SHP-2通过ERK和JNK通路调节PC12细胞应对NGF的细胞生存和凋亡 被引量：3

1

作者 祝晓春 张力 +11 位作者 司云凤 孙东升 齐琦 王果元 董红岩 王秀丽 李弘 王丽娜 赵雅君 李全凤 徐长庆 田野 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期1348-1354,共7页

目的:探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在神经生长因子(NGF)作用下大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞生存及NGF撤除后细胞凋亡的过程中的作用及机制。方法:SHP-2抑制剂NSC87877作用于PC12细胞,MTT测定PC12细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率。将pIRES-... 目的:探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在神经生长因子(NGF)作用下大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞生存及NGF撤除后细胞凋亡的过程中的作用及机制。方法:SHP-2抑制剂NSC87877作用于PC12细胞,MTT测定PC12细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率。将pIRES-GFP空载体、pIRES-GFP-SHP-2野生型和pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体通过脂质体方法转染PC12细胞;加入NGF作用1h和撤除NGF5h后分别用Westernblotting方法检测细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)及磷酸化JNK(p-JNK)表达变化。结果:MTT和流式细胞仪检测表明SHP-2可以促进PC12细胞生存,抑制细胞凋亡。Western blotting结果显示无SHP-2抑制剂组和转染pIRES-SHP-2野生型组p-ERK表达在加入NGF的过程中升高;撤除NGF后,各组p-ERK表达均降低,pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体组和pIRES-GFP组p-ERK表达明显低于pIRES-GFP-SHP-2野生型组,NGF去除+SHP-2抑制剂组的表达水平明显低于NGF去除对照组;NGF去除+SHP-2抑制剂组p-JNK表达高于NGF去除对照组;pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体组高于pIRES-GFP空载体组,pIRES-GFP-SHP-2野生型组低于pIRES-GFP空载体组。结论:SHP-2可能通过对ERK的正向激活,抑制JNK的激活,增强NGF作用下PC12细胞生存及抑制NGF撤除后所致细胞凋亡,从而在NGF的信号转导中起到一个中心环节的作用。 展开更多

关键词 蛋白质酪氨酸磷酸酶 PC12细胞 细胞凋亡 神经生长因子 ERK通路 JNK通路

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汉坦病毒核蛋白基因截短片段在大肠杆菌中表达及其产物的初步应用 被引量：1

2

作者 祝晓春 姚智慧 +3 位作者 贺争鸣 胡经畬 董关木 俞永新 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2003年第1期1-4,共4页

目的　获得汉坦病毒重组核蛋白 ,并将其应用于血清学诊断。方法　采用PCR方法 ,从带有HTN型Z10株病毒全长核蛋白基因的质粒上扩增读码框的前 35 4bp的核蛋白基因片段。将截短的核蛋白基因片段插入表达载体pGEX 2 0T ,得到重组质粒pGEX2 ... 目的　获得汉坦病毒重组核蛋白 ,并将其应用于血清学诊断。方法　采用PCR方法 ,从带有HTN型Z10株病毒全长核蛋白基因的质粒上扩增读码框的前 35 4bp的核蛋白基因片段。将截短的核蛋白基因片段插入表达载体pGEX 2 0T ,得到重组质粒pGEX2 0 Z10trNP ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导表达 ,表达产物经Glu tathioneSepharose 4B柱纯化 ,并进行抗原性及抗原特异性检测。结果　pGEX2 0 Z10trBP表达产物是相对分子质量约为 4 0 0 0 0的谷光甘肽转移酶 (GST)融合蛋白GST Z10trNP。经Westernblot分析 ,GST Z10trNP具有良好的抗原性。用纯化GST Z10trNP为抗原 ,用ELISA间接法检测出血热病人血清、出血热疫苗免疫的家兔及小鼠血清 ,均能很好地区分阴性和阳性血清。结论　GST Z10trNP表达量高 ,易于纯化 ,并且具有良好的抗原性及抗原特异性 ,是一种安全、廉价的诊断抗原。 展开更多

