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基于风格迁移的柔性输尿管内窥镜图像深度估计
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作者 辛运帏 尹晶晶 +3 位作者 赵煜 代煜 崔亮 殷小涛 《天津大学学报(自然科学与工程技术版)》 EI CAS 北大核心 2025年第1期47-55,共9页
输尿管内窥镜手术是目前针对肾结石的主流治疗方案,其外形细长、镜体柔软,能够灵活穿越人体自然腔道的内径狭窄的尿道和输尿管,检查视野范围更广,使医生能够更好地观察到病变区域.但一般的输尿管内窥镜仅配备单目摄像头进行配合手术操作... 输尿管内窥镜手术是目前针对肾结石的主流治疗方案,其外形细长、镜体柔软,能够灵活穿越人体自然腔道的内径狭窄的尿道和输尿管,检查视野范围更广,使医生能够更好地观察到病变区域.但一般的输尿管内窥镜仅配备单目摄像头进行配合手术操作,无法借助额外设备获取数据导致了其图像信息的匮乏;同时,相比于胃肠、鼻镜等手术场景,本研究的肾内场景在不具备公开数据集的同时,图像质量参差不齐,表面纹理细节不足,孔洞区域褶皱少,受模糊反光等干扰大,都易使深度估计受到影响针对以上问题,提出了一种基于改进风格迁移模型的深度估计方法.该方法首先根据术前CT图像重建肾脏内部腔道模型并提取中心路径,将虚拟内窥镜的摄像头设置在插值后的路径点上,构建了虚拟内窥镜漫游图像与深度估计图像一一对应的数据集,并基于此数据集训练了一个深度估计模型;随后,使用添加高效通道注意力(ECA)模块的改进风格迁移模型,将真实内窥镜图像域迁移至虚拟内窥镜图像域;最后,再将经由风格迁移产生的虚拟内窥镜图像送入上述训练得来的深度估计模型中,最终实现真实内窥镜图像的深度估计.所提方法的可行性及有效性在输尿管钬激光碎石术的图像中得到验证. 展开更多
关键词 深度估计 风格迁移 注意力机制 深度学习
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人survivin蛋白的原核表达、纯化及抗原活性鉴定 被引量:2
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作者 殷小涛 王伟 +5 位作者 田仁礼 徐元基 阎瑾琦 张巍 高江平 于继云 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期877-881,共5页
目的构建人肿瘤抗原survivin的原核表达载体,优化在大肠杆菌中的表达条件,并对survivin/His融合蛋白进行纯化和抗原活性鉴定。方法设计针对survivin基因序列的特异引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增人survivin全长基因序列(538 bp)克隆... 目的构建人肿瘤抗原survivin的原核表达载体,优化在大肠杆菌中的表达条件,并对survivin/His融合蛋白进行纯化和抗原活性鉴定。方法设计针对survivin基因序列的特异引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增人survivin全长基因序列(538 bp)克隆至原核表达载体pET28a(+),构建重组表达载体pET28a-survivin,并将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达survivin/His融合蛋白,并采用Ni亲和层析凝胶纯化重组蛋白。纯化后的重组蛋白经Western blot法、ELISA鉴定其抗原活性。结果重组表达载体经BamHⅠ和HindⅢ鉴定正确;IPTG诱导后经SDS-PAGE分析表明获得了相对分子质量(M r)24 000大小的重组蛋白;纯化后的蛋白纯度达到90%。Western blot法和ELISA检测证实纯化的survivin蛋白能够与特异性抗体发生反应,表明其具有良好的抗原活性。结论成功构建了原核表达载体pET28a-survivin,利用大肠杆菌表达系统实现了融合蛋白的可溶性表达并进行纯化,纯化后survivin蛋白经鉴定具备较高的抗原活性。 展开更多
关键词 SURVIVIN 原核表达 蛋白纯化 活性检测
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稳定表达hSPRY/Luc的人膀胱癌细胞株裸鼠皮下移植瘤模型的建立 被引量:2
