SNP标记对角膜混浊小鼠突变相关基因的精细定位 被引量：15

1

作者 蒋荧梅 刘春 +1 位作者 吴刘成 邵义祥 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期486-491,共6页

为深入研究前期工作中以ENU诱变技术建立的遗传性角膜混浊突变系小鼠(B6-Co)的遗传机制,利用SNP标记对其突变基因进行精细定位,将该品系中具有角膜混浊表型的小鼠(B6-CoP)与DBA/2小鼠(简称D2)配种得到F1代,再回交D2亲本品系得到F2代,提... 为深入研究前期工作中以ENU诱变技术建立的遗传性角膜混浊突变系小鼠(B6-Co)的遗传机制,利用SNP标记对其突变基因进行精细定位,将该品系中具有角膜混浊表型的小鼠(B6-CoP)与DBA/2小鼠(简称D2)配种得到F1代,再回交D2亲本品系得到F2代,提取F2代角膜混浊小鼠鼠尾DNA。在MGI数据库中选取小鼠13号染色体已定位区间附近5个在C57BL/6(简称B6)和D2两个品系之间有差异的SNP,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术及连锁分析方法对B6-Co小鼠突变基因进行精细定位。结果表明:B6-Co小鼠突变基因定位于13号染色体上112 546 283～113 397 654bp之间,因该区间内有5个已知基因,其中Map3k1基因与小鼠眼睛形态生成和眼睑闭合密切相关,提示Map3k1是B6-Co小鼠突变的强力候选基因。 展开更多

关键词 SNP 角膜混浊小鼠 突变基因 基因定位

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角膜混浊小鼠突变候选基因Map3k1克隆与序列分析 被引量：4

2

作者 吴刘成 刘春 +2 位作者 蒋荧梅 王生存 邵义祥 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第4期1-5,共5页

对具有角膜混浊表型的B6-Co突变系小鼠突变候选基因Map3k1进行克隆及测序分析,寻找该突变系小鼠Map3k1基因的突变位点。以小鼠Map3k1基因的mRNA、全长及上游5 kb序列设计引物,分别以基因组DNA和mRNA为模板,采用PCR和RT-PCR技术分段扩增... 对具有角膜混浊表型的B6-Co突变系小鼠突变候选基因Map3k1进行克隆及测序分析,寻找该突变系小鼠Map3k1基因的突变位点。以小鼠Map3k1基因的mRNA、全长及上游5 kb序列设计引物,分别以基因组DNA和mRNA为模板,采用PCR和RT-PCR技术分段扩增目的基因,将目的片段连接在T载体上,转化至感受态细胞,筛选阳性克隆,质粒DNA分子提取,电泳检测,EcoRⅠ酶切释放目的片段,送上海生工生物工程技术服务有限公司测序。成功扩增出Map3k1基因的20个外显子和上游调控序列,B6-Co小鼠测序结果与基因组数据库序列比对,该基因位于13号染色体第112 559 574的碱基由T突变为A,编码的蛋白质第314氨基酸由亮氨酸变为谷氨酸,但是该基因的表达调控及蛋白质剪切机制仍有待深入研究。 展开更多

关键词 B6-Co突变系小鼠 Map3k1基因 PCR扩增 序列分析

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斯氏艾美耳球虫感染兔血常规及肝脏功能分析 被引量：5

3

作者 宋鸿雁 景瑾 +1 位作者 蒋荧梅 邵义祥 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2017年第1期27-29,共3页

为了对斯氏艾美耳球虫感染兔的血常规、肝功能和凝血4项进行检测分析。通过孢子化的斯氏艾美耳球虫卵囊口服接种的途径感染8只2月龄的无球虫新西兰兔,8只不感染的设为阴性对照组。感染30 d后,心脏采血采集血液样本,测量血常规、肝功能... 为了对斯氏艾美耳球虫感染兔的血常规、肝功能和凝血4项进行检测分析。通过孢子化的斯氏艾美耳球虫卵囊口服接种的途径感染8只2月龄的无球虫新西兰兔,8只不感染的设为阴性对照组。感染30 d后,心脏采血采集血液样本,测量血常规、肝功能和凝血4项等血液指标。血液检测结果显示,与肝功能相关的8项指标中,仅有谷氨酰肽转移酶、血清胆碱酯酶差异显著,其余均差异极显著,血常规和凝血4项亦差异极显著。表明兔感染斯氏艾美耳球虫1个月后肝功能严重受损。 展开更多