关键词 汉坦病毒 核蛋白基因 截短片段 大肠杆菌 表达 产物 免疫印迹试验 间接酶联免疫吸附试验

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禽成髓性白血病病毒p27和gag基因的克隆 被引量：2

3

作者 祝晓春 陈福勇 常建宇 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2001年第8期8-10,共3页

禽成髓性白血病是由禽成髓性白血病病毒引起的一种禽白血病 (Avian L eukosis)。禽成髓性白血病病毒的 gag基因具有高度保守性 ,其编码的群特异性抗原 p2 7是禽白血病病毒所共有的主要核心蛋白 ,可做为禽白血病的诊断抗原。本实验采用 ... 禽成髓性白血病是由禽成髓性白血病病毒引起的一种禽白血病 (Avian L eukosis)。禽成髓性白血病病毒的 gag基因具有高度保守性 ,其编码的群特异性抗原 p2 7是禽白血病病毒所共有的主要核心蛋白 ,可做为禽白血病的诊断抗原。本实验采用 AMV感染鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,提取感染细胞总 RNA,用随机引物反转录成 c DNA,根据已经发表的 AMV BAI- A株序列设计两对针对 p2 7基因和 gag基因的特异性引物 ,分别进行 PCR,成功地扩出 p2 7基因和 gag基因 ,其片段分别为 793bp和 2 .1Kb。以 gag基因的 PCR产物为模版 ,采用 p2 7的特异性引物也成功扩出 p2 7片段。分别将 p2 7,gag基因与 p GEM- T Easy载体进行连接 ,转化大肠杆菌 ,筛选阳性克隆 ,提取质粒 ,进行酶切鉴定。对含有 p2 7基因的质粒进行测序 ,结果证明成功克隆了 p2 7基因 ,间接证明了2 .1Kb的片段是 gag基因。 p2 7和 gag基因的成功克隆为该病的探针诊断和 展开更多

关键词 禽成髓性白血病病毒 GAG基因 P27基因 RT-PCR 基因克隆

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汉坦病毒76-118株G2基因的克隆及其在甲基营养型酵母中的表达 被引量：1

4

作者 姚智慧 祝晓春 +2 位作者 董关木 贺争鸣 俞永新 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2003年第1期5-8,共4页

目的　获得汉坦病毒囊膜蛋白G2体外表达产物。方法　应用RT -PCR方法扩增汉坦病毒 76 -118株M片段编码的G2蛋白基因 ,并将扩增产物分别插入pPIC9K和pHIL -S1载体 ,命名为pPIC9K -G2和pHIL -S1-G2 ,分别与酵母的α因子信号肽和PH0 1信号... 目的　获得汉坦病毒囊膜蛋白G2体外表达产物。方法　应用RT -PCR方法扩增汉坦病毒 76 -118株M片段编码的G2蛋白基因 ,并将扩增产物分别插入pPIC9K和pHIL -S1载体 ,命名为pPIC9K -G2和pHIL -S1-G2 ,分别与酵母的α因子信号肽和PH0 1信号肽 3’端融合 ,处于醇氧化物酶 (AOX1)启动子下游。这 2个载体经线性化后分别转化甲基营养型酵母菌株GS115和SMD116 8,筛选后分别得到His+ Muts 转化子和His+ Mut+ 转化子 ,诱导表达后 ,用Dot ELISA检测。结果　Dot-ELISA检测为阳性。结论　成功地表达了汉坦病毒G2囊膜蛋白 ,为进一步研究其结构功能以及生物学特性奠定了良好基础。 展开更多

关键词 汉坦病毒76-118株 G2基因 克隆 甲基营养型酵母 表达

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我国肾综合征出血热疫苗生产株LR1株的全基因组序列分析 被引量：1

5

作者 姚智慧 王维新 +7 位作者 董关木 俞永新 杨世龙 祝晓春 刘文雪 马小奇 李萍 孙小慧 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期108-111,共4页

