疗作用。 展开更多

关键词 甘露聚糖结合凝集素 结核病 小鼠 免疫治疗

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北京昌平区北京/W系结核分枝杆菌的流行特征 被引量：6

8

作者 高铁杰 李卫民 +9 位作者 刘毅 张治国 周辉 邱云青 田苗 张旭霞 张建源 韩跃飞 高峰 李传友 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2010年第1期47-50,共4页

目的:探讨北京/W系结核分枝杆菌在北京市昌平区的流行特征。方法:连续收集北京市昌平区2004年1月1日至2006年12月31日的结核分枝杆菌分离株336株,采用Spoligotyping和多重PCR法对其进行分型及亚分型;同时采用谱系定义靶标RD105、RD181、... 目的:探讨北京/W系结核分枝杆菌在北京市昌平区的流行特征。方法:连续收集北京市昌平区2004年1月1日至2006年12月31日的结核分枝杆菌分离株336株,采用Spoligotyping和多重PCR法对其进行分型及亚分型;同时采用谱系定义靶标RD105、RD181、RD150、RD142和Real-timePCR方法进行分型和亚分型,并分析北京/W系的2个亚系与其对应患者年龄、出生地、抗结核药物敏感谱和卡介苗(BCG)接种情况之间的关系。结果:2种方法对该地区结核分枝杆菌分型及亚分型结果完全一致,均为:299株为北京/W系和37株为非北京/W系结核分枝杆菌;在北京/W系结核分枝杆菌中,存在RD181的非典型北京菌株47株(15.7%),而相对现代的缺失RD181的W菌/典型北京家族菌株252株(84.3%);在W菌/典型北京家族菌株中,RD150和RD142缺失的菌株分别为168和173株。W菌/典型北京家族菌株和非典型北京菌株2个亚系的分布与患者出生地、BCG接种情况、年龄以及抗结核药物敏感谱(链霉素、异烟肼、利福平和乙胺丁醇)均无关(χ2分别为0.530、1.623、2.180、<0.001、0.849、0.038和0.006,P均>0.05)。结论:初步绘制出北京市昌平区结核分枝杆菌的系统进化树,其中北京/W系呈现较为明显的优势。北京/W系中较现代的W菌/典型北京家族菌株又占明显优势。以RD105为靶标的Real-timePCR方法鉴定北京/W系结核分枝杆菌快速、准确。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 北京/W系 进化树 北京 流行病学

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健康成人牛奶不耐受症的研究 被引量：4

9

作者 曾果 黄承钰 +2 位作者 邱云青 聂伟 强鸥 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期28-29,共2页

采用问卷调查和氢呼气试验（ＨＢＴ）对健康成人牛奶不耐受及其影响因素进行了研究。调查结果表明：总饮奶率为９０％；饮奶后不耐受症状发生率为３９．０％，症状多为轻度和偶尔出现，不耐受症状发生率与饮奶量、是否同时进食其他食物... 采用问卷调查和氢呼气试验（ＨＢＴ）对健康成人牛奶不耐受及其影响因素进行了研究。调查结果表明：总饮奶率为９０％；饮奶后不耐受症状发生率为３９．０％，症状多为轻度和偶尔出现，不耐受症状发生率与饮奶量、是否同时进食其他食物以及进食食物的种类有关，与饮奶者的年龄、性别和饮奶时间无相关关系；导致不饮奶的原因以非牛奶不耐受因素为主。ＨＢＴ结果显示：牛奶乳糖吸收不良率为７７．８％（饮２５０ｇ牛奶），牛奶乳糖不耐受率为５．６％。 展开更多

关键词 成人 牛奶 不耐受症状 调查

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脂多糖对感染卡介苗巨噬细胞表达细胞因子影响的研究 被引量：2

10

作者 李传友 刘忠泉 +5 位作者 李卫民 邱云青 郭艳玲 韩喜琴 葛建忠 端木宏谨 《中国防痨杂志》 CAS 北大核心 2004年第3期133-135,138,共4页