关键词 斯氏艾美耳球虫 新西兰兔 血常规 肝功能 凝血4项

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斯氏艾美耳球虫热休克蛋白70基因的克隆及表达分析 被引量：4

4

作者 景瑾 张帅 +8 位作者 仇保丰 董蓉莲 蒋荧梅 朱顺星 田颖超 刘春 吴刘成 宋鸿雁 邵义祥 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第4期11-16,共6页

为了获得斯氏艾美耳球虫(E.stiedai)的热休克蛋白70(HSP70)的全基因序列,并诱导表达重组HSP70蛋白,试验根据免疫蛋白组学研究的质谱结果获得的部分氨基酸序列和已发布近源物种HSP70蛋白序列设计引物,通过c DNA末端快速扩增法(RACE)获得E... 为了获得斯氏艾美耳球虫(E.stiedai)的热休克蛋白70(HSP70)的全基因序列,并诱导表达重组HSP70蛋白,试验根据免疫蛋白组学研究的质谱结果获得的部分氨基酸序列和已发布近源物种HSP70蛋白序列设计引物,通过c DNA末端快速扩增法(RACE)获得E.stiedai HSP70的全基因序列,将其连入原核表达载体p ET-28a(+),转化Competent Rosetta2(DE3)p Lys S,通过IPTG诱导表达重组HSP70蛋白,并进行Western-blot分析。结果表明:HSP70序列全长为2 727 bp,最大ORF为2 010 bp。HSP70在诱导后37℃培养4 h条件下有表达,但全部为不溶性表达;在诱导后20℃过夜培养条件下无表达。说明试验成功获得E.stiedai HSP70的全基因序列以及重组HSP70蛋白。 展开更多

关键词 斯氏艾美耳球虫 热休克蛋白70(HSP70) cDNA末端快速扩增法 克隆 原核表达 重组蛋白

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冷冻原肠浸泡解冻池水细菌多样性分析 被引量：2

5

作者 仇保丰 宋鸿雁 +4 位作者 董蓉莲 高雪梅 蒋荧梅 顾炳泉 胡顺林 《动物医学进展》 北大核心 2017年第5期43-48,共6页

为了研究冷冻原肠浸泡解冻池水的细菌多样性,采集3份水样直接提取细菌基因组总DNA,再分别用PCR技术扩增出细菌16S rDNA并构建基因文库,经PCR鉴定后从3个文库中分别随机挑取50个阳性克隆进行DNA序列测定。分别对3个文库的测序结果进行分... 为了研究冷冻原肠浸泡解冻池水的细菌多样性,采集3份水样直接提取细菌基因组总DNA,再分别用PCR技术扩增出细菌16S rDNA并构建基因文库,经PCR鉴定后从3个文库中分别随机挑取50个阳性克隆进行DNA序列测定。分别对3个文库的测序结果进行分析发现,除去24.00%~32.00%为无法鉴定的未培养细菌和未分类细菌以外,其余细菌来自于芽胞杆菌纲、γ-变形菌纲、放线菌纲和黄杆菌纲,分别占各文库克隆总数的38.00%~42.00%、20.00%~26.00%、4.00%~8.00%和0~2.00%。除去44株无法鉴定的细菌,进一步对其他106株细菌进行分析发现,其中2株放线菌目细菌和5株肠杆菌科细菌无法进一步鉴定,其余99个菌株包含了来自19个属的至少30种细菌,且肠球菌属、变形杆菌属和芽胞杆菌属为其中的优势菌属。本研究显示冷冻原肠浸泡解冻池水中细菌多样性较高,其中部分细菌为致病菌和条件致病菌。 展开更多

关键词 冷冻原肠 解冻池 细菌多样性 16SrDNA文库

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B6-Co小鼠角膜病的细菌学因素探讨 被引量：4

6

作者 邵义祥 殷小敏 +2 位作者 王春中 蒋荧梅 管怀进 《实验动物与比较医学》 CAS 2008年第5期277-281,共5页

目的探讨B6-Co小鼠角膜浑浊形成的细菌学因素。方法以正常B6和B6-Co小鼠为研究对象,从不同日龄组的小鼠眼部取角膜分泌物或角膜刮片,分别接种到血平板和营养肉汤上,恒温培养24h。挑取菌落或肉汤管内的悬浮液涂片,革兰氏氏染色,镜检,记... 目的探讨B6-Co小鼠角膜浑浊形成的细菌学因素。方法以正常B6和B6-Co小鼠为研究对象,从不同日龄组的小鼠眼部取角膜分泌物或角膜刮片,分别接种到血平板和营养肉汤上,恒温培养24h。挑取菌落或肉汤管内的悬浮液涂片,革兰氏氏染色,镜检,记录结果。将纯化培养获得的细菌进行鉴定。结果正常B6小鼠与角膜浑浊小鼠存在角膜细菌学差异。结论B6-Co小鼠角膜混浊与微生物感染有关。 展开更多