为测定我国肾综合征出血热疫苗生产株LR1株的全基因组序列 ,了解该株分子基础 ,从提取的细胞总RNA逆转录PCR扩增 ,产物纯化后克隆T载体纯化后测序 ,结果证明 ,LR1株全基因组序列由L6 5 33、M36 16、S片段的16 92个核苷酸组成 ,依各自读... 为测定我国肾综合征出血热疫苗生产株LR1株的全基因组序列 ,了解该株分子基础 ,从提取的细胞总RNA逆转录PCR扩增 ,产物纯化后克隆T载体纯化后测序 ,结果证明 ,LR1株全基因组序列由L6 5 33、M36 16、S片段的16 92个核苷酸组成 ,依各自读码框架分别编码 2 15 1、1135、42 9个氨基酸。序列同源比较分析表明 ,LR1毒株与国外HTN型毒株高度同源 ,属同一亚型 ,尤其与HTN代表株 76 - 1183个片段同源率高达 99 3%～ 99 8% ,而与国内的HTN型病毒差异较大 ,同源率仅为 79 4%～ 84 6 %。氨基酸比较也显示了同样的结果。 展开更多

关键词 肾综合征出血热 疫苗 LR1株 基因组序列测定 系统发生树

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活疫苗及其生产基质中Sendai病毒RT-PCR检测方法的研究

6

作者 姚智慧 祝晓春 +5 位作者 贺争鸣 董关木 卫礼 巩薇 吴惠英 邢瑞昌 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2001年第3期143-145,共3页

目的　建立检测Sendai病毒的RT PCR方法并应用于活疫苗及其生产基质中Sendai病毒的检测。方法　将Sendai病毒E17株接种 9日龄鸡胚尿囊腔 ,72h后收集尿囊液 ,用于提取病毒RNA ,并逆转录成cDNA ,用两对针对Sendai病毒NP基因设计的外引物... 目的　建立检测Sendai病毒的RT PCR方法并应用于活疫苗及其生产基质中Sendai病毒的检测。方法　将Sendai病毒E17株接种 9日龄鸡胚尿囊腔 ,72h后收集尿囊液 ,用于提取病毒RNA ,并逆转录成cDNA ,用两对针对Sendai病毒NP基因设计的外引物和内引物分别进行扩增。扩增产物克隆于T 载体 ,并测序。尿囊液按 10倍倍比稀释 ,进行敏感性实验。将该方法用于检测乙脑减毒活疫苗和用于生产疫苗用的普通级乳地鼠肾中的Sen dai病毒。结果　外引物和内引物的PCR分别扩增出 6 84bp和 2 48bp的片段 ,外引物PCR产物的测序结果与Gen bank报告的序列完全一致。敏感性实验结果表明 ,第一次PCR可检测到 10 - 4 病毒滴度 ,巢式PCR可检测到 10 - 7病毒滴度。乙脑减毒活疫苗和乳地鼠肾的检测结果为阴性。结论　建立检测Sendai病毒的RT 展开更多

关键词 病毒滴度 减毒活疫苗 乙脑 地鼠 RT-PCR方法 扩增 引物 基质 日龄 RT-PCR检测

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SHP-2^(C459/S)突变体在三氧化二砷诱导的HEK293T细胞凋亡中的作用

7

作者 董红岩 司云凤 +10 位作者 孙东升 祝晓春 齐琦 王果元 金成艳 王丽娜 李全凤 赵雅君 田野 徐长庆 张力 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 北大核心 2009年第4期313-315,共3页

目的观察三氧化二砷(As2O3)对293T细胞凋亡和增殖的影响并探讨SHP-2在其中的作用。方法显性负性SHP-2突变体SHP-2C459/S与具有绿色荧光蛋白基因的载体pEGFP-C1共转染入HEK293T细胞,Ho-echst33258染色检测细胞凋亡,细胞计数及荧光分光光... 目的观察三氧化二砷(As2O3)对293T细胞凋亡和增殖的影响并探讨SHP-2在其中的作用。方法显性负性SHP-2突变体SHP-2C459/S与具有绿色荧光蛋白基因的载体pEGFP-C1共转染入HEK293T细胞,Ho-echst33258染色检测细胞凋亡,细胞计数及荧光分光光度法检测细胞增殖。结果SHP-2C459/S突变体能增强细胞凋亡和减轻增殖抑制。结论SHP-2可能参与到As2O3诱导的细胞凋亡和增殖抑制的信号转导通路中。 展开更多

