全基因组测序和real-time PCR法检测食源性沙门氏菌parC、gyrA基因突变特征 被引量：10

1

作者 毕旺来 赵巍薇 +2 位作者 马达 李睿 周敏 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第12期296-302,共7页

以45株食源性沙门氏菌喹诺酮耐药株为对象,采取全基因组测序和实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)法检测parC、gyrA基因突变位点,并对检测方法可靠性、耐药基因突变特征进行评估和分析。首先将4株... 以45株食源性沙门氏菌喹诺酮耐药株为对象,采取全基因组测序和实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)法检测parC、gyrA基因突变位点,并对检测方法可靠性、耐药基因突变特征进行评估和分析。首先将4株沙门氏菌进行二代全基因组测序,根据测序数据分析结果,建立了一种real-time PCR法检测gyrA Asp87Tyr、gyrA Asp87Asn、parC Thr57Ser和parC Ser80Ile这4个突变位点。将沙门氏菌进行qnrS、qnrA、qnrB的real-time PCR检测,发现有31株菌未检出qnr基因。以这31株菌为对象,采取real-time PCR法筛查基因突变位点,结果发现parC Thr57Ser和gyrA Asp87Asn型突变最常见。将real-time PCR阳性的10株菌扩增parC、gyrA基因全长并测序,real-time PCR检测和测序结果完全吻合,说明了real-time PCR检测的可靠性。全基因组测序和real-time PCR法相结合的方法用于耐药基因突变筛查,既可以发现新的基因突变,又可以快速筛查大样本的主要突变类型,可作为沙门氏菌耐药性研究的一种可靠手段。 展开更多

关键词 沙门氏菌 全基因组测序 实时聚合酶链式反应 喹诺酮 耐药基因

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1例真空包装卤鸭制品细菌污染的分析和工艺控制 被引量：3

2

作者 毕旺来 戴诗皎 +2 位作者 吴严 冯登 王海滨 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第31期19599-19601,19609,共4页

[目的]对某企业生产的真空包装卤鸭制品进行微生物检测与分析。[方法]按国标方法对抽样产品进行菌落总数测定,运用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增分离菌株16S rDNA序列并测序,序列比对后用邻位相连法构建进化树。[结果]产品中污染有耐热... [目的]对某企业生产的真空包装卤鸭制品进行微生物检测与分析。[方法]按国标方法对抽样产品进行菌落总数测定,运用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增分离菌株16S rDNA序列并测序,序列比对后用邻位相连法构建进化树。[结果]产品中污染有耐热的巨大芽孢杆菌和不耐热的大肠杆菌、溶血性葡萄球菌等细菌。建立了SDS-酶裂解法提取卤鸭制品细菌总DNA,并分析致病菌。通过分析HACCP体系的关键控制点,给出了纠偏措施。[结论]试验结果为探索HACCP体系和现代生物学技术在传统卤制品加工行业中的应用提供了技术依据。 展开更多

关键词 微生物检测 16SrDNA-PCR 危害分析与关键控制点(HACCP)体系 卤鸭制品

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大肠杆菌O157:H7压力反应基因对EGCG和柠檬酸的转录响应

3

作者 毕旺来 杜文芳 +3 位作者 肖洁 刘烨 谈笑 李睿 《中国酿造》 CAS 北大核心 2016年第3期41-44,共4页

采用反转录荧光定量PCR技术,检测天然防腐剂表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)及柠檬酸处理后,大肠杆菌O157∶H7几种压力反应相关基因的转录响应。结果发现,1 mg/mL EGCG处理后,recA转录水平下调,rpoS无明显变化,而oxyR转录水平明显上调;4... 采用反转录荧光定量PCR技术,检测天然防腐剂表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)及柠檬酸处理后,大肠杆菌O157∶H7几种压力反应相关基因的转录响应。结果发现,1 mg/mL EGCG处理后,recA转录水平下调,rpoS无明显变化,而oxyR转录水平明显上调;4 mg/mL柠檬酸处理后,recA转录水平小幅上调,rpoS和oxyR转录水平显著上调。1 mg/mL EGCG和4 mg/mL柠檬酸联合作用,recA、rpoS、oxyR基因转录量显著上调,且上调幅度明显大于防腐剂单独处理样本,说明柠檬酸和EGCG具有协同效应。本研究结果证实低浓度的EGCG和柠檬酸均能激活细菌的氧化应激反应,柠檬酸能激活SOS反应,但低浓度EGCG一定程度上能抑制SOS反应。相较柠檬酸,EGCG更适于控制食品中大肠杆菌O157∶H7的污染。 展开更多

