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Twist与肿瘤的关系研究进展 被引量：8
1
作者 董衍东 何涛 《西南军医》 2009年第3期493-495,共3页
肿瘤是目前危害人类健康最严重的疾病,同时也是生命科学研究的热点。近年来的研究发现,Twist作为一种肿瘤基因,通过在许多肿瘤细胞中的过度表达,在抗细胞凋亡、肿瘤的多药耐药性、上皮-间质转变(EMT)、血管的发生和肿瘤的侵袭方面起到... 肿瘤是目前危害人类健康最严重的疾病,同时也是生命科学研究的热点。近年来的研究发现,Twist作为一种肿瘤基因,通过在许多肿瘤细胞中的过度表达,在抗细胞凋亡、肿瘤的多药耐药性、上皮-间质转变(EMT)、血管的发生和肿瘤的侵袭方面起到了非常重要的作用。此外,大量的研究证实,Twist在肿瘤的不同分期中表达有着明显差异。这些研究成果对肿瘤的诊断和治疗等具有重要的意义,本文就Twist与肿瘤的相关性作一综述。 展开更多
关键词 TWIST 肿瘤 细胞凋亡 多药耐药性 上皮-间质转变
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)重组亚单位疫苗FnBPA的免疫保护作用研究 被引量：7
2
作者 左钱飞 吴翼 +5 位作者 董衍东 蔡昌芝 冯强 解庆华 曾浩 邹全明 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期837-841,共5页
目的评价耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)候选疫苗抗原FnBPA活性片段的免疫原性以及其在抵抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染中的免疫保护作用。方法构建pGEX-6p-2-FnBPA表达载体,经可溶表达及亲和纯化后的重组蛋白免疫Balb/c小鼠。末次... 目的评价耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)候选疫苗抗原FnBPA活性片段的免疫原性以及其在抵抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染中的免疫保护作用。方法构建pGEX-6p-2-FnBPA表达载体,经可溶表达及亲和纯化后的重组蛋白免疫Balb/c小鼠。末次免疫后的第7天,分离免疫小鼠的血清ELISA检测IgG及其亚型抗体水平,同时测定体外抗体介导的调理吞噬作用。末次免疫后的第14天,经尾静脉感染ATCC国际标准株MRSA-252,统计分析感染后各组的小鼠的生存率以及检测脾脏,肾脏的细菌定植量。结果成功构建、表达及纯化了FnBPA活性片段,重组蛋白纯度可达90%;免疫后诱导小鼠机体产生了高效价的IgG抗体,并在体外能发挥抗体介导的调理吞噬作用;在感染保护评价实验中,与对照组相比,实验组的生存率显著提高(P<0.01),并显著降低了脾脏与肾脏的细菌定植量(P<0.05)。结论耐甲氧西林金黄色葡萄球菌重组亚单位疫苗FnBPA具有良好的免疫原性和免疫保护作用,可以作为MRSA疫苗研究的重要候选抗原。 展开更多
关键词 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 FnBPA 调理吞噬作用 免疫保护性
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌IsdB活性片段的克隆、表达及抗原免疫保护性初步研究 被引量：1
3
作者 蔡昌芝 左钱飞 +6 位作者 冯强 周维英 吴翼 董衍东 解庆华 邹全明 曾浩 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期759-763,共5页
目的探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)抗原IsdB活性片段(IsdB2)免疫保护作用。方法利用生物信息学技术预测分析出IsdB活性片段(IsdB2),PCR扩增编码IsdB2的基因片段,亚克隆至GST标签融合表达的原核表达载体pGEX-6P-2中,将载体转化入... 目的探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)抗原IsdB活性片段(IsdB2)免疫保护作用。方法利用生物信息学技术预测分析出IsdB活性片段(IsdB2),PCR扩增编码IsdB2的基因片段,亚克隆至GST标签融合表达的原核表达载体pGEX-6P-2中,将载体转化入大肠杆菌XL-1 blue,通过IPTG诱导表达IsdB2/GST融合蛋白,利用GST亲和层析初步纯化获取IsdB2蛋白。用IsdB2蛋白抗原辅以氢氧化铝佐剂对小鼠进行免疫实验,统计小鼠存活率对IsdB2抗原的免疫性进行初步研究。结果重组质粒经过BamHⅠ和NotⅠ双酶切鉴定、核酸序列测定和IPTG诱导表达IsdB2/GST及酶切获取IsdB2蛋白的SDS-PAGE分析表明,IsdB2蛋白相对分子质量大小约72 000,GST标签相对分子质量大小约26 000,与预期相符合。用IsdB2蛋白对小鼠进行3次疫苗免疫实验,IsdB2对小鼠的保护率分别为84.6%、50%和60%。结论成功构建重组表达载体pGEX-6P-2-IsdB2,利用大肠杆菌表达系统、GST亲和层析和酶切方法获得IsdB2蛋白抗原,通过3次动物疫苗免疫实验结果表明IsdB2具有免疫保护性,为研制新型有效的MRSA疫苗奠定实验基础。 展开更多