关键词 SHP-2 三氧化二砷 凋亡 增殖

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新基建浪潮下网络安全建设的思考 被引量：1

8

作者 祝晓春 《杭州科技》 2020年第4期42-45,共4页

2020年3月,中共中央政治局常务委员会召开会议提出,加快5G网络、数据中心等新型基础设施建设进度,意味着新基建进入了发展快车道。根据Strategy Analytics发布的最新研究报告《全球联网和物联网设备预测更新》指出,截至2018年底,全球联... 2020年3月,中共中央政治局常务委员会召开会议提出,加快5G网络、数据中心等新型基础设施建设进度,意味着新基建进入了发展快车道。根据Strategy Analytics发布的最新研究报告《全球联网和物联网设备预测更新》指出,截至2018年底,全球联网设备数量达220亿台,预测2030年联网设备数量将达到500亿台规模。 展开更多

关键词 联网设备 网络安全 数据中心 STRATEGY 基础设施建设 基建

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一部盛世危言的实证力作——读《高放文集——政治学与政治体制改革》有感

9

作者 吴绍禹 祝晓春 《社会科学研究》 CSSCI 北大核心 2004年第3期157-157,共1页

关键词 《高放文集——政治学与政治体制改革》 中国 社会主义 人民代表大会制度

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医院成本控制的几点建议

10

作者 祝晓春 《当代医学》 2008年第20期-,共2页

医院成本控制是医院在竞争中求生存、求发展的一种重要而直接有效的手段。成本控制要点是医院在市场经济运作中的难点,解决这些难点可以让医院更好开展医疗功能,谋求可延续性发展,创造有力的经济保障。为此文章提出了"以病人为中心... 医院成本控制是医院在竞争中求生存、求发展的一种重要而直接有效的手段。成本控制要点是医院在市场经济运作中的难点,解决这些难点可以让医院更好开展医疗功能,谋求可延续性发展,创造有力的经济保障。为此文章提出了"以病人为中心,激发员工动力"的成本控制思路。通过对医院各个经济环节的成本细化,找出问题并提出解决办法。建立全员成本意识,专业化的成本控制体系。以实现医院成本的有效控制和管理。 展开更多

关键词 医院 成本 控制 意识 方法

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SHP-2在三氧化二砷诱导HEK293T细胞凋亡中的作用 被引量：3

11

作者 司云凤 祝晓春 +7 位作者 孙东升 齐琦 王果元 金成艳 王丽娜 徐长庆 田野 张力 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1086-1089,共4页

目的探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在三氧化二砷(As2O3)诱导HEK293T细胞凋亡中的作用。方法将pIRES-GFP空载体、pIRES-GFP-SHP-2野生型和pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体载体通过磷酸钙方法转染HEK293T细胞;在5μmol.L-1的As2O3孵育48 h后,用... 目的探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在三氧化二砷(As2O3)诱导HEK293T细胞凋亡中的作用。方法将pIRES-GFP空载体、pIRES-GFP-SHP-2野生型和pIRES-GFP-SHP-2C459S突变体载体通过磷酸钙方法转染HEK293T细胞;在5μmol.L-1的As2O3孵育48 h后,用流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot方法检测Cyt-C、Caspase-3、p-ERK、ERK、p-JNK及JNK的表达变化。结果5μmol.L-1As2O3可诱导HEK293T细胞凋亡,SHP-2能抑制其作用;SHP-2C459S突变体组Cyt-C和Caspase-3表达均高于空载体组,SHP-2野生型组则低于空载体组;SHP-2野生型组p-ERK表达高于空载体组,SHP-2C459S突变体组则相反;p-JNK的表达,SHP-2C459S突变体组高于空载体组,而SHP-2野生型组低于空载体组。结论SHP-2可抑制As2O3诱导的HEK293T细胞凋亡,其机制可能与激活ERK和抑制JNK途径有关。 展开更多

