重组酶Cre基因在大肠杆菌中的高效表达及其一步纯化和活性检测 被引量：4

1

作者 王文棋 盖颖 +1 位作者 陆海 蒋湘宁 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期57-60,共4页

为了实现DNA重组酶Cre在体外的应用,以pET-30a高效表达载体为基础构建了pTE30-Cre质粒.将此质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导的Cre基因的高效表达.对表达出的Cre重组酶蛋白进行镍离子鳌合法一步纯化,并以带有两个同向loxP位点... 为了实现DNA重组酶Cre在体外的应用,以pET-30a高效表达载体为基础构建了pTE30-Cre质粒.将此质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导的Cre基因的高效表达.对表达出的Cre重组酶蛋白进行镍离子鳌合法一步纯化,并以带有两个同向loxP位点的质粒为底物,对纯化出的Cre酶进行活性检测.该实验为Cre酶的体外应用奠定了基础. 展开更多

关键词 DNA重组酶Cre pET30-Cre高效表达 一步纯化 Cre酶活性检测

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DNA重组酶Cre介导载体间基因的重组转移 被引量：3

2

作者 王文棋 盖颖 +2 位作者 陆海 李义 蒋湘宁 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1210-1215,共6页

DNA重组酶Cre可以识别LoxP位点,使含有LoxP位点的DNA分子发生重组:2个同向LoxP之间的DNA片段被删除,2个环状DNA分子被整合为一个大分子.基于Cre酶的这些作用特性,构建了一套载体间基因的重组转移体系,在Cre酶的作用下,gfp基因被从基因供... DNA重组酶Cre可以识别LoxP位点,使含有LoxP位点的DNA分子发生重组:2个同向LoxP之间的DNA片段被删除,2个环状DNA分子被整合为一个大分子.基于Cre酶的这些作用特性,构建了一套载体间基因的重组转移体系,在Cre酶的作用下,gfp基因被从基因供体pTLG上切除下来,然后转移到基因受体pET-LoxP上,从而快速、简便地完成了gfp基因高效表达载体pET-gfp的构建.gfp基因在大肠杆菌BL21(DE3)中被诱导表达,使菌落产生了可视的绿色荧光.通过对荧光菌落的计数分析,比较了环状基因供体pTLG和线性基因供体pTLG对有效重组率的影响.使繁琐的传统载体构建变为简单的酶促反应,极大地简化了载体构建步骤,为Cre酶在基因克隆和亚克隆中的应用提供了很好的研究基础. 展开更多

关键词 DNA重组酶Cre 基因供体pTLG 基因受体pET-LoxP GFP基因 绿色荧光菌落

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中国资源型城市转型发展全景知识图谱——演进脉络、热点追踪及未来展望 被引量：3

3

作者 王文棋 刘兆德 赵虎 《地理科学》 CSSCI CSCD 北大核心 2024年第5期785-795,共11页

以1999—2021年602篇CSSCI期刊论文为研究对象,借助CiteSpace、VOSviewer、Data数据园、科学知识图谱等软件,从时间、期刊及作者分布3个方面解析中国资源型城市转型发展研究能量分布,并从研究脉络、热点前沿等方面探究整体概况。结论如... 以1999—2021年602篇CSSCI期刊论文为研究对象,借助CiteSpace、VOSviewer、Data数据园、科学知识图谱等软件,从时间、期刊及作者分布3个方面解析中国资源型城市转型发展研究能量分布,并从研究脉络、热点前沿等方面探究整体概况。结论如下:①20世纪80年代以来,中国资源型城市转型发展逐渐进入政府和学术界视野,但直到2004年以后才真正被学术界大量关注研究;②中国资源型城市转型发展研究大致可划分为缓慢摸索期(2003年之前)、高速增长期(2004—2013年)及稳步推进期(2014年至今)3个时期;③研究热点前沿主要集中在资源型城市绿色转型发展、资源型城市人口收缩、资源型城市碳排放、资源型城市空间重构、资源富集地区创新转型发展、采煤沉陷区及独立工矿区两类特殊困难地区综合治理6个方面。最后,从资源型城市高质量发展、资源型城市精明发展、资源型城市碳减排及资源型城市空间发展4个方面提出未来研究方向展望。研究旨在为新发展阶段中国资源型城市高质量发展提供有益的探索。 展开更多