关键词 角膜病 细菌学 发病机制 B6-Co小鼠

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国产和进口冷冻原肠中奇异变形杆菌的监测与分析 被引量：1

7

作者 仇保丰 宋鸿雁 +4 位作者 董蓉莲 蒋荧梅 高雪梅 刘文斌 胡顺林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期970-975,共6页

目的研究国产和进口冷冻原肠携带奇异变形杆菌的情况。方法本研究对2014-2016年采集的40份冷冻原肠样品进行检测,其中包括16份国产猪原肠和24份进口羊原肠。经过奇异变形杆菌的分离、表型特征鉴定和16SrDNA鉴定,同时收集GenBank中不同... 目的研究国产和进口冷冻原肠携带奇异变形杆菌的情况。方法本研究对2014-2016年采集的40份冷冻原肠样品进行检测,其中包括16份国产猪原肠和24份进口羊原肠。经过奇异变形杆菌的分离、表型特征鉴定和16SrDNA鉴定,同时收集GenBank中不同地域和宿主动物的奇异变形杆菌,以及其他重要食源性致病菌的16SrDNA序列,结合本研究测定序列共同进行比对分析。结果 40份样品中有10份样品为PM检测阳性,总的PM检测阳性率为25.00%,其中,国产冷冻猪原肠的PM检测阳性率为31.25%,澳大利亚和新西兰进口冷冻羊原肠的PM检测阳性率分别为27.27%和15.38%,另外,发现不同原肠PM分离株之间的16SrDNA同源性差异较大,且同源性的高低和PM菌株的分离地域及宿主动物均未呈现明显的关联性。结论国产和进口冷冻原肠携带奇异变形杆菌的情况比较严重,相关管理和研究应进一步加强。 展开更多

关键词 冷冻原肠 奇异变形杆菌 监测 分析

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斯氏艾美耳球虫感染兔肝脏组织超微结构观察 被引量：1

8

作者 景瑾 宋鸿雁 +1 位作者 蒋荧梅 邵义祥 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第6期37-39,43,共4页

为了给兔斯氏艾美耳球虫感染的有效防治方法和途径提供理论依据,试验通过孢子化的斯氏艾美耳球虫卵囊口服感染6只2~3月龄的无球虫新西兰兔,6只不感染兔为阴性对照组,30d后,对其肝脏、胆管以及十二指肠进行超微结构观察比较。结果表明：... 为了给兔斯氏艾美耳球虫感染的有效防治方法和途径提供理论依据,试验通过孢子化的斯氏艾美耳球虫卵囊口服感染6只2~3月龄的无球虫新西兰兔,6只不感染兔为阴性对照组,30d后,对其肝脏、胆管以及十二指肠进行超微结构观察比较。结果表明：肝脏、胆管以及十二指肠均出现显著病变,器官和细胞结构严重破坏。肝脏组织中肝细胞结构破坏,细胞器消失,可清晰地观察到斯氏艾美耳球虫的超微结构;胆管上皮细胞亦有部分细胞器消失;十二指肠微绒毛断裂、脱落。说明斯氏艾美耳球虫感染兔后,对兔的消化器官造成了极大的损害。 展开更多

关键词 斯氏艾美耳球虫 新西兰兔 肝脏 胆管 十二指肠 超微结构

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低频超声联合SonoVue微泡辐照兔颈动脉的实验研究 被引量：1