目的　探讨脂多糖 (LPS)对感染卡介苗巨噬细胞表达细胞因子的影响。方法　用ELISA方法比较单独巨噬细胞组 ,巨噬细胞 +卡介苗 +LPS组 ,巨噬细胞 +卡介苗组以及巨噬细胞 +LPS组细胞因子表达的差异。结果　单纯巨噬细胞组产生较少量的IL 1... 目的　探讨脂多糖 (LPS)对感染卡介苗巨噬细胞表达细胞因子的影响。方法　用ELISA方法比较单独巨噬细胞组 ,巨噬细胞 +卡介苗 +LPS组 ,巨噬细胞 +卡介苗组以及巨噬细胞 +LPS组细胞因子表达的差异。结果　单纯巨噬细胞组产生较少量的IL 12 ,TNF α ,LPS能刺激巨噬细胞组特别是感染卡介苗巨噬细胞组产生大量的IL 12 ,TNF α。与单纯巨噬细胞组相比 ,LPS也不能有效地刺激巨噬细胞产生更多的IL 1,IL 2 ,IL 18和IFN γ。结论　LPS能诱导巨噬细胞 (包括卡介苗感染巨噬细胞 )产生更多的TNF α和IL 12 ,而有利于宿主的免疫应答。 展开更多

关键词 脂多糖 卡介苗 巨噬细胞 细胞因子 结核病

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结核分枝杆菌黏附素HBHA的克隆表达及其免疫原性研究 被引量：2

11

作者 李传友 张旭霞 +6 位作者 张健源 李卫民 田苗 邱云青 孙照刚 李妍 端木宏谨 《首都医科大学学报》 CAS 2006年第2期162-165,共4页

目的应用克隆表达技术从大肠杆菌中获得重组的结核分枝杆菌黏附素HBHA蛋白,并以HBHA免疫小鼠观察抗HBHA抗体的产生并探讨其免疫原性。方法1)应用PCR技术扩增结核分枝杆菌hbhA编码基因的特异片段。2)结核分枝杆菌hbhA编码基因的克隆及在... 目的应用克隆表达技术从大肠杆菌中获得重组的结核分枝杆菌黏附素HBHA蛋白,并以HBHA免疫小鼠观察抗HBHA抗体的产生并探讨其免疫原性。方法1)应用PCR技术扩增结核分枝杆菌hbhA编码基因的特异片段。2)结核分枝杆菌hbhA编码基因的克隆及在大肠杆菌中的表达。3)应用克隆表达的HBHA蛋白免疫小鼠,并用ELISA法测定小鼠血清抗HBHA抗体水平。结果1)结核分枝杆菌hbhA基因成功地克隆到PET-32 a(+)表达载体中,并在大肠杆菌中获得了高效表达。重组HBHA主要存在于包涵体中,纯化包涵体并获得了大量的重组HBHA。2)重组HBHA免疫小鼠可产生较高水平的抗HBHA抗体(>1∶102 400),表明重组HBHA在纯化过程中仍保留较强的免疫原性。结论结核分枝杆菌黏附素HBHA具有较好的免疫原性。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 黏附素 表达 免疫原性

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结核分枝杆菌天然黏附素HBHA的制备及其检测应用 被引量：2