关键词 资源型城市 转型发展 CITESPACE VOSviewer 全景知识图谱

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植物基因启动子研究进展 被引量：85

4

作者 张春晓 王文棋 +1 位作者 蒋湘宁 陈雪梅 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1455-1464,共10页

综述了植物基因启动子的核心结构与功能、植物基因启动子的种类 :异源组成型启动子 (CaMV35S、MMV)和从植物自身克隆的组成型启动子 (PTSB1和PPHYB) ,以及植物中通过按物理因素 (温、光、旱、热等 )、化学因素 (离子、有机物、激素等 )... 综述了植物基因启动子的核心结构与功能、植物基因启动子的种类 :异源组成型启动子 (CaMV35S、MMV)和从植物自身克隆的组成型启动子 (PTSB1和PPHYB) ,以及植物中通过按物理因素 (温、光、旱、热等 )、化学因素 (离子、有机物、激素等 )和生物因素 (病菌、组织器官、发育阶段等 )诱导表达的一些启动子 ,发育时期特异的启动子、器官特异的启动子 (根、茎、叶等 ) 展开更多

关键词 植物基因启动子 诱导型启动子 特异性启动子 双向表达启动子

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干旱胁迫下胡杨生理适应机制的研究 被引量：14

5

作者 杨永青 王文棋 +4 位作者 Erio A.Ottow 兰海燕 张富春 Andrea Polle 蒋湘宁 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第S2期6-11,共6页

胡杨具有很强的抗旱能力,是生长在沙漠地区少有的乔木树种,在我国主要分布于新疆的塔克拉玛干沙漠.为了更深入阐明胡杨的抗旱机制,我们对生长在新疆塔克拉玛干沙漠的天然胡杨林进行了实地调查、现场采样和室内相关实验.结果表明,在干旱... 胡杨具有很强的抗旱能力,是生长在沙漠地区少有的乔木树种,在我国主要分布于新疆的塔克拉玛干沙漠.为了更深入阐明胡杨的抗旱机制,我们对生长在新疆塔克拉玛干沙漠的天然胡杨林进行了实地调查、现场采样和室内相关实验.结果表明,在干旱胁迫下,胡杨叶片的蒸腾作用减少,气孔阻力增加.严重干旱胁迫后,叶片中的K+和Ca2+含量增加,分别为对照的1·43倍和2·99倍,而Mg2+和Na+变化不明显.和对照相比,中度干旱胁迫下胡杨叶片质膜H+--ATPase的质子转运活性没有差别,但严重干旱胁迫则使其活性降低,质膜H+--ATPase转运质子的能力下降.以上结果表明,胡杨可通过增加气孔阻力来降低胡杨叶片的蒸腾作用,选择性的吸收无机离子以及降低ATP消耗来适应干旱环境的胁迫. 展开更多

关键词 胡杨 抗旱 蒸腾作用 离子含量 质膜H+-ATPase

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一种改进的双色SDS-PAGE凝胶和可视化上样电泳方法 被引量：2

6

作者 盖颖 王文棋 蒋湘宁 《北京林业大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第1期103-106,共4页

SDSPAGE电泳是蛋白质分析和研究中的重要高效手段.由于分离胶、浓缩胶与电泳缓冲液以及空气都是无色透明的物质,在胶的制作和点样过程中仅仅通过浓缩胶相与缓冲液水相或空气相对光的折射来准确判断点样孔的位置并进行点样操作,因而比较... SDSPAGE电泳是蛋白质分析和研究中的重要高效手段.由于分离胶、浓缩胶与电泳缓冲液以及空气都是无色透明的物质,在胶的制作和点样过程中仅仅通过浓缩胶相与缓冲液水相或空气相对光的折射来准确判断点样孔的位置并进行点样操作,因而比较困难.该文介绍1种在浓缩胶中添加颜色染料,使浓缩胶显现颜色,以此可视化区分浓缩胶中点样孔(井)位置的方法,可以准确而高效完成点样操作,使传统的SDSPAGE点样过程通过折光性来判断变为可视化准确判断,提高点样效率和电泳质量. 展开更多

关键词 蛋白质分析 双色可视化上样 SDS-PAGE电泳

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DNA重组酶FLP原核表达与多步法纯化及其活性检测 被引量：1

7

作者 盖颖 王文棋 +1 位作者 陆海 蒋湘宁 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期724-729,共6页