9

作者 周玉凤 司海峰 +3 位作者 王丽 夏淦林 蒋荧梅 沈智勇 《影像诊断与介入放射学》 2017年第3期179-182,共4页

目的了解低频超声联合微泡辐照兔颈动脉的效应。方法麻醉处死6只新西兰大白兔,解剖分离出12根颈动脉,分成两组。一组6根颈动脉内注射超声对比剂Sono Vue微泡及美兰染色液;另一组6根颈动脉内注射生理盐水及美兰。颈动脉置于含有生理盐水... 目的了解低频超声联合微泡辐照兔颈动脉的效应。方法麻醉处死6只新西兰大白兔,解剖分离出12根颈动脉,分成两组。一组6根颈动脉内注射超声对比剂Sono Vue微泡及美兰染色液;另一组6根颈动脉内注射生理盐水及美兰。颈动脉置于含有生理盐水的塑料器皿中,低频超声(20 k Hz,声强2 W/cm2)置于器皿下方,进行辐照。辐照完毕,对颈动脉进行病理检查。结果充满Sono Vue微泡的颈动脉超声辐照后平均3 s内,即出现蓝色液体缓慢溢出。病理H-E染色示颈动脉弹性膜分离,局部管壁缺损,破孔形成,断面粗糙不整齐。充满生理盐水的颈动脉超声辐照后25 s后,均未见液体溢出。H-E染色血管内膜光滑,管壁平滑肌连续性好,未见缺损。结论低频超声辐照含Sono Vue微泡的兔颈动脉,短时间内可致血管损伤,形成破孔。 展开更多

关键词 低频超声 微泡 空化 兔颈动脉

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Hspa5和E-cadherin在B6-Co小鼠胚胎后期眼睑中的表达研究

10

作者 蒋荧梅 吴刘成 +2 位作者 丁宸云 崔亚茹 邵义祥 《交通医学》 2017年第4期307-310,共4页

目的:检测遗传性角膜混浊突变系小鼠(B6-Co)与B6小鼠在胚胎后期眼睑组织中Hspa5、E-cadherin基因及蛋白的表达变化,探讨两者与B6-Co小鼠EOB表型形成的内在联系。方法:取B6、B6-Co胚胎期16.5天(E16.5d)、E18.5d小鼠眼睑,用Realtime PCR法... 目的:检测遗传性角膜混浊突变系小鼠(B6-Co)与B6小鼠在胚胎后期眼睑组织中Hspa5、E-cadherin基因及蛋白的表达变化,探讨两者与B6-Co小鼠EOB表型形成的内在联系。方法:取B6、B6-Co胚胎期16.5天(E16.5d)、E18.5d小鼠眼睑,用Realtime PCR法和Western Blot法检测眼睑中Hspa5、E-cadherin的m RNA和蛋白表达情况。结果:E16.5d,B6-Co小鼠眼睑中Hspa5表达显著降低,E-cadherin表达显著升高;E18.5d,B6-Co小鼠Hspa5表达显著升高,E-cadherin表达显著降低。结论:Hspa5、E-cadherin的基因和蛋白在B6-Co突变系小鼠眼睑中的表达出现明显异常,提示B6-Co小鼠胚胎发育后期Hspa5、E-cadherin表达变化与EOB表型的形成有密切关联。 展开更多

关键词 遗传性角膜混浊突变系小鼠 出生时眼睛开放表型 热休克蛋白a5 E-钙粘蛋白

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国际贸易中涉及微生物的肠衣卫生安全新要求

11

作者 宋鸿雁 仇保丰 +4 位作者 高雪梅 蒋荧梅 王晓颖 朱顺星 刘文斌 《中国动物检疫》 CAS 2018年第9期67-71,共5页

肠衣在我国农产品出口中一直占有重要地位。近年来多个国家针对进口肠衣提出了涉及微生物的卫生安全新要求。由于我国肠衣加工出口企业对此缺乏了解和重视,致使在应对时非常被动且损失较大。本文根据我国肠衣主要出口国家和地区的分布情... 肠衣在我国农产品出口中一直占有重要地位。近年来多个国家针对进口肠衣提出了涉及微生物的卫生安全新要求。由于我国肠衣加工出口企业对此缺乏了解和重视,致使在应对时非常被动且损失较大。本文根据我国肠衣主要出口国家和地区的分布情况,结合多年来收集的肠衣进出口监督管理和科学研究文献资料,将世界动物卫生组织、欧盟、美国、日本和韩国等组织或国家涉及微生物的肠衣卫生安全新规定和新要求进行了梳理和总结,以期为我国肠衣加工出口企业提供第一手参考资料。 展开更多