关键词 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 IsdB活性片段 GST融合蛋白 免疫保护性
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Twist蛋白在肾肿瘤组织中的表达及与MRP、P-gp、LRP、TOPOⅡ的关系
4
作者 张志霞 何涛 +1 位作者 董衍东 王丽 《徐州医学院学报》 CAS 2013年第9期588-591,共4页
目的 探讨Twist蛋白在肾肿瘤组织中的表达及与几种多药耐药蛋白表达之间的关系.方法 应用免疫组化SABC技术检测人肾癌组织不同区域的Twist蛋白、多药耐药相关蛋白（multidrug resistance-associated protein,MRP）、P糖蛋白（P-gp）、... 目的 探讨Twist蛋白在肾肿瘤组织中的表达及与几种多药耐药蛋白表达之间的关系.方法 应用免疫组化SABC技术检测人肾癌组织不同区域的Twist蛋白、多药耐药相关蛋白（multidrug resistance-associated protein,MRP）、P糖蛋白（P-gp）、肺耐药蛋白（lung resistance-related protein,LRP）、拓扑异构酶Ⅱ（topoisomerase Ⅱ,TOPOⅡ）的表达.结果 在肿瘤边界区,Twist蛋白、MRP、P-gp、LRP、TOPOⅡ均为阳性表达;而在肿瘤中心区,Twist蛋白和P-gp的表达为阴性,MRP、LRP、TOPOⅡ蛋白仍为阳性表达,但MRP和TOPOⅡ在肿瘤中心区表达强于肿瘤周边区（P〈0.01）,而LRP在肿瘤中心区的表达弱于肿瘤周边区（P〈0.01）.结论 Twist基因的表达与肾肿瘤转移、浸润以及耐药性有关. 展开更多
关键词 肾肿瘤 Twist 多药耐药相关蛋白 P糖蛋白 肺耐药蛋白 拓扑异构酶Ⅱ
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乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-435S中Twist基因表达与紫杉醇耐药的实验研究
5
作者 张志霞 何涛 +1 位作者 董衍东 王丽 《西南军医》 2013年第6期662-664,共3页
目的探讨转移能力不同的两种人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-435S中Twist基因表达差异,及其与紫杉醇药物敏感性差异的相关性。方法用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,检测两种细胞中Twist基因的表达情况,MTT法检测两种细胞对紫杉醇的敏... 目的探讨转移能力不同的两种人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-435S中Twist基因表达差异,及其与紫杉醇药物敏感性差异的相关性。方法用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,检测两种细胞中Twist基因的表达情况,MTT法检测两种细胞对紫杉醇的敏感性。结果 (1)RT-PCR结果显示:两种细胞中均有Twist基因表达,在MDA-MB-435S细胞中的表达高于MCF-7(P<0.05);(2)紫杉醇对MDA-MB-435S细胞的抑制作用弱于对MCF-7细胞的抑制作用(P<0.05)。结论 Twist基因在转移能力强的MDA-MB-435S细胞中表达高于转移能力中等的MCF-7细胞,同时高转移的MDA-MB-435S细胞对紫杉醇的敏感性弱于中等转移性的MCF-7细胞,且更易出现耐药。 展开更多
关键词 TWIST基因 MCF-7 MDA—MB-435S 耐药性 紫杉醇
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3种中国仓鼠卵巢细胞蛋白残留量检测试剂盒的比较研究 被引量：6
6
作者 张峰 董衍东 +2 位作者 郭莎 高凯 王兰 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第13期1107-1112,共6页