DNA重组酶FLP存在于酵母2μ质粒上，能识别34bp的FRT位点，并根据2个FRT位点的相对方向完成位点间DNA序列的交换、重组、删除与逆转，在现代分子生物学理论研究与基因工程技术开发中具有广泛应用。构建了在原核大肠杆菌中高效表达FLP重... DNA重组酶FLP存在于酵母2μ质粒上，能识别34bp的FRT位点，并根据2个FRT位点的相对方向完成位点间DNA序列的交换、重组、删除与逆转，在现代分子生物学理论研究与基因工程技术开发中具有广泛应用。构建了在原核大肠杆菌中高效表达FLP重组酶的表达载体pQE32-flpe并建立起相应的原核高效表达体系，在原核细菌大肠杆菌M15菌株中实现FLP酶蛋白的高效表达，同时建立了相应的纯化方法。纯化时先用硫酸铵沉淀法富集FLP酶蛋白，经透析脱盐后再用镍离子鳌合微柱（0．5—1．0mL）亲合层析梯度洗脱的方法获得纯化的FIJP酶蛋白。通过构建含有2个方向相同的FRT序列位点的质粒pUC18-FRT-gfp-FRT和含有1个FRT位点的表达载体pET30a-FRT，并分别以其为底物来检测FLP重组酶的删除、交换与重组功能的活性。结果表明，该方法不仅能有效表达FLP酶蛋白，并能行之有效地纯化FLP酶蛋白，以及检测纯化的FLP酶蛋白对DNA序列的删除、重组与交换功能。该方法简单易行并能获得有活性的FLP酶蛋白，为深入研究其机理以及研发相应的DNA重组技术提供重要参考。 展开更多

关键词 重组酶FLP 高效表达 硫酸铵沉淀 亲合层析 交换活性

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基于湿热气候环境下的广州民居形式研究 被引量：2

8

作者 王文棋 拜盖宇 《中外建筑》 2014年第8期86-89,共4页

西关大屋、竹筒屋是为应对岭南地区湿热气候环境,先民们探索出来的具有岭南特色的民居形式。本文主要从现状分布较为广泛的广州西关地区作为研究对象,分析西关大屋、竹筒屋所在地区的街区形态、地块尺度、西关文化等要素,研究西关大屋... 西关大屋、竹筒屋是为应对岭南地区湿热气候环境,先民们探索出来的具有岭南特色的民居形式。本文主要从现状分布较为广泛的广州西关地区作为研究对象,分析西关大屋、竹筒屋所在地区的街区形态、地块尺度、西关文化等要素,研究西关大屋、竹筒屋的平面布局形式及其主要特点;最后指出,厅堂、天井、冷巷是广州民居为适应岭南湿热气候环境所必备的通风设备。期望对位于湿热环境气候条件下建筑设计有一定的借鉴意义,尤其是住宅建筑设计。 展开更多

关键词 湿热气候环境 西关大屋 竹筒屋

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新加坡组屋制度的借鉴意义 被引量：1

9

作者 王文棋 《中外建筑》 2014年第7期82-84,共3页

新加坡组屋制度消除了其自治之初的贫民窟,到1989年新加坡已经有87%的人口居住在组屋内,政府真正实现了"居者有其屋"的目标。本文分析了新加坡组屋制度的发展背景,从新加坡组屋制度的开发模式、法律法规政策等方面,深入探讨... 新加坡组屋制度消除了其自治之初的贫民窟,到1989年新加坡已经有87%的人口居住在组屋内,政府真正实现了"居者有其屋"的目标。本文分析了新加坡组屋制度的发展背景,从新加坡组屋制度的开发模式、法律法规政策等方面,深入探讨新加坡组屋制度的成功经验和积极意义;通过具有相似背景的深圳市保障房制度与新加坡组屋制度的对比分析,找出我国保障房制度存在问题;指出我国内地保障房建设,应不以盈利为目的,政府要牢牢掌握住保障房的控制权,使保障房真正达到满足低收入者的需求。 展开更多