关键词 大肠杆菌O157:H7 EGCG RECA rpoS.oxyR

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改良Vero细胞毒性试验法检测志贺毒素

4

作者 毕旺来 杨俊 +1 位作者 杜文芳 李睿 《武汉轻工大学学报》 2017年第2期22-25,共4页

采用Vero细胞培养法检测5株肠出血性大肠杆菌O157食品分离株的志贺毒素。在48孔细胞培养板中培养Vero细胞24 h,然后加入梯度稀释的志贺毒素滤液。培养24 h及48h后在倒置显微镜下观察Vero细胞形态。培养48 h后结晶紫染色,测定Vero细胞半... 采用Vero细胞培养法检测5株肠出血性大肠杆菌O157食品分离株的志贺毒素。在48孔细胞培养板中培养Vero细胞24 h,然后加入梯度稀释的志贺毒素滤液。培养24 h及48h后在倒置显微镜下观察Vero细胞形态。培养48 h后结晶紫染色,测定Vero细胞半致死时,对应的志贺毒素滤液稀释倍数。证实形态观察和结晶紫染色相结合可以准确测定肠出血性大肠杆菌O157食品分离株的志贺毒素。 展开更多

关键词 细胞培养 肠出血性大肠杆菌O157 志贺毒素 Vero细胞毒性

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PCR-RFLP法分析白酒小曲细菌多样性 被引量：4

5

作者 翟平平 李嘉文 +2 位作者 毕旺来 陈道玉 李睿 《中国酿造》 CAS 2012年第12期72-74,共3页

采用CTAB法提取白酒小曲细菌总DNA,用细菌通用引物扩增16S rDNA,并构建16S rDNA克隆文库。采用限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)技术对16S rDNA文库进行分析,获得76个克隆的酶切指纹图谱。选择酶切带型不同的阳性克隆进行测序并且构建... 采用CTAB法提取白酒小曲细菌总DNA,用细菌通用引物扩增16S rDNA,并构建16S rDNA克隆文库。采用限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)技术对16S rDNA文库进行分析,获得76个克隆的酶切指纹图谱。选择酶切带型不同的阳性克隆进行测序并且构建进化树。结果表明,小曲主要细菌种类为黄单胞菌属、沙雷氏菌属、乳杆菌属、木崎氏菌属和片球菌属,其中优势细菌是以戊糖片球菌为主的乳酸菌。 展开更多

关键词 白酒 小曲 16S rDNA克隆文库 PCR—RFLP 细菌多样性

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武汉肉类食品中大肠杆菌O157∶H7分离株stx亚型和毒力特征分析 被引量：4

6

作者 郑冬冬 毕旺来 +3 位作者 王宏勋 刘志国 丁洪波 李睿 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第8期94-98,共5页

从22家市场销售的117份肉类食品中分离出4株大肠杆菌O157∶H7菌株,经PCR检测这4株菌的stx、hly、eae毒力基因均为阳性。采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)法对这4株菌的stx亚型进行鉴定。3株菌同时携带stx1、stx2基因... 从22家市场销售的117份肉类食品中分离出4株大肠杆菌O157∶H7菌株,经PCR检测这4株菌的stx、hly、eae毒力基因均为阳性。采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)法对这4株菌的stx亚型进行鉴定。3株菌同时携带stx1、stx2基因,且均为stx1a、stx2a亚型。菌株EC5.11仅携带stx2基因,但在所有的stx2分型PCR反应中都为阴性。用PCR扩增该菌株stx2基因全长并克隆测序,序列分析结果表明EC5.11志贺毒素基因为stx2c亚型。采用Vero细胞毒性实验检测这4株菌产志贺毒素的状况,结果显示这些菌株都具有一定的Vero细胞毒性。 展开更多