12

作者 张旭霞 孙照刚 +6 位作者 李妍 刘洋 李卫民 邱云青 张健源 端木宏谨 李传友 《结核病与胸部肿瘤》 2006年第4期248-252,共5页

目的探讨HBHA在ELISA检测结核病方面的应用。方法将BCG培养至稳定生长期将其苏通培养基上清通过CL-6B层折柱．利用含NaCL的PBS溶液梯度洗脱得到天然HBHA．然后以纯化的天然HBHA蛋白和原核表达的HBHA蛋白为包被抗原分别对肺结核组、肺外... 目的探讨HBHA在ELISA检测结核病方面的应用。方法将BCG培养至稳定生长期将其苏通培养基上清通过CL-6B层折柱．利用含NaCL的PBS溶液梯度洗脱得到天然HBHA．然后以纯化的天然HBHA蛋白和原核表达的HBHA蛋白为包被抗原分别对肺结核组、肺外结核组、PPD阳性和PPD阴性健康对照组血清各47例进行ELISA检测抗HBHA抗体水平。结果在进行梯度洗脱时含有375mMNaCL的PBS洗脱液可以获得较纯的天然HBHA蛋白。ELISA检测结果表明肺结核组和肺外结核组的血清抗体水平高于PPD阳性和PPD阴性健康对照组（x^2=36．48，P〈0．01），肺结核组和肺外结核组之间（x^2=0.27。P〉0．05）、PPD阳性和PPD阴性健康对照组之间（x^2=0．30，P〉0.05）血清抗体水平没有显著差异。结论利用天然HBHA蛋白和重组HBHA蛋白进行ELISA结核病诊断都具有较高的特异性和敏感性，可以较好地用于结核病的诊断。以天然HBHA为基础的血清学诊断方法具有更好的敏感性和特异性。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 结核 天然HBHA蛋白 结核病 诊断

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用变性高压液相色谱技术检测耐氧氟沙星的结核分枝杆菌临床株 被引量：1

13

作者 孙照刚 张健源 +6 位作者 张旭霞 李妍 邱云青 田苗 刘毅 聂理会 李传友 《结核病与胸部肿瘤》 2007年第1期30-35,共6页

目的利用变性高压液相色谱（DHPLC）技术快速检测结核分枝杆菌gyrA基因的突变，从而对结核分枝杆菌是否耐受氟喹诺酮类药物做出初步判断。方法提取试验菌株基因组DNA，扩增gyrA基因的氟喹诺酮药物耐受决定区（QRDR）核酸片段；分别与H3... 目的利用变性高压液相色谱（DHPLC）技术快速检测结核分枝杆菌gyrA基因的突变，从而对结核分枝杆菌是否耐受氟喹诺酮类药物做出初步判断。方法提取试验菌株基因组DNA，扩增gyrA基因的氟喹诺酮药物耐受决定区（QRDR）核酸片段；分别与H37Rv标准株（或者含有单纯Ser284突变的临床分离株作为标准）的相应PCR产物混合、杂交后，利用WAVE核苷酸片段分析系统对各杂交产物进行DHPLC检测；序列测定结果与相应的DHPLC检测结果进行比较以验证DHPLC检测的准确性。采用2mg/L的药物浓度进行氧氟沙星（OFLX）药物敏感性试验，确定101株结核分枝杆菌临床分离株对OFLX的敏感性，通过比较药物敏感性和DHPLC检测结果，建立两者之间的对应关系。结果利用DHPLC检测QRDR突变与序列测定具有同样的检出率（100％），两者都能够很好地检测QRDR突变。采用单纯含有Ser284突变的临床分离株代替H37Rv作为标准进行DHPLC检测，可以检测出除Ser284突变点外所有的点突变形式。在101株结核分枝杆菌临床分离株中，有49株对2mg／L OFLX敏感；52株耐受。52株耐药菌株中，有27株能够通过序列测定和DHPLC法得到准确判定。采用含有单纯Ser284突变的临床分离株作为标准进行DHPLC检测菌株的耐药性，检测结果更准确。结论DHPLC法是快速检测出结核分枝杆菌gyrA基因碱基突变的好方法，但是碱基突变与结核分枝杆菌是否耐受氟喹诺酮类药物存复杂的关系，因此该方法应用于临床检测尚需进一步验证。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 GYRA基因 突变

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实时荧光定量PCR检测耐药结核分枝杆菌中耐药相关基因whiB7的表达 被引量：1