关键词 新加坡 组屋制度 深圳市 保障房制度 借鉴意义

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2000年以来中国县域城镇化研究全景知识图谱

10

作者 陈素青 王文棋 +2 位作者 刘兆德 李沅泽 陈有川 《枣庄学院学报》 2024年第5期33-40,共8页

以2000—2023年CNKI中1056篇CSSCI论文为研究对象,综合运用CiteSpace知识图谱软件,系统分析2000年以来我国县域城镇化研究文献特征、演进脉络、热点前沿。研究发现:县域城镇化初始研究主要集中在县域经济、城镇化等方面,直到2007年县域... 以2000—2023年CNKI中1056篇CSSCI论文为研究对象,综合运用CiteSpace知识图谱软件,系统分析2000年以来我国县域城镇化研究文献特征、演进脉络、热点前沿。研究发现:县域城镇化初始研究主要集中在县域经济、城镇化等方面,直到2007年县域城镇化关键词才首次出现,并逐渐成为学术界研究的热点;研究脉络大致可分为初始起步阶段(2009年之前)、稳步推进阶段(2010—2021年)、高速增长阶段(2022年至今)3个阶段;从研究热点前沿来看,近年来县域城镇化相关研究主要集中在城镇化类型划分及优化路径、城乡融合发展、城镇化时空格局、人口流动趋势、县域经济高质量发展等5个方面。最后,从高质量发展、乡村振兴、中国式现代化3个方面提出未来研究展望。 展开更多

关键词 县域城镇化 县域发展 CiteSpace 热点前沿 全景知识图谱

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城乡规划专业毕业设计指导方法探析——以华北水利水电大学城乡规划专业毕业设计指导为例

11

作者 王文棋 《河南科技》 2014年第7期270-271,共2页

对于城乡规划专业的毕业设计来说,图纸表达至关重要,学生们的创造性思维和实践动手能力很重要。本文主要从城乡规划专业课设置特点、毕业设计选题、毕业设计教学过程、毕业设计教学方法四个方面展开探讨毕业设计的具体指导方法,希望对... 对于城乡规划专业的毕业设计来说,图纸表达至关重要,学生们的创造性思维和实践动手能力很重要。本文主要从城乡规划专业课设置特点、毕业设计选题、毕业设计教学过程、毕业设计教学方法四个方面展开探讨毕业设计的具体指导方法,希望对以后的城乡规划专业毕业设计指导有所帮助。 展开更多

关键词 城乡规划专业 毕业设计 教学改革

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观蟹战

12

作者 王文棋 《快乐作文（中年级版）》 2009年第7期30-30,共1页

暑假的一天，我正在书房写作业，突然传来了妹妹的喊声：“姐姐快来看，快来看，两只螃蟹打架呢!” 我连忙放下笔，来到鱼缸旁观战。只见大蟹昂首挺胸，扬起武器——大钳，好像在对小蟹说：“你这个自不量力的家伙，是不是活腻了？”

关键词 《观蟹战》 小学 作文 王文棋

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资源枯竭城市空间演化特征及精明收缩策略——以枣庄市为例 被引量：1

13

作者 王文棋 刘兆德 +2 位作者 刘聪 张寅 陈有川 《资源科学》 CSSCI CSCD 北大核心 2024年第6期1131-1143,共13页

【目的】中国部分资源型城市已经出现人口收缩现象,资源枯竭城市人口收缩趋势更加明显、特征更加鲜明,厘清其空间演化特征,可为资源型城市国土空间优化与资源合理配置提供有益探索和理论支撑。【方法】本文以中国东部地区首个地级资源... 【目的】中国部分资源型城市已经出现人口收缩现象,资源枯竭城市人口收缩趋势更加明显、特征更加鲜明,厘清其空间演化特征,可为资源型城市国土空间优化与资源合理配置提供有益探索和理论支撑。【方法】本文以中国东部地区首个地级资源枯竭城市山东省枣庄市为典型案例,基于枣庄市不同时期的人口、产业、空间数据,利用ArcGIS空间计量及统计分析法,以典型年份城市建成区用地扩展为基础,选取城市化强度、重心和紧凑度等指标,深入剖析1980—2020年枣庄市城市空间演化特征,并据此提出精明收缩策略。【结果】研究发现:①枣庄市城市空间扩展具有明显的阶段性特征,经历了稳步增长—急剧提升—迅速下降的过程。②枣庄市空间结构由新中国成立初期“城·矿一体”单中心型演化为“一主一副两极驱动”组团型,且空间结构较为分散,受资源约束性较强。城市土地利用集约程度不高,城市重心总体呈现出西移北偏的态势,建成区用地紧凑度逐渐下降,城市空间结构演化与产业用地发展密切相关。③枣庄市城市空间收缩迹象显现,且具有发展为收缩城市的显著特征。自2009年煤炭资源枯竭以来,人口增速明显放缓;2020年以来,常住人口下降明显,呈现人口收缩状态。2010—2020年城市空间扩展仅10.74 km2,从空间演化趋势来看,未来极有可能出现城市收缩现象。【结论】精明发展应是资源枯竭城市主要发展方向,未来可从产业用地优化配置及有序退出、城市空间紧凑集约发展、城市绿色空间及绿色基础设施网络构建3个方面应对可能出现的城市收缩。 展开更多

