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丹参酮生物合成途径关键酶CYP76AH3的晶体结构与分子对接
被引量：
1
1
作者
陈张鑫
贺珂
+3 位作者
史超
黄力新
肖城良
常振战
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第4期488-494,共7页
丹参在治疗心绞痛、冠心病和心肌梗死等疾病中具有广泛应用。CYP76AH3是其活性成分丹参酮合成途径中的关键P450酶,位于丹参酮复杂合成网络通路的分支处,其晶体结构解析及关键氨基酸分析对丹参酮的合成生物学具有重要意义。作为跨膜蛋白...
丹参在治疗心绞痛、冠心病和心肌梗死等疾病中具有广泛应用。CYP76AH3是其活性成分丹参酮合成途径中的关键P450酶,位于丹参酮复杂合成网络通路的分支处,其晶体结构解析及关键氨基酸分析对丹参酮的合成生物学具有重要意义。作为跨膜蛋白的Ⅱ型P450酶的蛋白质纯化、晶体培养和晶体结构解析的难度一贯较大。本研究通过构建原核表达重组质粒,纯化目的蛋白质,成功培养了CYP76AH3晶体,解析了晶体结构。根据CavityPlus分析确定对接范围,采用分子对接程序Discovery Studio筛选出与底物相互作用的关键氨基酸,包括与底物有氢键相互作用的Gly298和Asp294,以及与底物有疏水相互作用的Phe479、Leu367和Leu293;通过点突变模拟进一步预测了关键氨基酸的突变对蛋白质结构稳定性的影响。本研究将为CYP76AH3的蛋白质工程提供目标,为丹参酮的合成生物学研究奠定了基础。
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关键词
丹参
丹参酮
CYP76AH3
晶体结构
分子对接
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职称材料
精子发生调控因子重组人HSF5的原核表达、活性检测与结构预测
被引量：
1
2
作者
钟洪莉
肖城良
+3 位作者
史祥睿
代宇婕
刘威
张庆华
《基础医学与临床》
2021年第9期1323-1328,共6页
目的表达可溶性重组人源热休克转录因子5(rhHSF5)蛋白,并对其与热休克元件(HSEs)结合的结构模型进行预测。方法将目的基因克隆到表达载体pET-22b(+)上,然后将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,挑取单克隆,用异丙基-β-D-硫代半乳...
目的表达可溶性重组人源热休克转录因子5(rhHSF5)蛋白,并对其与热休克元件(HSEs)结合的结构模型进行预测。方法将目的基因克隆到表达载体pET-22b(+)上,然后将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,挑取单克隆,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。通过Ni-NTA亲和层析、Superdex 75分子筛层析纯化后,获得重组蛋白。与包含HSEs的DNA片段进行凝胶迁移实验,并通过同源建模和分子动力学模拟研究方法对其与HSEs结合的结构进行模拟和预测。结果获得可溶性人源HSF5蛋白的表达;经纯化得到高纯度、可结合HSEs的重组蛋白;凝胶迁移实验可见它与含HSEs的寡聚核苷酸有结合。结论可溶性的人源HSF5蛋白可在原核系统中表达,为进一步研究HSF5的功能机制提供了基本条件。
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关键词
精子发生
热休克转录因子5(HSF5)
原核表达
可溶性蛋白
结构预测
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职称材料
题名
丹参酮生物合成途径关键酶CYP76AH3的晶体结构与分子对接
被引量：
1
1
作者
陈张鑫
贺珂
史超
黄力新
肖城良
常振战
机构
北京大学基础医学院
中国科学院生物物理所
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第4期488-494,共7页
基金
国家自然科学基金(No.81773833,No.32171418)资助。
文摘
丹参在治疗心绞痛、冠心病和心肌梗死等疾病中具有广泛应用。CYP76AH3是其活性成分丹参酮合成途径中的关键P450酶,位于丹参酮复杂合成网络通路的分支处,其晶体结构解析及关键氨基酸分析对丹参酮的合成生物学具有重要意义。作为跨膜蛋白的Ⅱ型P450酶的蛋白质纯化、晶体培养和晶体结构解析的难度一贯较大。本研究通过构建原核表达重组质粒,纯化目的蛋白质,成功培养了CYP76AH3晶体,解析了晶体结构。根据CavityPlus分析确定对接范围,采用分子对接程序Discovery Studio筛选出与底物相互作用的关键氨基酸,包括与底物有氢键相互作用的Gly298和Asp294,以及与底物有疏水相互作用的Phe479、Leu367和Leu293;通过点突变模拟进一步预测了关键氨基酸的突变对蛋白质结构稳定性的影响。本研究将为CYP76AH3的蛋白质工程提供目标,为丹参酮的合成生物学研究奠定了基础。
关键词
丹参
丹参酮
CYP76AH3
晶体结构
分子对接
Keywords
Salvia miltiorrhiza
tanshinone
CYP76AH3
crystal structure
molecule docking
分类号
Q6-33 [生物学—生物物理学]
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职称材料
题名
精子发生调控因子重组人HSF5的原核表达、活性检测与结构预测
被引量：
1
2
作者
钟洪莉
肖城良
史祥睿
代宇婕
刘威
张庆华
机构
陆军军医大学大坪医院妇产科
华中科技大学生命科学与技术学院
沈阳化工大学化学工程学院
陆军军医大学全军免疫研究所
出处
《基础医学与临床》
2021年第9期1323-1328,共6页
基金
重庆市社会民生科技创新专项(30118-2812)。
文摘
目的表达可溶性重组人源热休克转录因子5(rhHSF5)蛋白,并对其与热休克元件(HSEs)结合的结构模型进行预测。方法将目的基因克隆到表达载体pET-22b(+)上,然后将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,挑取单克隆,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。通过Ni-NTA亲和层析、Superdex 75分子筛层析纯化后,获得重组蛋白。与包含HSEs的DNA片段进行凝胶迁移实验,并通过同源建模和分子动力学模拟研究方法对其与HSEs结合的结构进行模拟和预测。结果获得可溶性人源HSF5蛋白的表达;经纯化得到高纯度、可结合HSEs的重组蛋白;凝胶迁移实验可见它与含HSEs的寡聚核苷酸有结合。结论可溶性的人源HSF5蛋白可在原核系统中表达,为进一步研究HSF5的功能机制提供了基本条件。
关键词
精子发生
热休克转录因子5(HSF5)
原核表达
可溶性蛋白
结构预测
Keywords
spermatogenesis
heat shock transcription factor 5(HSF5)
prokaryotic expression
soluble protein
structure prediction
分类号
R318 [医药卫生—生物医学工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
丹参酮生物合成途径关键酶CYP76AH3的晶体结构与分子对接
陈张鑫
贺珂
史超
黄力新
肖城良
常振战
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
1
在线阅读
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职称材料
2
精子发生调控因子重组人HSF5的原核表达、活性检测与结构预测
钟洪莉
肖城良
史祥睿
代宇婕
刘威
张庆华
《基础医学与临床》
2021
1
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职称材料
已选择
0
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引证文献
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