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作者 殷小涛 李方龙 +7 位作者 金一鹏 朝阳 齐思勇 武帅 王籽橙 王琳 于继云 高江平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期337-341,共5页
目的建立稳定共表达人sprouty2(hSPRY2)基因和萤光素酶报告基因(luciferase,Luc)的J82人膀胱癌细胞株,并建立其裸鼠皮下移植瘤模型。方法通过PCR扩增hSPRY2及Luc全长基因,并分别构建慢病毒表达载体pCDH-hSPRY2和pLVX-Luc,包装慢病毒。... 目的建立稳定共表达人sprouty2(hSPRY2)基因和萤光素酶报告基因(luciferase,Luc)的J82人膀胱癌细胞株,并建立其裸鼠皮下移植瘤模型。方法通过PCR扩增hSPRY2及Luc全长基因,并分别构建慢病毒表达载体pCDH-hSPRY2和pLVX-Luc,包装慢病毒。用两种病毒上清同时感染人膀胱癌J82细胞,经嘌呤霉素、G418筛选出单克隆细胞株;采用细胞活体成像、免疫荧光细胞化学染色、Western blot法检测hSPRY2和Luc基因在单克隆细胞株中的表达。J82-hSPRY2/Luc细胞皮下接种BALB/c裸鼠建立移植瘤模型,通过活体成像检测肿瘤生长情况。结果筛选出J82-hSPRY2/Luc人膀胱癌细胞株,并通过活体成像、免疫荧光染色和Western blot验证了hSPRY2和Luc基因的共表达;通过活体成像动态观察到裸鼠皮下移植瘤的生长情况。结论成功建立了稳定共表达hSPRY2和Luc基因的J82-hSPRY2/Luc人膀胱癌细胞株以及可用于活体成像检测的裸鼠皮下移植瘤模型。 展开更多
关键词 膀胱癌 萤光素酶 人SPRY2基因 活体成像
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膀胱肿瘤靶向治疗现状及研究进展 被引量:7
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作者 殷小涛 高江平 《解放军医学院学报》 CAS 2017年第1期75-78,共4页
膀胱肿瘤是泌尿外科最常见的疾病之一,以铂类为基础的全身化疗是晚期膀胱癌标准治疗方式,但其仍然存在疗效有限、不良反应大、部分患者无法耐受等缺点。近年来膀胱肿瘤的靶向治疗成为一个新的治疗方向。本文总结了目前膀胱肿瘤靶向治疗... 膀胱肿瘤是泌尿外科最常见的疾病之一,以铂类为基础的全身化疗是晚期膀胱癌标准治疗方式,但其仍然存在疗效有限、不良反应大、部分患者无法耐受等缺点。近年来膀胱肿瘤的靶向治疗成为一个新的治疗方向。本文总结了目前膀胱肿瘤靶向治疗的5类主要药物,即抗肿瘤血管生成药物、成纤维细胞生长因子受体抑制剂、人类表皮生长因子受体家族抑制剂、MET信号通路抑制剂和免疫检查点抑制剂,对其临床应用现状及研究进展作一综述。 展开更多
关键词 膀胱癌 靶向治疗 肌层浸润 免疫检查点
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输尿管镜及辅助器械的发展现状与展望 被引量:2
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作者 殷小涛 崔亮 +1 位作者 李建民 高江平 《医学研究杂志》 2017年第7期173-176,47,共5页
输尿管镜是泌尿外科"医工结合"最明显、紧密的技术之一。随着工科技术的进步和医学理论的更新,输尿管镜和相关辅助器械取得了较大创新与发展,出现了输尿管软镜、电子成像、钬激光、取石篮等技术和器械,显著提高了输尿管镜的... 输尿管镜是泌尿外科"医工结合"最明显、紧密的技术之一。随着工科技术的进步和医学理论的更新,输尿管镜和相关辅助器械取得了较大创新与发展,出现了输尿管软镜、电子成像、钬激光、取石篮等技术和器械,显著提高了输尿管镜的工作能力,扩展了其在泌尿外科疾病诊疗中的作用。因此,本文对输尿管镜及其辅助器械的发展现状、以及未来可能的研究热点做一综述。 展开更多
关键词 输尿管镜 软性输尿管镜 辅助器械 机器人技术
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非规则弹性片高静低动的隔振特性 被引量:3
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作者 殷小涛 孟再强 +2 位作者 刘兴星 肖心想 李鸿光 《噪声与振动控制》 CSCD 2013年第6期45-48,共4页