关键词 资源枯竭城市 人口收缩 空间演化 精明收缩策略 枣庄市

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国家自然科学基金申请项目人员查重方法应用和比较 被引量：1

14

作者 王文棋 张建波 +1 位作者 李国栋 郑海武 《中国科学基金》 CSSCI CSCD 北大核心 2012年第5期288-290,共3页

近几年来，随着国家对基础科研经费投入的加大，国家自然科学基金的项目申请数每年都在快速增长。从2008-2011年，国家自然科学基金委员会（以下简称“自然科学基金委”）接收的项目申请数量分别为79860、97755、115179和147703项。

关键词 国家自然科学基金委员会 基金申请项目 应用 项目申请 经费投入

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论国家自然科学基金对提升地方高校科学研究能力的重要性——以燕山大学为例 被引量：4

15

作者 宓翠 袁旭梅 王文棋 《中国科学基金》 CSSCI CSCD 北大核心 2013年第3期173-176,共4页

随着《国家中长期科学和技术发展规划纲要（2006--2020）》的实施，国家对基础研究的投入逐年增加，基础研究的战略意义和重要作用得到了前所未有的广泛共识和重视，科研院所和高等学校对基础研究的认识不断深化。国家自然科学基金（以... 随着《国家中长期科学和技术发展规划纲要（2006--2020）》的实施，国家对基础研究的投入逐年增加，基础研究的战略意义和重要作用得到了前所未有的广泛共识和重视，科研院所和高等学校对基础研究的认识不断深化。国家自然科学基金（以下简称科学基金）作为我国支持基础研究的主要渠道之一，在促进我国整体基础研究水平提升、基础学科建设与发展、优秀科技人才培养等方面发挥了巨大的作用。 展开更多

关键词 国家自然科学基金 科学研究能力 燕山大学 地方高校 基础研究 科技人才培养 科研院所 学科建设

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燕山大学获得国家自然科学基金资助情况和效果分析

16

作者 陈子阳 王文棋 李国栋 《中国科学基金》 CSCD 北大核心 2010年第6期362-364,共3页

1燕山大学2005-2009年度获得国家自然科学基金资助情况分析 燕山大学源于哈尔滨工业大学，始建于1920年。1960年独立办学定名为东北重型机械学院，1978年被确定为全国重点高等院校。1997年1月南迁河北省秦皇岛后经原国家教委批准，更... 1燕山大学2005-2009年度获得国家自然科学基金资助情况分析 燕山大学源于哈尔滨工业大学，始建于1920年。1960年独立办学定名为东北重型机械学院，1978年被确定为全国重点高等院校。1997年1月南迁河北省秦皇岛后经原国家教委批准，更名为燕山大学。2009年起，由国家工业和信息化部、国家国防科工局和河北省共建燕山大学。 展开更多

关键词 燕山大学 基金资助 自然科学 效果分析 哈尔滨工业大学 重型机械 高等院校 国家教委

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地方高校科研项目经费管理改革与思考——以燕山大学为例 被引量：2

17

作者 韩雪 许岩 +2 位作者 杨群 王文棋 黄华贵 《会计师》 2022年第12期104-106,共3页

近年来,在国家“放管服”改革大背景下,为推进科技体制深化改革的进程,国家及地方政府相继出台了与科研项目及经费管理相关的改革措施和文件,并坚决推进新政的落实。燕山大学作为一所河北省地方高校,结合学校实际、积极学习新政、梳理... 近年来,在国家“放管服”改革大背景下,为推进科技体制深化改革的进程,国家及地方政府相继出台了与科研项目及经费管理相关的改革措施和文件,并坚决推进新政的落实。燕山大学作为一所河北省地方高校,结合学校实际、积极学习新政、梳理管理思路、探索方式方法,为推进各项新政的落实克服阻力,努力提高科研项目经费管理水平,并对改革存在的各类问题进行梳理和思考,提出可供参考的意见及建议。 展开更多

关键词 科技体制改革 地方高校 科研项目经费管理 燕山大学

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