关键词 蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2 三氧化二砷 细胞凋亡 ERK JNK HEK293T细胞 细胞信号转导

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传媒时代电视节目主持人与受众的交流思考

12

作者 祝晓春 《湖南大众传媒职业技术学院学报》 2004年第4期65-67,共3页

当代社会 ,电视作为最具有舆论引导力的大众传媒 ,在人们的现实生活中扮演着越来越重要的作用。作为连接电视传媒和受众纽带的电视节目主持人 ,不论是出于提高节目收视率的考虑 ,还是出于节目本身迎合受众审美要求提高的需要 ,他们与广... 当代社会 ,电视作为最具有舆论引导力的大众传媒 ,在人们的现实生活中扮演着越来越重要的作用。作为连接电视传媒和受众纽带的电视节目主持人 ,不论是出于提高节目收视率的考虑 ,还是出于节目本身迎合受众审美要求提高的需要 ,他们与广大电视受众的交流尤为重要。然而囿于传统传播方式的局限 ,主持人无法做到完全、公开、及时地与受众交流 ,因此 ,在现有条件下 。 展开更多

关键词 受众交流 电视节目主持人 电视受众 节目收视率 电视传媒 传媒时代 舆论引导 问题 公开 条件

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基于我国高速铁路事业发展的“动车乘务”专业人才需求分析——我校高职新专业“空中乘务（动车乘务方向）”专业建设 被引量：5

13

作者 祝晓春 任丽娜 梁川飞 《科教导刊（电子版）》 2013年第1期109-111,共3页

我国高速铁路的发展不仅对社会经济的发展起到重要的推动作用，而且对于高等职业教育也提供了难能可贵的发展机遇。对于日益完善的我国高速铁路网络，呼唤大量高质量、高素质专门的动车乘务人员，在我国提升铁路“硬”技术的同时，还需... 我国高速铁路的发展不仅对社会经济的发展起到重要的推动作用，而且对于高等职业教育也提供了难能可贵的发展机遇。对于日益完善的我国高速铁路网络，呼唤大量高质量、高素质专门的动车乘务人员，在我国提升铁路“硬”技术的同时，还需要同步跟进“软”技术——动车乘务服务。高速铁路的发展不仅需要大量高等级动车乘务人员。同时也需要高等职业教育领域提供服务动车乘务作业环境的专业教育和培训，应对新兴行业的职业要求培养适合的人才。 展开更多

关键词 高速铁路 动车乘务 高等职业教育

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“楚天技能名师”教学岗位建设与管理思考 被引量：1

14

作者 祝晓春 张丽娜 王芳 《科教文汇》 2016年第2期83-85,共3页

本文是基于我校作为湖北省教育厅准予建设"楚天技能名师"教学岗位的条件下,对这一教学岗位在学校建设和管理方面的实践做了纵向自我综合和横向分析。通过总结对比提出了对这一岗位建设和管理的几点意见,以期探索将这一岗位在... 本文是基于我校作为湖北省教育厅准予建设"楚天技能名师"教学岗位的条件下,对这一教学岗位在学校建设和管理方面的实践做了纵向自我综合和横向分析。通过总结对比提出了对这一岗位建设和管理的几点意见,以期探索将这一岗位在职业院校专业建设和发展中如何呈现利益最大化。 展开更多

关键词 楚天技能名师 岗位建设 岗位管理

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新分枝杆菌疫苗开发迫在眉睫

15

作者 祝晓春 《生物制品快讯》 2002年第9期22-22,共1页

关键词 分枝杆菌疫苗 疫苗开发 麻风病 分枝杆菌感染 肺结核 艾滋病

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行动导向教学对中职学生学习方式的绩效

16

作者 祝晓春 《进展》 2018年第3期105-106,共2页

职业学校专业教学通过老师的“教”和学生的“学”,让学生具备职业技能,从学校毕业后能够服务社会和更好的发展自己.本文通过分析行动导向教学的特点及对学习方式的影响,展现行动导向教学的绩效,它改善了教学的矛盾,让学生在“做中学”... 职业学校专业教学通过老师的“教”和学生的“学”,让学生具备职业技能,从学校毕业后能够服务社会和更好的发展自己.本文通过分析行动导向教学的特点及对学习方式的影响,展现行动导向教学的绩效,它改善了教学的矛盾,让学生在“做中学”,达成培养学生职业能力的目标. 展开更多