在前人对斜置规则弹性片高静低动特性研究的基础上,运用势能函数、拉格朗日—欧拉法研究该模型非线性静力学方程,利用数值分析技术分析模型中各关键参数与振动输出之间的关系并优化,完成静力学仿真,并设计出试验样机,完成静力学试验和... 在前人对斜置规则弹性片高静低动特性研究的基础上,运用势能函数、拉格朗日—欧拉法研究该模型非线性静力学方程,利用数值分析技术分析模型中各关键参数与振动输出之间的关系并优化,完成静力学仿真,并设计出试验样机,完成静力学试验和位移传递率试验,验证该结构具备良好的高静低动隔振特性。研究工作对高静低动隔振器的设计具有参考意义。 展开更多
关键词 振动与波 GAS(Geometric anti-spring)隔振器 非线性 高静低动 非规则弹性片
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肥胖相关血液稀释与前列腺特异性抗原浓度的关系 被引量:7
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作者 李方龙 殷小涛 +5 位作者 李德维 昭阳 齐思勇 石怀银 高江平 张旭 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1721-1724,共4页
目的探索肥胖因素对前列腺增生(BPH)患者血清前列腺特异性抗原(PSA)浓度的影响,建立能够消除该影响的新PSA变数。方法回顾性分析我院2005年7月~2014年8月,经病理确诊为前列腺增生的患者的临床资料,纳入身高、体质量、前列腺体积等... 目的探索肥胖因素对前列腺增生(BPH)患者血清前列腺特异性抗原(PSA)浓度的影响,建立能够消除该影响的新PSA变数。方法回顾性分析我院2005年7月~2014年8月,经病理确诊为前列腺增生的患者的临床资料,纳入身高、体质量、前列腺体积等数据完整的患者共706例。分别计算PSA质量(PSA浓度与血容量的乘积)和PSA质量比(PSA质量与前列腺体积的比值)2个指标,分析体质量指数(BMI)与PSA、PSA质量和PSA质量比的关系。结果 BMI和血容量以及前列腺体积均呈正相关(P〈0.05)。线性回归分析显示BMI对血容量的影响大于对前列腺体积的影响(决定系数:0.569 vs 0.027)。PSA与前列腺体积呈正相关,与BMI和血容量呈负相关(P〈0.05);PSA质量与前列腺体积呈正相关(P〈0.05),但是与BMI和血容量均无相关性(P〉0.05);PSA质量比与BMI和血容量均呈负相关(P〈0.05),与前列腺体积无相关性(P〉0.05)。将BMI分成正常组(BMI〈23 kg/m2)、超重组(BMI 23~24.9 kg/m2)和肥胖组(BMI〉25 kg/m2)进行亚组分析,结果表明血容量和前列腺体积在各组之间差异明显(P〈0.05),并且BMI增高伴随着血容量增多以及前列腺体积增大;PSA质量在各组之间的差异无统计学意义(P〉0.05),而PSA和PSA质量比在各组之间存在明显差异(P〈0.05)。结论在前列腺增生患者中,高BMI可能会造成高血容量,从而对真实PSA水平产生稀释效应;本研究建立的PSA质量能够较好的消除肥胖对PSA水平的影响。 展开更多
关键词 前列腺特异性抗原 肥胖 血液稀释 前列腺增生 新变数
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前列腺特异性抗原新参数在前列腺癌诊断中的应用 被引量:10
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作者 李方龙 李德维 +5 位作者 殷小涛 昭阳 齐思勇 石怀银 高江平 张旭 《现代泌尿外科杂志》 CAS 2015年第12期871-874,共4页
目的探讨前列腺特异性抗原(PSA)新参数:PSA质量(PSA mass,PSAM)和PSA质量比(PSA mass ratio,PSAMR),在前列腺癌诊断中的应用价值。方法 2005年7月至2014年8月,我院病理科获得1 268例前列腺相关的病理结果,其中前列腺增生患者706... 目的探讨前列腺特异性抗原(PSA)新参数:PSA质量(PSA mass,PSAM)和PSA质量比(PSA mass ratio,PSAMR),在前列腺癌诊断中的应用价值。方法 2005年7月至2014年8月,我院病理科获得1 268例前列腺相关的病理结果,其中前列腺增生患者706例,前列腺癌患者562例,回顾性分析其临床资料。评价PSAM与PSAMR对前列腺癌的诊断价值,并与血清总PSA浓度(tPSA)、游离PSA百分比(f/tPSA)和PSA密度(PSAD)相比较。利用受试者工作特征曲线(ROC)确定其截点及相应的灵敏度和特异度。