关键词 大肠杆菌O157∶H7 志贺毒素 stx亚型 Vero细胞毒性

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蔬菜中大肠杆菌O157的分离与鉴定 被引量：4

7

作者 邱庆超 胡传寿 +4 位作者 周良彬 刘小超 毕旺来 李睿 周帼萍 《中国酿造》 CAS 2012年第9期85-88,共4页

对武汉市售蔬菜(50份)进行大肠杆菌O157的检验,经过新生霉素-EC增菌液增菌、免疫磁珠富集、选择性平板培养和血清学鉴定,从一份生菜中筛出1株O157阳性菌株EC9.23。PCR鉴定该菌毒力基因,stx1、stx2、rfbO157基因均为阳性,hly、eae、fliCH... 对武汉市售蔬菜(50份)进行大肠杆菌O157的检验,经过新生霉素-EC增菌液增菌、免疫磁珠富集、选择性平板培养和血清学鉴定,从一份生菜中筛出1株O157阳性菌株EC9.23。PCR鉴定该菌毒力基因,stx1、stx2、rfbO157基因均为阳性,hly、eae、fliCH7基因均为阴性。说明从武汉市售蔬菜中可检出携带志贺毒素基因的O157菌株。 展开更多

关键词 大肠杆菌O157 志贺毒素 蔬菜 分离鉴定 食品安全

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食品中大肠杆菌O157∶H7疑似菌株的分离和鉴定研究 被引量：2

8

作者 杨一群 陈洋 +3 位作者 杜文芳 侯斌斌 毕旺来 李睿 《中国酿造》 CAS 2014年第6期46-49,共4页

采集117份食品样品,经过PCR扩增毒力基因stx1、stx2和O157特征基因rfbO157初筛。将部分PCR阳性的食品样品,经过新生霉素EC增菌液增菌、免疫磁珠富集、血清学鉴定、菌落PCR复筛,分离出5株O157:H7疑似菌株。其中1株O157∶H7疑似菌株EC5.1... 采集117份食品样品,经过PCR扩增毒力基因stx1、stx2和O157特征基因rfbO157初筛。将部分PCR阳性的食品样品,经过新生霉素EC增菌液增菌、免疫磁珠富集、血清学鉴定、菌落PCR复筛,分离出5株O157:H7疑似菌株。其中1株O157∶H7疑似菌株EC5.11不能与O157诊断血清产生良好凝集反应,采用血清学方法该菌容易漏筛。采用PCR扩增rfbO157基因和H7鞭毛抗原编码基因fliCH7,EC5.11均呈阳性反应。最终包括EC5.11在内的4株疑似菌株被证实为O157∶H7血清型。本研究提出了一种改良方法筛选、鉴定食品中O157∶H7疑似菌株,比起传统方法,减少工作量的同时提高了筛选的特异性。 展开更多

关键词 大肠杆菌O157∶H7 分离鉴定 食品 血清凝集 聚合酶链反应

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柠檬酸和氯化钠抑制地衣芽孢杆菌生物被膜的研究 被引量：2

9

作者 侯佳启 林敏 +3 位作者 周亚彬 马崇礼 毕旺来 李睿 《中国酿造》 CAS 北大核心 2017年第7期110-113,共4页

地衣芽孢杆菌是食品中常见腐败菌。该研究发现地衣芽孢杆菌在常见培养基(如TSB、NB、LB、1/2LB)中均有较强的产生物被膜能力,地衣芽孢杆菌稀释100倍、在胰酪胨大豆肉汤(TSB)培养基中30℃静置培养更利于地衣芽胞杆菌在96孔板上产生物被... 地衣芽孢杆菌是食品中常见腐败菌。该研究发现地衣芽孢杆菌在常见培养基(如TSB、NB、LB、1/2LB)中均有较强的产生物被膜能力,地衣芽孢杆菌稀释100倍、在胰酪胨大豆肉汤(TSB)培养基中30℃静置培养更利于地衣芽胞杆菌在96孔板上产生物被膜。测得地衣芽孢杆菌对柠檬酸和氯化钠的最低抑菌质量浓度(MIC)分别为1.28 mg/mL和64 mg/mL。采用结晶紫染色法,研究不同质量浓度柠檬酸和氯化钠对地衣芽孢杆菌生物被膜的抑制效果。结果显示,1/2MIC的氯化钠即能显著抑制地衣芽孢杆菌生物被膜形成(P<0.01);而1/2MIC和1MIC的柠檬酸对地衣芽孢杆菌生物被膜形成无明显抑制效果(P>0.05)。 展开更多