关键词 行动导向教学 中职学生 学习方式 职业能力 绩效

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基于网络文本分析和修正的IPA城镇旅游民宿旅游感知价值与满意度研究——以武汉市旅游民宿为例 被引量：8

17

作者 任丽娜 祝晓春 《中国市场》 2022年第7期115-120,共6页

城镇旅游民宿研究对于提升城镇旅游形象、促进全域旅游建设具有重要的实践意义。文章选取武汉市5个行政区划内的30家民宿的网络评论数据为样本,采用网络文本分析法进行编码,构建了城镇旅游民宿感知价值7个主类感知要素和22个亚类感知价... 城镇旅游民宿研究对于提升城镇旅游形象、促进全域旅游建设具有重要的实践意义。文章选取武汉市5个行政区划内的30家民宿的网络评论数据为样本,采用网络文本分析法进行编码,构建了城镇旅游民宿感知价值7个主类感知要素和22个亚类感知价值要素,并在此基础上二次编码为经济感知价值、情感体验价值、社会交往价值、功能性价值、延伸感知价值、美感体验价值六个价值维度。同时运用两种修正的IPA分析(实际检测数值均值法与偏相关系数的引申重要性法)更加客观地对武汉市旅游民宿顾客的感知价值因素的重要性与满意度以及感知价值进行对比分析,研究结果表明:一是大部分感知因素定位于相同的象限内,反映出类似的评价结果。同一象限内共同的因素如主客关系、周边自然文化环境、特色装修装饰感知因素重要性与评价都较高;二是两种评价结果并不完全一致,如只定位于引申重要性-绩效性表现评价象限图的重点改进区的民宿游客对整体印象、口碑、周围代表性景观和城市形象这几项感知因素期望值很高,但满意度较低,说明武汉市的城市形象与品牌精品民宿等吸引力不明显,是今后重点关注方面。而点评重要性-绩效表现的评价象限区绝大多数因素的满意度均较高。 展开更多

关键词 城镇旅游民宿 感知价值 满意度 修正的IPA

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保护猴子抵抗埃博拉病毒的试验疫苗

18

作者 祝晓春 《生物制品快讯》 2002年第5期19-19,共1页

关键词 疾病预防 埃博拉病毒感染 埃博拉病毒 试验疫苗

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九江石化总厂Ⅱ套硫磺回收装置废热锅炉改造

19

作者 祝晓春 金晖 《江西化工》 1999年第1期34-37,共4页

Ⅱ套硫磺回收装置工况条件改变后燃烧炉设备能力进行核算。

关键词 硫磺回收 燃烧炉 废热锅炉 技术改造

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基于智能视觉系统的饮料瓶缺陷检测技术 被引量：12

20

作者 徐赤 王志平 +2 位作者 凌永祥 祝晓春 秦嘉炜 《自动化与仪器仪表》 2011年第5期163-167,共5页

研究基于智能机器视觉系统的饮料瓶封装缺陷检测应用技术。根据饮料瓶封装缺陷检测的特点及实际生产要求,提出了一套智能机器视觉系统应用的总体解决方案。对整个系统的结构原理,工作流程以及各个组成部分的功能做了具体的阐述。应用结... 研究基于智能机器视觉系统的饮料瓶封装缺陷检测应用技术。根据饮料瓶封装缺陷检测的特点及实际生产要求,提出了一套智能机器视觉系统应用的总体解决方案。对整个系统的结构原理,工作流程以及各个组成部分的功能做了具体的阐述。应用结果表明,使用上述机器视觉系统实现方便,功能强大,取得了良好的应用效果。 展开更多

关键词 机器视觉 检测技术 缺陷检测 康耐视 饮料瓶

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