目的比较市售3种中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)残留量ELISA检测试剂盒(货号:A、B、C)的检测效果。方法分别使用3种试剂盒检测不同CHO细胞株表达的治疗性单抗原液、提取CHOK1细胞培养上... 目的比较市售3种中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)残留量ELISA检测试剂盒(货号:A、B、C)的检测效果。方法分别使用3种试剂盒检测不同CHO细胞株表达的治疗性单抗原液、提取CHOK1细胞培养上清蛋白和3种CHO-HCP检测试剂盒自带CHO-HCP标准品,评价3种试剂盒的检测效果。将3种试剂盒的包被板与酶标二抗系列组合后,检测标准品和提取的CHO-K1细胞培养上清蛋白分析产生差异的原因。结果单抗样品检测中,试剂盒A、B相对于试剂盒C的检测回收率约为1.89%和15.34%;CHO-K1细胞培养上清蛋白样品检测中,试剂盒A、B、C的回收率分别为:4.05%、21.52%和35.98%;试剂盒标准品互测中,3种试剂盒检测自身标准品的回收率均在(100±15)%内;试剂盒A检标准品B、C的平均回收率分别为1.28%和7.99%。试剂盒B检测标准品A、C的平均回收率分别为55.76%和25.08%。试剂盒C检测标准品A、B的平均回收率分别为266.65%和73.31%;通过包被板和酶标二抗的系列组合的检测结果推导:微孔板包被抗体对CHO-HCP的覆盖能力方面:A>C>B;二抗对HCP的覆盖能力方面:B>C>A。结论该企业生产的3种CHO-HCP检测试剂盒中检测效率由高到低依次为C>B>A。 展开更多
关键词 中国仓鼠卵巢细胞 宿主细胞蛋白 单抗 质控
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CESI-MS/MS和NanoLC-MS/MS技术对促红细胞生成素中糖肽的分析
7
作者 张伶俐 王文涛 +6 位作者 赵颖华 肖志良 罗继 刘冰 董衍东 李响 陈泓序 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期79-88,共10页
目的:使用无鞘液毛细管电泳-质谱联用(CESI-MS/MS)和纳升液相色谱-质谱联用(NanoLCMS/MS)2种方法,对高糖基化蛋白促红细胞生成素(EPO)的糖肽进行分析,并对2种方法的分析结果进行对比。方法:以EPO为研究对象,还原烷基化后用胰蛋白酶进行... 目的:使用无鞘液毛细管电泳-质谱联用(CESI-MS/MS)和纳升液相色谱-质谱联用(NanoLCMS/MS)2种方法,对高糖基化蛋白促红细胞生成素(EPO)的糖肽进行分析,并对2种方法的分析结果进行对比。方法:以EPO为研究对象,还原烷基化后用胰蛋白酶进行酶切,酶切得到的肽段利用CESIMS/MS和NanoLC-MS/MS检测方法进行分离鉴定。CESI-MS/MS分析方法:采用熔融的石英毛细管,以10%醋酸水溶液为背景电解质,在34.5 kPa压力下进样60 s,分离电压为30 kV,同时施加正向压力6.9kPa;离子源温度为50℃,喷雾电压为1650 V,MS扫描范围为m/z 350~1250,MS/MS扫描范围为m/z 100~1500。NanoLC-MS/MS分析方法:采用YMC C_(18)色谱柱,以含0.1%甲酸的水溶液(A)-含0.1%甲酸的乙腈溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速5μL·min^(-1);离子源温度300℃,喷雾电压为+5500 V,MS扫描范围为m/z 350~1250,MS/MS扫描范围为m/z 100~1500。将采集到的质谱数据导入到软件BiopharmaView^(TM)3.0中进行搜库检索,对糖肽进行鉴定。结果:采用CESI-MS/MS方法可以单独鉴定到32条糖肽,采用NanoLC-MS/MS方法可以单独鉴定到40条糖肽;通过2种方法可以共鉴定到84条糖肽,共涉及56种糖型。对比2种方法的结果,发现对于EPO糖肽的分析,CESI-MS/MS方法可以鉴定到更多的含唾液酸的糖肽,并表现了更优异的分离效果。此外,CESI-MS/MS方法鉴定出的糖肽分子量范围更宽,可以有效分析NanoLC-MS/MS方法中未鉴定到的高分子量糖肽。结论:在糖蛋白的分析中,通过糖肽水平的分离和鉴定,可以获得糖基位点和糖基序列的信息。CESI-MS/MS方法和NanoLC-MS/MS方法提供了互补的分析结果,其联合使用可鉴定出更多种类的糖肽,为糖蛋白的研究中糖肽水平的分析提供了更全面的解决方案。 展开更多
关键词 促红细胞生成素 糖肽 糖蛋白激素 糖基化修饰 无鞘液毛细管电泳-质谱联用 纳升液相色谱-质谱联用