关键词 地衣芽孢杆菌 生物被膜 柠檬酸 氯化钠 抑制效果

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麦糟在国外的综合利用现状 被引量：4

10

作者 李睿 邱雁临 毕旺来 《粮食与饲料工业》 CAS 北大核心 1998年第4期36-37,共2页

对麦糟的综合利用现状及意义进行了分析。着重介绍了麦糟在国外食品与饲料工业中的应用。

关键词 麦糟 综合利用 食品 饲料 啤酒

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烟熏腊肉货架期主要微生物的研究 被引量：7

11

作者 毕旺来 胡雷凤 +2 位作者 明亮 袁成 王海滨 《武汉轻工大学学报》 2019年第2期16-20,共5页

为了解烟熏腊肉货架期主要微生物的种类,以期更好地指导当地腊肉的加工生产,以神农架林区手工加工腊肉为研究对象,测定了细菌、真菌菌落总数,并测定了TVB-N值和POV值。利用PCA平板、MRS平板分离微生物,并通过16SrDNA测序进行鉴定。结果... 为了解烟熏腊肉货架期主要微生物的种类,以期更好地指导当地腊肉的加工生产,以神农架林区手工加工腊肉为研究对象,测定了细菌、真菌菌落总数,并测定了TVB-N值和POV值。利用PCA平板、MRS平板分离微生物,并通过16SrDNA测序进行鉴定。结果表明,腊肉微生物数目较少,POV值较低。从腊肉中分离得到3株细菌,经过16SrDNA测序和进化树分析,分别鉴定为头状葡萄球菌和瓦氏葡萄球菌。腊肉主要微生物为葡萄球菌。 展开更多

关键词 腊肉 优势菌 16SrDNA PCR

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EGCG抑制单增李斯特菌毒力的研究 被引量：1

12

作者 毕旺来 杜文芳 +1 位作者 段合波 李睿 《武汉轻工大学学报》 2018年第4期21-24,共4页

单增李斯特菌是食品重要致病菌,可诱导小鼠巨噬细胞凋亡。EGCG是茶叶中多酚类物质最主要的成分,具有良好的抗菌性能。采用低浓度的EGCG与单增李斯特菌ATCC19114共培养18 h,然后提取细菌上清滤液。将上清滤液诱导小鼠巨噬细胞RAW264. 7,... 单增李斯特菌是食品重要致病菌,可诱导小鼠巨噬细胞凋亡。EGCG是茶叶中多酚类物质最主要的成分,具有良好的抗菌性能。采用低浓度的EGCG与单增李斯特菌ATCC19114共培养18 h,然后提取细菌上清滤液。将上清滤液诱导小鼠巨噬细胞RAW264. 7,采用流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果证实,40μg/m L、200μg/m L和1 mg/m L EGCG均能显著抑制小鼠巨噬细胞凋亡率。EGCG可降低单增李斯特菌的毒力。所得结果为EGCG在食品行业中的应用提供了理论依据。 展开更多

关键词 单增李斯特菌 EGCG 毒力 流式细胞仪 细胞凋亡

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小龙虾(Procambarus clarkii)加工前后优势腐败菌的分离与鉴定 被引量：12

13

作者 邓灵 赵康 +3 位作者 夏开 圣莎丽 解华东 毕旺来 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第18期100-104,共5页

