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周期性张应力下成肌细胞中半胱天冬氨酸蛋白酶9参与力学信号传导
1
作者 王爽玉 王洪玲 +9 位作者 夏晨蕾 丁弦 孙仙蕊 张强 李建平 阎潇 刘文 张月 姚如永 袁晓 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第15期2383-2389,共7页
背景:功能矫形使面颌部肌肉发生适应性改建,以纠正错颌畸形。成肌细胞是适应性改建的主要体现者,周期性牵张应力导致成肌细胞凋亡,而半胱天冬氨酸蛋白酶9是线粒体凋亡通路中的重要因子。目的:明确半胱天冬氨酸蛋白酶9在不同时间周期性... 背景:功能矫形使面颌部肌肉发生适应性改建,以纠正错颌畸形。成肌细胞是适应性改建的主要体现者,周期性牵张应力导致成肌细胞凋亡,而半胱天冬氨酸蛋白酶9是线粒体凋亡通路中的重要因子。目的:明确半胱天冬氨酸蛋白酶9在不同时间周期性张应力作用下的表达变化。方法:以大鼠L6成肌细胞为实验对象,在成功构建成肌细胞体外培养-力学刺激模型的基础上,通过多通道细胞牵张应力加载系统,分别对待测细胞持续施加1,6,12,24 h的周期性张应力,不加力组为对照组。倒置相差显微镜下观察成肌细胞的形态学改变和生长状况;运用RT-PCR和Western Blot技术检测周期性张应力作用下半胱天冬氨酸蛋白酶9的mRNA和蛋白含量变化。结果与结论:倒置相差显微镜观察结果显示成肌细胞施加周期性张应力后贴壁生长情况良好,细胞无变性并且脱落率极低,说明成功构建了成肌细胞体外培养-力学刺激模型。RT-PCR和Western Blot检测结果显示,随着加力时间的延长,半胱天冬氨酸蛋白酶9 mRNA含量和活化型半胱天冬氨酸蛋白酶9的蛋白含量均显著增加,而半胱天冬氨酸蛋白酶9前体蛋白含量随着加力时间的延长均显著降低。可见半胱天冬氨酸蛋白酶9参与了周期性张应力作用下的力学信号传导。 展开更多
关键词 组织构建 组织工程 半胱天冬氨酸蛋白酶9 周期性张应力 成肌细胞 凋亡 线粒体通路 国家自然科学基金 CASPASE-9
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成肌细胞体外培养-力学刺激模型与周期性张应力的影响 被引量：3
2
作者 张强 王洪玲 +11 位作者 丁弦 夏晨蕾 刘丽娟 王爽玉 李建平 贺苗 孙文娜 阎潇 刘文 张月 姚如永 袁晓 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第5期669-674,共6页
背景:内质网应激参与多种疾病的发生发展过程,如动脉粥样硬化、糖尿病、阿尔茨海默病,GRP78是内质网应激的标志蛋白,GRP78的表达水平反映内质网应激的程度。目的:研究周期性张应力对L6大鼠成肌细胞GRP78表达的影响,以明确周期性张应力... 背景:内质网应激参与多种疾病的发生发展过程,如动脉粥样硬化、糖尿病、阿尔茨海默病,GRP78是内质网应激的标志蛋白,GRP78的表达水平反映内质网应激的程度。目的:研究周期性张应力对L6大鼠成肌细胞GRP78表达的影响,以明确周期性张应力与内质网应激的关系。方法:在成功构建L6大鼠成肌细胞体外培养力学刺激模型的基础上,采用RT-PCR和Western blot法分析周期性张应力对GRP78 mRNA和蛋白表达的影响。加力组分别给予1,6,12,24 h的力学刺激,加载频率为10 cycles/min,拉伸变形幅度为15%。对照组与实验组在同时种板,不给予力刺激。结果与结论:GRP78 mRNA随着加力时间的延长呈一致上升趋势,与对照组相比,差异均有显著性意义(P<0.05);GRP78蛋白在加力1 h后,蛋白表达量开始升高,加力6 h后蛋白表达量显著升高,到24 h达到峰值,与对照组相比,差异均有显著性意义(P<0.05)。由以上结果得出,在一定时间范围内,周期性张应力可引起内质网应激,并且随着时间的延长逐渐增强;持续的应力刺激,可引起严重的内质网应激导致成肌细胞凋亡。 展开更多
关键词 实验动物 组织构建 GRP78 周期性张应力 内质网应激 L6 成肌细胞 功能矫形 国家自然科学基金
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钙调神经磷酸酶-T细胞核因子信号通路在应力诱导成肌细胞凋亡中的作用 被引量：2
3
作者 丁弦 夏晨蕾 +8 位作者 贺苗 孙文娜 王芳 姜文心 张彩霞 王爽玉 张强 姚如永 袁晓 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期456-461,共6页