14

作者 孙照刚 张旭霞 +6 位作者 张健源 柴利泉 李妍 田苗 李卫民 邱云青 李传友 《结核病与胸部肿瘤》 2006年第4期243-247,共5页

目的探讨结核分枝杆菌耐药性与whiB7基因表达水平之间的关系。方法以耐受利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇和氟喹诺酮的结核分枝杆菌临床分离株为研究对象。利用实时定量PCR的方法．检测药物刺激结核分枝杆菌后whiB7基因表达水平的变... 目的探讨结核分枝杆菌耐药性与whiB7基因表达水平之间的关系。方法以耐受利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇和氟喹诺酮的结核分枝杆菌临床分离株为研究对象。利用实时定量PCR的方法．检测药物刺激结核分枝杆菌后whiB7基因表达水平的变化。结果除利福平刺激相应的菌株后。whiB7基因的表达水平变化不明显外．其余药物的刺激均会引起结核分枝杆菌耐约株的whiB7基因表达水平发生显著变化。结论结核分枝杆菌的whiB7基因是对多种抗生素刺激发生反应的基因。推测whiB7的表达参与结核分枝杆菌的耐药过程。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核/抗药性 whiB7基因

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分枝杆菌分泌蛋白及膜蛋白的分离

15

作者 田苗 邱云青 李传友 《中国防痨杂志》 CAS 2006年第S1期87-87,共1页

目的探讨一种新发现的分枝杆菌Mycobac- terium Immunogenum分泌蛋白及膜蛋白的分离方法。方法1用7H9液体培养基培养分枝杆菌Mycobac- terium Immunogenum。2膜蛋白的分离采用酶消化及超声的方法。3分泌蛋白的分离采用Millipore公司的... 目的探讨一种新发现的分枝杆菌Mycobac- terium Immunogenum分泌蛋白及膜蛋白的分离方法。方法1用7H9液体培养基培养分枝杆菌Mycobac- terium Immunogenum。2膜蛋白的分离采用酶消化及超声的方法。3分泌蛋白的分离采用Millipore公司的蛋白质浓缩滤器多次离心浓缩获得。4对分离的分枝杆菌Mycobacterium 展开更多

关键词 分泌蛋白 分枝杆菌 膜蛋白 分离方法 两种方法 新发现 液体培养基 酶消化 蛋白质 离心浓缩

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脂多糖对感染卡介苗巨噬细胞表达细胞因子影响的研究．

16

作者 李传友 刘忠泉 +5 位作者 李卫民 邱云青 郭艳玲 韩喜琴 葛建忠 端木宏谨 《结核病与胸部肿瘤》 2004年第3期182-186,共5页

目的 探讨脂多糖(LPS)对感染卡介苗巨噬细胞表达细胞因子的影响。方法 用ELISA方法比较单独巨噬细胞组。巨噬细胞+卡介苗+LPS组，巨噬细胞+卡介苗组以及巨噬细胞+LPS组细胞因子表达的差异。结果 单纯巨噬细胞产生较少量的IL-12，TNF-α... 目的 探讨脂多糖(LPS)对感染卡介苗巨噬细胞表达细胞因子的影响。方法 用ELISA方法比较单独巨噬细胞组。巨噬细胞+卡介苗+LPS组，巨噬细胞+卡介苗组以及巨噬细胞+LPS组细胞因子表达的差异。结果 单纯巨噬细胞产生较少量的IL-12，TNF-α，LPS能刺激巨噬细胞组特别是感染卡介苗巨噬细胞组产生大量的IL-12，TNF-α。与单纯巨噬细胞组相比，LPS也不能有效地刺激巨噬细胞产生更多的IL-1，IL-2，IL-18和IFN-γ。结论 LPS能诱导巨噬细胞(包括卡介苗感染巨噬细胞)产生更多的TNF-α和IL-12，而有利于宿主的免疫应答。提示LPS及其同系物有潜力作为抗结核药物和疫苗或其佐剂。 展开更多

关键词 巨噬细胞 卡介苗 LPS 感染 IL-12 TNF-α 脂多糖 细胞因子 表达 刺激

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PCR-SSOP并Southern杂交检测实验室筛选耐氧氟沙星结核分枝杆菌的研究