结果在全部患者中,PSA、f/tPSA、PSAD、PSAM和PSAMR在前列腺癌和前列腺增生患者间均存在明显差异(P〈0.05);PSAM的ROC曲线下面积(AUC)为0.732,与tPSA(0.73)无明显差异(P〉0.05),PSAMR的AUC为0.821,显著高于tPSA(P〈0.05)。当tPSA水平在4~10ng/mL时,PSAMR的AUC为0.856,显著高于f/tPSA(0.756)(P〈0.05),与PSAD(0.85)相似(P〉0.05)。取ROC曲线上约登指数最大值时的切点为临界值,在总体患者中PSAMR取值0.595时,其诊断前列腺癌的灵敏度为69.6%,特异度为83.4%。当tPSA在4~10ng/mL范围时,PSAMR取值0.38,诊断灵敏度为77.2%,特异度为79.4%。结论 PSAM与PSAMR均可用于诊断前列腺癌,PSAM与PSA诊断能力相近,而PSAMR诊断能力高于PSA;在tPSA4~10ng/mL范围内,PSAMR诊断前列腺癌的能力高于f/tPSA。 展开更多
关键词 前列腺 前列腺肿瘤 诊断 前列腺特异性抗原
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小鼠CD40分子胞外段基因的克隆、原核表达及活性鉴定 被引量:2
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作者 田仁礼 朱静潆 +7 位作者 殷小涛 王伟 林晓亮 徐元基 阎瑾琦 张巍 高江平 于继云 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1200-1204,共5页
目的构建含小鼠CD40(mCD40)分子胞外段序列的原核表达载体,在大肠杆菌中表达,并对mCD40/GST融合蛋白进行纯化和抗原活性鉴定。方法从小鼠DC2.4细胞系中扩增目的基因mCD40并克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,构建重组表达载体pGEX-6P-1-mCD40... 目的构建含小鼠CD40(mCD40)分子胞外段序列的原核表达载体,在大肠杆菌中表达,并对mCD40/GST融合蛋白进行纯化和抗原活性鉴定。方法从小鼠DC2.4细胞系中扩增目的基因mCD40并克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,构建重组表达载体pGEX-6P-1-mCD40,并将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达mCD40/GST融合蛋白,并采用GST琼脂糖凝胶纯化重组蛋白。纯化后的重组蛋白经Western blot法、间接ELISA鉴定其抗原活性。结果 PCR扩增产物经测序分析与GenBank公布的小鼠CD40胞外段序列一致;重组表达载体经酶切鉴定正确;IPTG诱导后经SDS-PAGE分析证实得到了相对分子质量(M r)为45 000的重组蛋白;Western blot法和ELISA检测证实纯化的mCD40/GST蛋白能够与特异性抗体发生反应。结论成功构建了原核表达载体pGEX-6P-1-mCD40,利用原核表达系统实现了mCD40/GST融合蛋白的可溶性表达并证明其具有较高的抗原活性。 展开更多
关键词 CD40 原核表达 蛋白纯化 活性检测
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稳定表达人G250基因小鼠renca细胞株的建立 被引量:2
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作者 李云奇 肖毅 +6 位作者 董金凯 王伟 田仁礼 殷小涛 林晓亮 于继云 高江平 《解放军医学院学报》 CAS 2013年第5期506-508,518,共4页
目的建立能够稳定表达人G250基因的renca细胞株。方法采用PCR扩增出人G250基因编码区长度的互补序列,根据DNA重组技术定向插入到pIRES-neo真核表达载体中,得到重组表达质粒pIRES-neo-G250。用阳离子脂质体介导法将该质粒稳定转染到renc... 目的建立能够稳定表达人G250基因的renca细胞株。方法采用PCR扩增出人G250基因编码区长度的互补序列,根据DNA重组技术定向插入到pIRES-neo真核表达载体中,得到重组表达质粒pIRES-neo-G250。用阳离子脂质体介导法将该质粒稳定转染到renca小鼠细胞中,通过调整G418的浓度筛选出阳性的克隆,蛋白免疫印迹和免疫荧光测试验证人G250基因转染小鼠renca细胞株后的表达情况。