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重组人鼠嵌合抗CD20单克隆抗体N糖谱的定性及定量分析
8
作者 刘冰 王梦莹 +4 位作者 肖志良 董衍东 邹寒艳 杨惠洁 张伶俐 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期289-292,共4页
临床上,单克隆抗体用于治疗肿瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病和移植排斥反应等多种疾病,是近年生物制药行业最热门的研究领域之一[1-2]。重组人鼠嵌合抗CD20单克隆抗体是一种特异性靶向淋巴细胞表面CD20抗原的抗体,可与CD20抗原发生结... 临床上,单克隆抗体用于治疗肿瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病和移植排斥反应等多种疾病,是近年生物制药行业最热门的研究领域之一[1-2]。重组人鼠嵌合抗CD20单克隆抗体是一种特异性靶向淋巴细胞表面CD20抗原的抗体,可与CD20抗原发生结合,激发机体免疫反应,可致表面表达CD20抗原的B-淋巴细胞的溶解和被杀伤。 展开更多
关键词 CD20 单克隆抗体 重组人鼠嵌合抗体 N糖基化修饰
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重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子质量肽图分析及二硫键定位
9
作者 刘冰 王莹 +1 位作者 董衍东 邹寒艳 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第16期2277-2281,共5页
目的采用液相色谱-质谱联用技术绘制重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的质量肽图并鉴定二硫键位点。方法重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子原液经变性、还原、烷基化、脱盐、胰蛋白酶和V8酶分别酶解后进行质量肽图分析;原液经变性、烷... 目的采用液相色谱-质谱联用技术绘制重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的质量肽图并鉴定二硫键位点。方法重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子原液经变性、还原、烷基化、脱盐、胰蛋白酶和V8酶分别酶解后进行质量肽图分析;原液经变性、烷基化、脱盐、V8酶和V8酶结合胰蛋白酶分别酶解后进行二硫键定位鉴定。结果胰蛋白酶酶切的质量肽图共发现14个匹配肽段,V8酶酶切的质量肽图共发现18个匹配肽段,肽段覆盖率均为100%。经V8酶酶切仅鉴定到1种二硫键匹配方式即Cys55-Cys97,经V8酶结合胰蛋白酶酶切鉴定到2种二硫键匹配方式即Cys55-Cys97和Cys89-Cys122。结论应用液相色谱-质谱联用技术进行质量肽图分析和二硫键定位可作为重组蛋白药物质量控制方法。 展开更多
关键词 人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 质量肽图 二硫键 液相色谱-质谱联用
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吸入用乙酰半胱氨酸溶液中硫化氢检测方法的对比
10
作者 杨惠洁 董衍东 +4 位作者 刘冰 杨晓容 王莹 尚亚宁 张伶俐 《华西药学杂志》 CAS CSCD 2021年第4期466-468,共3页
目的评价两种吸入用乙酰半胱氨酸溶液中硫化氢检测方法及不同取样方式对检测结果的影响。方法采用现行标准检测方法、可溶性硫化物流动注射分析仪法,以及不同的取样方式对吸入用乙酰半胱氨酸溶液中的硫化氢进行检测。结果两种硫化氢检... 目的评价两种吸入用乙酰半胱氨酸溶液中硫化氢检测方法及不同取样方式对检测结果的影响。方法采用现行标准检测方法、可溶性硫化物流动注射分析仪法,以及不同的取样方式对吸入用乙酰半胱氨酸溶液中的硫化氢进行检测。结果两种硫化氢检测方法对3个厂家产品中硫化氢的检测结果基本一致,分别为0.002%~0.005%、0.011%~0.014%、0.013%~0.018%。不同取样方式对样品中硫化氢的检测结果影响较大,样品转移及转移后的振荡时间越长,硫化氢的检出量越低。流动注射分析法的重复性和精密度略优于现行标准,两者的检出限一致。结论两种检测方法对样品中硫化氢的检出量基本一致,取样时对样品的稀释、混匀等前处理步骤会降低硫化氢的检出量。 展开更多
关键词 吸入用乙酰半胱氨酸溶液 硫化氢 现行标准 流动注射分析 检测 取样方式
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