关键词 肠衣 微生物 国际贸易 安全 卫生

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B6-Co小鼠感染角膜中TLR4/9的表达及意义

12

作者 郑良凤 彭晓清 +2 位作者 王旭 蒋荧梅 吴刘成 《交通医学》 2019年第5期441-444,F0003,共5页

目的:研究TLR4和TLR9在B6-Co小鼠感染角膜中的表达水平及意义。方法:采用Trizol法提取小鼠角膜RNA,实时荧光PCR检测目的基因mRNA表达水平;取小鼠眼球作冰冻切片,进行TLR4/9免疫荧光染色。结果:B6-Co小鼠角膜组织中TLR4/9 mRNA的表达在... 目的:研究TLR4和TLR9在B6-Co小鼠感染角膜中的表达水平及意义。方法:采用Trizol法提取小鼠角膜RNA,实时荧光PCR检测目的基因mRNA表达水平;取小鼠眼球作冰冻切片,进行TLR4/9免疫荧光染色。结果:B6-Co小鼠角膜组织中TLR4/9 mRNA的表达在不同周龄阶段均高于B6小鼠,随着小鼠周龄的增加呈上升趋势,第4周和第8周TLR4表达、第8周和第16周TLR9表达与B6小鼠的差异,均有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光显示B6-Co小鼠角膜上皮层中TLR4/9蛋白表达高于B6小鼠,在第8周荧光信号最强。结论:TLR4/9在B6-Co小鼠感染角膜中的表达上调,提示TLR4/9在角膜感染免疫应答中发挥作用。 展开更多

关键词 B6-Co小鼠 角膜感染 Toll样受体4/9 实时荧光PCR 免疫荧光染色

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兔斯氏艾美耳球虫感染模型的建立及病理学初步研究 被引量：3

13

作者 景瑾 宋鸿雁 +1 位作者 蒋荧梅 邵义祥 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期461-465,共5页

建立兔斯氏艾美耳球虫感染模型,为研究斯氏艾美耳球虫感染兔的有效防治方法提供适合的动物模型。2月龄普通级新西兰兔16只,分组单笼饲养。从自然感染的肝脏中收集斯氏艾美耳球虫卵囊,培养孢子化,孢子化的卵囊1.0×105个/mL,3mL孢子... 建立兔斯氏艾美耳球虫感染模型,为研究斯氏艾美耳球虫感染兔的有效防治方法提供适合的动物模型。2月龄普通级新西兰兔16只,分组单笼饲养。从自然感染的肝脏中收集斯氏艾美耳球虫卵囊,培养孢子化,孢子化的卵囊1.0×105个/mL,3mL孢子化卵囊口服感染新西兰兔,建立兔斯氏艾美耳球虫感染模型,并对感染1个月后的新西兰兔的肝脏、十二指肠进行病理学观察比较。结果显示:斯氏艾美耳球虫对新西兰兔部分致病性观察发现,新西兰兔在感染后出现明显的临床症状,严重制约了其生长发育。形态学观察发现肝脏感染严重,表面布满白色结节,胆囊中胆汁浓稠,颜色呈金黄色,而十二指肠虽未感染球虫,却也有较显著的病变。病理学观察发现肝脏中存在大量斯氏艾美耳球虫,十二指肠中不存在球虫,但组织结构亦被破坏,十二指肠绒毛遭到严重破坏。结果表明:本试验成功建立了兔斯氏艾美耳球虫感染模型。 展开更多

关键词 新西兰兔 斯氏艾美耳球虫 感染模型 肝脏 病理

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斯氏艾美耳球虫ASP基因的克隆表达与免疫特性分析 被引量：2

14

作者 宋鸿雁 景瑾 +5 位作者 董蓉莲 仇保丰 蒋荧梅 朱顺星 王生存 邵义祥 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期676-681,共6页

根据免疫蛋白组学研究的质谱结果获得的部分氨基酸序列和已发布近源物种天冬氨酸蛋白酶（ASP）蛋白序列设计引物，通过cDNA末端快速扩增法（RACE）获得斯氏艾美耳球虫（E．stiedai）ASP的全基因序列，将其连入原核表达裁体pET-28a（＋... 根据免疫蛋白组学研究的质谱结果获得的部分氨基酸序列和已发布近源物种天冬氨酸蛋白酶（ASP）蛋白序列设计引物，通过cDNA末端快速扩增法（RACE）获得斯氏艾美耳球虫（E．stiedai）ASP的全基因序列，将其连入原核表达裁体pET-28a（＋），转化CompetentRosetta2（DE3）pLysS，通过IPTG诱导表达重组ASP蛋白，并进行Westernblot分析。结果显示，ASP序列全长为1568bp，最大ORF为1407bp。Westernblot分析发现，ASP在诱导后37℃培养4h条件下有表达，但全部为不溶性表达；在诱导后20℃过夜培养条件下有表达，且有少量可溶性表达；证实重组ASP蛋白确实对E．stiedai有免疫原性。结果表明，试验成功获得E．stiedaiASP的全基因序列以及重组ASP蛋白． 展开更多

关键词 E.stiedai ASP cDNA末端快速扩增法 克隆 原核表达 重组蛋白

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