结果经过限制性内切酶鉴定和序列分析发现pIRES-neo-G250重组质粒构建正确,蛋白免疫印迹结果表明,可以从稳定转染pIRES-neo-G250的小鼠renca细胞中检测到G250的蛋白条带,流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测结果表明,稳定转染pIRES-neo-G250的renca细胞用人的G250特异性抗体检测到有高效的荧光表达。结论成功建立了稳定、高效表达pIRES-neo-G250分子的人G250基因renca细胞株,为后续的肾癌疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 G250 稳定转染 小鼠 基因表达
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β-hCG蛋白在大肠杆菌系统的表达、纯化及活性鉴定 被引量:1
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作者 王伟 殷小涛 +5 位作者 李云奇 田仁礼 吴昊 阎瑾琦 高江平 于继云 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期481-484,共4页
目的获得β-人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)融合蛋白β-hCG/GST并验证其抗原活性。方法利用PCR法扩增β-hCG全长基因,将其克隆至原核表达载体pET-42a中,构建重组质粒pET-42a-β-hCG,将该重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中IPTG诱导表达,经S... 目的获得β-人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)融合蛋白β-hCG/GST并验证其抗原活性。方法利用PCR法扩增β-hCG全长基因,将其克隆至原核表达载体pET-42a中,构建重组质粒pET-42a-β-hCG,将该重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析,亲和层析法纯化融合蛋白,目的蛋白用Western blot法鉴定,ELISA检测纯化得到的融合蛋白的抗原活性。结果测序结果证实成功扩增出目的基因β-hCG;酶切和测序结果证实pET-42a-β-hCG原核表达载体构建成功;转化后可以成功诱导并纯化出大小与预期一致的蛋白;Western blot法及ELISA检测证实纯化后的β-hCG/GST融合蛋白具有良好的免疫原性。结论成功获得β-hCG/GST融合蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性,为以β-hCG为靶位的抗肿瘤主动免疫治疗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 Β-HCG 原核表达 蛋白纯化
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前列腺穿刺活检结果预测模型的建立 被引量:6
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作者 昭阳 李方龙 +7 位作者 崔亮 殷小涛 齐思勇 金一鹏 唐杰 石怀银 高江平 张旭 《现代泌尿生殖肿瘤杂志》 2016年第5期283-287,共5页
目的基于前列腺特异性抗原(PSA)等指标,建立能够预测前列腺穿刺活检结果的数学模型。方法收集2009年7月至2015年3月在解放军总医院进行前列腺穿刺活检患者的年龄、前列腺体积、游离PSA(fPSA)和总PSA(tPSA)等临床资料。所有研究... 目的基于前列腺特异性抗原(PSA)等指标,建立能够预测前列腺穿刺活检结果的数学模型。方法收集2009年7月至2015年3月在解放军总医院进行前列腺穿刺活检患者的年龄、前列腺体积、游离PSA(fPSA)和总PSA(tPSA)等临床资料。所有研究对象中随机选择80%为建模组,其余20%为验证组。在建模组中利用单因素和多因素Logistic分析筛选出预测前列腺癌的独立性影响因素,构建回归方程,并以此为基础建立预测前列腺穿刺结果的数学模型。利用受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线评估该模型对前列腺癌的诊断价值,并与临床常用的PSA及其相关参数比较诊断价值的差异。结果选取资料完整且tPSA100ng/ml以下的患者纳入研究,共958例。