17

作者 张健源 王甦民 +7 位作者 李传友 田苗 张旭霞 赵冰 李卫民 赵雁林 邱云青 马玙 《结核病与胸部肿瘤》 2004年第3期212-216,共5页

目的 探讨PCR-SSCP并Southern杂交检测耐氧氟沙星(OFLX)结核分枝杆菌的可行性，并探索结核分枝杆菌对OFLX敏感与耐药的界限。方法 ①体外诱导筛选耐OFLX的自然突变株，并检测OFLX对这些耐药株的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)；... 目的 探讨PCR-SSCP并Southern杂交检测耐氧氟沙星(OFLX)结核分枝杆菌的可行性，并探索结核分枝杆菌对OFLX敏感与耐药的界限。方法 ①体外诱导筛选耐OFLX的自然突变株，并检测OFLX对这些耐药株的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)；②扩增结核分枝杆菌的gyrA基因(包括H37Rv、H37Ra、临床分离的OFLX敏感株及体外诱导筛选的耐OFLX的菌株)并对此扩增产物进行单链构象多态性(SSCP)分析及Southern杂交，以判定应用该技术的效果。结果经PCR-SSCP及Southern杂交检测，85株体外诱导的自然耐OFLX菌株，均检测到gyrA基因突变。研究发现．在OFLX 10μg／ml这一点上，明显地存在着一个耐OFLX结核分枝杆菌对OFLX敏感与耐药并存的交叉区。结论PCR-SSCP合并Southern杂交可清晰地区分OFLN敏感与耐药株。本研究结果显示，以10μg／ml为界作，为判别耐OFLX的标准是适宜的。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 SOUTHERN杂交 体外诱导 氧氟沙星 耐药株 PCR-SSCP 筛选 MBC 敏感株 PCR-SSOP

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结核分枝杆菌黏附素HBHA的克隆表达及其免疫原性研究

18

作者 李传友 张旭霞 +6 位作者 张健源 李卫民 田苗 邱云青 孙照刚 李妍 端木宏谨 《结核病与胸部肿瘤》 2007年第1期1-6,共6页

目的应用克隆表达技术从大肠杆菌中获得重组的结核分枝杆菌黏附素HBHA蛋白，并以重组HBHA免疫小鼠观察抗HBHA抗体的产生并探讨其免疫原性。方法①应用PCR技术扩增结核分枝杆菌hbhA编码基因的特异片段。②结核分枝杆菌hbhA编码基因的克... 目的应用克隆表达技术从大肠杆菌中获得重组的结核分枝杆菌黏附素HBHA蛋白，并以重组HBHA免疫小鼠观察抗HBHA抗体的产生并探讨其免疫原性。方法①应用PCR技术扩增结核分枝杆菌hbhA编码基因的特异片段。②结核分枝杆菌hbhA编码基因的克隆及在大肠杆菌中的表达。③应用克隆表达的HBHA蛋白免疫小鼠，并用ELISA法测定小鼠血清抗HBHA抗体水平。结果①结核分枝杆菌hbhA基因成功地克隆到PET-32a（＋）表达载体中，并在大肠杆菌中获得了高效表达。重组HBHA主要存在于包涵体中，纯化包涵体并获得了大量的重组HBHA。②重组HBHA免疫小鼠可产生较高水平的抗HBHA抗体（〉1：102400），这表明重组HBHA在纯化过程中仍保留较强的免疫原性。结论结核分枝杆菌黏附素HBHA具有较好的免疫原性。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 黏附素 表达 免疫原性

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变性高压液相色谱技术在检测结核分枝杆菌对链霉素耐药性中的应用

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作者 孙照刚 张健源 +6 位作者 张旭霞 李妍 邱云青 田苗 聂理会 任卫聪 李传友 《结核病与胸部肿瘤》 2007年第3期165-170,共6页