以原料小龙虾和卤制加工后的即食小龙虾为对象研究其优势腐败菌种类,为后续研发适宜的杀菌工艺提供理论依据。采用传统平板分离法,从原料小龙虾与开始腐败的即食小龙虾中分别分离出优势腐败菌,通过菌落形态观察、革兰氏染色镜检对微生... 以原料小龙虾和卤制加工后的即食小龙虾为对象研究其优势腐败菌种类,为后续研发适宜的杀菌工艺提供理论依据。采用传统平板分离法,从原料小龙虾与开始腐败的即食小龙虾中分别分离出优势腐败菌,通过菌落形态观察、革兰氏染色镜检对微生物种类进行初步分类。采用16S rDNA PCR扩增、限制性内切酶酶切分析以及测序的方法,进行了菌种鉴定试验。结果表明,原料小龙虾优势腐败菌为阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、溶酪巨球菌(Macrococcus caseolyticus)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophilia)、微小杆菌(Exiguobacterium indicum)和芽胞杆菌属(Bacillus spp.);即食小龙虾优势腐败菌仅检测到以蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)与苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)为代表的芽孢杆菌,而其他类型的细菌在卤制加工过程中已被灭活。小龙虾加工前后优势腐败菌鉴定结果对比分析可知,高温卤制工艺难以除灭原料小龙虾中的芽孢杆菌,芽孢杆菌仍存活导致即食小龙虾腐败。 展开更多

关键词 小龙虾 优势腐败菌 菌种鉴定 16S rDNA测序 限制性内切酶消化

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非O157型产志贺毒素大肠杆菌分子进化和流行特征分析 被引量：1

14

作者 马崇礼 杨俊 +1 位作者 段合波 毕旺来 《生物化工》 2018年第4期100-103,共4页

为分析非O157型产志贺毒素大肠杆菌的流行特点和分子进化,从NCBIGen Bank数据库下载197条非O157型产志贺毒素大肠杆菌志贺毒素2基因序列。搜集分离菌株的采集地点、采集年代、宿主类型等流行病学信息,通过构建进化树分析菌株间的遗传进... 为分析非O157型产志贺毒素大肠杆菌的流行特点和分子进化,从NCBIGen Bank数据库下载197条非O157型产志贺毒素大肠杆菌志贺毒素2基因序列。搜集分离菌株的采集地点、采集年代、宿主类型等流行病学信息,通过构建进化树分析菌株间的遗传进化关系。结果表明,我国非O157型产志贺毒素大肠杆菌基因型主要属于stx2c、stx2d和stx2e,血清型分布较广泛,主要流行型不是欧美国家常见的"Top Six"。 展开更多

关键词 非O157型 产志贺毒素大肠杆菌 志贺毒素2 进化分析

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武汉市部分菜场肉类食品中产志贺毒素大肠杆菌污染状况分析 被引量：3

15

作者 毕旺来 谈笑 +4 位作者 陈程 程登陆 龙程钰 王宏勋 李睿 《中国食品卫生杂志》 北大核心 2014年第1期67-70,共4页

目的对武汉市部分菜场肉类食品中产志贺毒素大肠杆菌(STEC)污染状况进行分析。方法 2011年7月至2012年10月期间,从武汉市汉口30个菜场和超市共采集样品196份,其中猪肉102份,牛肉60份,禽类34份。通过选择性增菌,提取DNA,PCR扩增stx1、stx... 目的对武汉市部分菜场肉类食品中产志贺毒素大肠杆菌(STEC)污染状况进行分析。方法 2011年7月至2012年10月期间,从武汉市汉口30个菜场和超市共采集样品196份,其中猪肉102份,牛肉60份,禽类34份。通过选择性增菌,提取DNA,PCR扩增stx1、stx2、rfb O157、wzy O157基因,分析食品中产志贺毒素大肠杆菌的污染状况。结果猪肉、牛肉、禽类食品中非O157型STEC的阳性检出率分别为18.6%、48.4%和2.9%;O157型STEC的阳性检出率分别为13.6%(猪肉)、6.7%(牛肉)和2.9%(禽类)。菜场样品STEC检出率(35.8%)略高于超市样品(32.4%)。结论武汉市肉类食品中STEC检出率较高,应定期跟踪监测,了解菌株流行和毒力变化状况。 展开更多

关键词 产志贺毒素大肠杆菌 O157 肉类 PCR鉴定 食源性致病菌 食品安全

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