目的探讨钙调神经磷酸酶(CaN)-T细胞核因子(NFAT)信号通路在应力介导的成肌细胞凋亡中的作用。方法构建成肌细胞体外培养—力学刺激模型,利用多通道应力加载系统对细胞加载不同时间的周期性张应力,加入CaN的特异性抑制剂环孢素(CsA)作... 目的探讨钙调神经磷酸酶(CaN)-T细胞核因子(NFAT)信号通路在应力介导的成肌细胞凋亡中的作用。方法构建成肌细胞体外培养—力学刺激模型,利用多通道应力加载系统对细胞加载不同时间的周期性张应力,加入CaN的特异性抑制剂环孢素(CsA)作为对比。采用Hoechst 33258染色法和流式细胞术检测成肌细胞凋亡情况,实时聚合酶链式反应检测CaN和NFAT mRNA的表达情况,蛋白质印迹法检测NFAT3的蛋白含量。结果随加力时间的延长,细胞凋亡逐渐增加,CaN亚基CnA、CnB及NFAT3的mRNA表达及NFAT3蛋白含量逐渐升高;加入CsA后,细胞凋亡减少,CnA、NFAT3的mRNA表达及NFAT3的蛋白含量明显减少。结论周期性张应力可以诱导成肌细胞发生凋亡;CaN-NFAT信号通路可能参与了周期性张应力诱导的成肌细胞凋亡。 展开更多
关键词 成肌细胞 细胞凋亡 钙调神经磷酸酶 T细胞核因子 周期性张应力
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周期性张应力对面颌肌细胞Na^+/K^+-ATPase的影响
4
作者 孙仙蕊 刘丽娟 +6 位作者 阎潇 王爽玉 张强 李建平 贾萍萍 姚如永 袁晓 《现代生物医学进展》 CAS 2013年第12期2230-2235,共6页
目的:研究周期性张应力对Na+/K+-ATPase功能活性及其表达的影响,明确Na+/K+-ATPase在功能矫形中面颌肌肉适应性改建的生物和分子机制。方法:构建面颌肌细胞体外培养-力学刺激模型;应用多通道细胞牵张应力加载系统,对面颌肌细胞施加不同... 目的:研究周期性张应力对Na+/K+-ATPase功能活性及其表达的影响,明确Na+/K+-ATPase在功能矫形中面颌肌肉适应性改建的生物和分子机制。方法:构建面颌肌细胞体外培养-力学刺激模型;应用多通道细胞牵张应力加载系统,对面颌肌细胞施加不同时段的张应力刺激,测定Na+/K+-ATPase的功能活性;运用实时荧光定量PCR研究周期性张应力刺激对Na+/K+-ATPase功能亚基α亚单位mRNA的影响。结果:Na+/K+-ATPaseα1,α2亚单位随着加力时间延长,表达增强,同对照组比较,呈一致性上调(P<0.001);细胞加力1小时,α1的mRNA表达不受影响;加力2小时后,α1和α2的mRNA表达呈现逐渐增强趋势,48 h时达到最大值。张应力刺激对α2亚单位的mRNA表达似乎更为敏感,加力1 h时α2亚单位的mRNA表达水平即增加,增加量约为对照组的37.74%,具有显著的统计学意义。结论:周期性的机械牵张作用于培养的骨骼肌细胞,可诱导α1和α2亚单位mRNA的表达量增加;α1和α2亚单位对周期性张应力刺激的作用时间反应不同,α2亚单位的反应可能更为敏感。周期性张力刺激的增加所产生的压力可能是转录调节的主要因素;周期性张应力对骨骼肌细胞Na+/K+-ATPase水解亚的调节作用不同,可能在面颌肌肉对功能矫形力的适应性改建中具有重要作用。 展开更多
关键词 面颌肌细胞 功能矫形 Na+ K+-ATPase Α亚单位 张应力刺激
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周期性张应变对面颌部肌细胞Na^+/K^+-ATPaseα亚单位蛋白表达的影响
5
作者 刘丽娟 孙仙蕊 +6 位作者 阎潇 张强 王爽玉 李建平 贾萍萍 姚如永 袁晓 《现代生物医学进展》 CAS 2013年第10期1861-1865,共5页
目的:研究周期性张应变对面颌肌细胞Na+/K+-ATPaseα亚单位蛋白表达的影响以确定其作用及机制。方法:在建立面颌肌细胞的力学刺激--细胞体外培养模型的基础上,采用Western blot法分析周期性张应变对Na+/K+-ATPaseα1和α2亚单位蛋白表... 目的:研究周期性张应变对面颌肌细胞Na+/K+-ATPaseα亚单位蛋白表达的影响以确定其作用及机制。方法:在建立面颌肌细胞的力学刺激--细胞体外培养模型的基础上,采用Western blot法分析周期性张应变对Na+/K+-ATPaseα1和α2亚单位蛋白表达的影响,加力组分别给予1、2、12、24和48h的力学刺激,施加力值为15%的细胞形变,频率为10cycles/min。以静态组为对照组。对照组及实验组各包含4个实验样本。Western blot检测Na+/K+-ATPaseα1和α2亚单位蛋白的表达。结果:α1亚单位的蛋白表达量除加力1h组与对照组之间、加力24 h与48 h之间无统计学差异外,其余各组之间以及各组与对照组之间均有显著的统计学意义。α2亚单位蛋白表达量除加力24 h与48 h组之间无统计学差异外,其余各组之间以及各组与对照组之间均有显著的统计学意义。结论:在一定时间范围内,周期性张应变可刺激α1和α2亚单位蛋白表达增加,随作用时间的延长蛋白表达受抑制。提示在肌能力的刺激下,面颌肌细胞的相关酶蛋白的功能及表达将发生适应性改建,但其功能亚基的调控机制可能不同。这为选择不同的方法和手段进行临床干预提供了理论依据,因而具有重要的参考意义。 展开更多