目的利用变性高压液相色谱（DHPLC）技术快速检测结核分枝杆菌rpsL基因的突变，从而对结核分枝杆菌是否耐受链霉素类药物做出初步判断。方法体外药物敏感性试验，确定122株结核分枝杆菌临床分离株对链霉素的敏感程度。提取试验菌株基因... 目的利用变性高压液相色谱（DHPLC）技术快速检测结核分枝杆菌rpsL基因的突变，从而对结核分枝杆菌是否耐受链霉素类药物做出初步判断。方法体外药物敏感性试验，确定122株结核分枝杆菌临床分离株对链霉素的敏感程度。提取试验菌株基因组DNA。扩增rpsL基因片段；分别与H37Rv标准株的相应PCR产物混合、杂交后，利用WAVE核苷酸片段分析系统对各杂交产物进行DHPLC检测；序列测定结果与相应的DHPLC检测结果进行比较以验证DHPLC检测的准确性。通过比较药物敏感性和DHPLC检测结果。建立两者之间的对应关系。此外我们还检测了32株对链酶素敏感的临床分离株进行了DHPLC法检测。以明确该检测方法的特异性。结果结核分枝杆菌临床分离株对链霉素耐药性经体外实验证明，rpsL基因43位氨基酸突变通常会引起较高程度的链霉素耐药性。88位氨基酸突变菌株对链霉素的耐药性较低。链霉素耐药菌中发生rpsL基因突变的菌株约占78．69％（96／122）。其中以43位氨基酸突变为主（75．41％）。利用DHPLC技术检测rpsL基因突变，虽然不能检出缺失突变形式，但与直接测序法相比检出率为98．95％（95／96）。对所有耐受链霉素的结核分枝杆菌临床分离株而言。利用DHPLC技术可以达到77．87％（95／122）的耐药菌检出率，与序列测定法的检出率相近（96／122）。并且根据DHPLC检测图谱能够很好地判断rpsL基因的碱基突变形式。32株链酶素株的DHPLC检测图谱都与H37Rv标准株相同。结论DHPLC法是快速检测出结核分枝杆菌rpsL基因碱基突变的好方法．具有很高的特异性和敏感性。对链霉素耐药菌而言，碱基突变与结核分枝杆菌耐受链霉素类抗生素存在高度的相关关系，因此DHPLC技术用于临床早期检测结核病人对链霉素的耐药性具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核rpsL基因 突变链霉素耐药性 变性高压液相色谱DHPLC

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结核分枝杆菌毒力分泌基因Rv3872重组卡介苗的构建及表达

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作者 时欣欣 鲍朗 +1 位作者 邱云青 郭思 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期539-542,共4页

目的:构建结核分枝杆菌Rv3872的原核重组表达质粒pET-3872并对其进行表达及鉴定。构建表达结核分枝杆菌抗原蛋白Rv3872即PE35的重组卡介苗。方法:应用PCR技术扩增Rv3872基因,定向克隆入pET32a(+)并转化E.coli BL21(DE3)菌株,测序后用IPT... 目的:构建结核分枝杆菌Rv3872的原核重组表达质粒pET-3872并对其进行表达及鉴定。构建表达结核分枝杆菌抗原蛋白Rv3872即PE35的重组卡介苗。方法:应用PCR技术扩增Rv3872基因,定向克隆入pET32a(+)并转化E.coli BL21(DE3)菌株,测序后用IPTG诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE和Western blot对目的蛋白进行检测及鉴定。用纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。构建重组穿梭表达质粒pMV-3872,将重组质粒电穿孔进入卡介苗,对重组卡介苗进行诱导表达用SDS-PAGE和Western blot检测和鉴定目的蛋白。结果:表达融合蛋白的pET-3872质粒构建成功,重组蛋白经Western blot检测出特异性阳性信号。重组卡介苗BCG-3872构建成功,热诱导表达后经SDS-PAGE和Western blot,在培养上清中检测到目的蛋白。结论:成功构建了重组质粒pET32a(+),并在大肠杆菌中表达了PE35蛋白,有利于进一步研究Rv3872基因功能。本研究还对表达结核分枝杆菌蛋白PE35的重组卡介苗进行了鉴定,为进一步研究该重组卡介苗的免疫功能奠定了基础。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 Rv3872基因 表达 重组卡介苗

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