关键词 周期性张应力 面颌肌细胞 Na+ K+-ATPaseα亚单位蛋白
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周期性张应力刺激下成肌细胞钙网蛋白的表达及变化 被引量：1
6
作者 李建平 王洪玲 +10 位作者 高玉丽 丁弦 夏晨蕾 贾萍萍 张强 王爽玉 阎潇 刘文 张月 姚如永 袁晓 《现代生物医学进展》 CAS 2014年第9期1657-1661,共5页
目的:检测成肌细胞钙网蛋白(CRT)在循环拉伸应力刺激下的表达变化。方法:体外构建面颌部成肌细胞力学刺激模型。加力组以0.5赫兹的加载频率和10%细胞拉伸变形幅度对细胞进行加力培养1 h,6 h,12 h,24 h,运用实时荧光定量PCR技术跟Western... 目的:检测成肌细胞钙网蛋白(CRT)在循环拉伸应力刺激下的表达变化。方法:体外构建面颌部成肌细胞力学刺激模型。加力组以0.5赫兹的加载频率和10%细胞拉伸变形幅度对细胞进行加力培养1 h,6 h,12 h,24 h,运用实时荧光定量PCR技术跟Western Blot技术分别检测在周期性张应力作用下成肌细胞CRT在基因水平及蛋白水平的表达变化。结果:当对细胞加力6 h后,CRT mRNA及蛋白表达量开始增多,加力12 h后CRT mRNA及蛋白表达量到达最多(P<0.01),加力0h组与加力12 h组之间差异有显著的统计学意义(P<0.01)。结论:持续的周期性张应力刺激下CRT mRNA及蛋白表达增加。 展开更多
关键词 张应力 钙网蛋白 细胞凋亡 功能矫形 成肌细胞
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自噬在应力诱导成肌细胞凋亡中的作用初探
7
作者 孙文娜 贺苗 +10 位作者 夏晨蕾 丁弦 张强 王爽玉 王芳 张彩霞 姜文心 阎潇 孙同正 余海波 袁晓 《现代生物医学进展》 CAS 2016年第11期2045-2048,共4页
目的:探讨自噬在周期性张应力介导的成肌细胞凋亡中的作用,以明确应力诱导内质网应激引起自噬与凋亡之间的关系。方法:在成功构建L6大鼠体外培养--力学刺激模型的基础上,采用Western Blot法分析周期性张应力对自噬相关蛋白LC3蛋白表达... 目的:探讨自噬在周期性张应力介导的成肌细胞凋亡中的作用,以明确应力诱导内质网应激引起自噬与凋亡之间的关系。方法:在成功构建L6大鼠体外培养--力学刺激模型的基础上,采用Western Blot法分析周期性张应力对自噬相关蛋白LC3蛋白表达的影响,并通过Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡情况。加力组分别给予1,6,12,24 h的力学刺激(拉伸变形率为15%,频率为10循环/min),3-MA组和Rapamycin组在加力2 h前分别加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤和自噬激活剂雷帕霉素并且加力24 h,0 h组与实验组在同时种板但是不给予力刺激。采用SPSS17.0统计软件对以上数据进行统计分析。结果:成肌细胞中的LC3II/LC3I值随加力时间延长呈上升趋势,24 h达最高(P<0.05);抑制组的细胞凋亡率(18.75±1.06%)相对于0 h组(0.726±0.13%)和加力24 h组(14.84±1.14%)的明显升高(P<0.05);Rapamycin组相对于加力24 h组的细胞凋亡率明显下降(8.88±1.08%vs 14.84±1.14%),但是细胞凋亡率仍然高于0 h组的(8.88±1.08%vs 0.726±0.13%)。结论:在一定时间范围内,周期性张应力可诱导成肌细胞发生自噬,并且自噬活性与作用时间成正比;自噬可以降低应力介导的成肌细胞凋亡的活性。 展开更多
关键词 自噬 凋亡 周期性张应力 内质网应激 成肌细胞
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