其中建模组767例(tPSA4~20ng/ml者587例),验证组191例。在建模组中,将所有指标纳入单因素和多因素Logistic回归分析,发现年龄、tPSA和前列腺体积是前列腺癌独立的预测因素。将所有指标(包括fPSA)纳入回归方程,构建数学模型Y=-4.765+0.074×(年龄)4-0.057×(tPSA)+0.052×(fPSA)-0.029×(前列腺体积)。在建模组和验证组中,ROC曲线分析显示该模型预测前列腺癌的ROC曲线下面积高于tPSA、f/tPSA和PSA密度。取Y=-0.076,即约登指数最大值作为本模型最佳临界值,预测前列腺癌的灵敏度为76.2%、特异度为76.6%、阳性预测值76.5%、阴性预测值76.3%。结论本预测模型与单独应用PSA及其相关参数相比具有更高的诊断价值,并且可以在不增加患者检查项目的前提下提高预测前列腺癌的能力。 展开更多
关键词 前列腺癌 前列腺特异性抗原 数学模型
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单中心前列腺穿刺活检结果查询表的建立 被引量:4
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作者 李方龙 昭阳 +9 位作者 李德维 崔亮 殷小涛 金一鹏 齐思勇 许勇 唐杰 石怀银 高江平 张旭 《现代泌尿生殖肿瘤杂志》 2016年第1期16-18,23,共4页
目的:综合利用PSA及其相关参数建立能够简便查询的前列腺穿刺阳性率查询表.方法纳入2009年7月至2015年3月在解放军总医院行前列腺穿刺活检的患者,收集前列腺体积、游离PSA(free PSA,fPSA)和总PSA(total PSA,tPSA)等临床资料.多因素... 目的:综合利用PSA及其相关参数建立能够简便查询的前列腺穿刺阳性率查询表.方法纳入2009年7月至2015年3月在解放军总医院行前列腺穿刺活检的患者,收集前列腺体积、游离PSA(free PSA,fPSA)和总PSA(total PSA,tPSA)等临床资料.多因素Logistic回归分析预测前列腺癌的独立性影响因素,并利用相关因素建立前列腺穿刺阳性结果查询表.结果资料完整且病理结果为前列腺癌和前列腺增生的患者纳入研究,共1077例.根据PSA水平分为0~2.5、2.6~4.0、4.1~10.0、10.1~20.0和>20.0 ng/ml 5组,前列腺癌检出率分别为20.9%、20.0%、37.3%、48.1%和80.2%,随着PSA水平的升高,前列腺癌检出率也明显升高.多因素Logistic回归分析发现tPSA、fPSA和前列腺体积均为前列腺癌的独立性预测因素,tPSA、fPSA百分比(free to total PSA,f/tPSA)和PSA密度(PSA density,PSAD)在前列腺癌和前列腺增生两组间存在显著差异(P<0.05),综合利用上述3个指标建立前列腺阳性穿刺查询表.结论本研究根据 tPSA、f/tPSA和PSAD建立的查询表为临床前列腺穿刺活检提供了一个简便实用的阳性率查询工具. 展开更多
关键词 前列腺特异抗原 前列腺肿瘤 查询表
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提高树突状细胞腺病毒感染效率的融合蛋白的表达及活性鉴定
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作者 田仁礼 殷小涛 +7 位作者 王伟 林晓亮 朱晓明 徐元基 阎瑾琦 张巍 高江平 于继云 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期476-479,484,共5页
目的构建表达靶向树突状细胞融合蛋白CT40L的原核表达载体,在大肠杆菌中表达,并对CT40L融合蛋白进行纯化鉴定及功能验证。方法从GenBank上查找柯萨奇病毒和腺病毒受体(CAR)、T4噬菌体fibritin和小鼠CD40L的基因序列,并将其主要功能区域... 目的构建表达靶向树突状细胞融合蛋白CT40L的原核表达载体,在大肠杆菌中表达,并对CT40L融合蛋白进行纯化鉴定及功能验证。方法从GenBank上查找柯萨奇病毒和腺病毒受体(CAR)、T4噬菌体fibritin和小鼠CD40L的基因序列,并将其主要功能区域连接形成拼接序列;序列进行原核表达密码子优化后将其克隆至原核表达载体pET42a(+),构建重组表达载体pET42a-CT40L,并将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达CT40L/GST融合蛋白,并采用GST琼脂糖凝胶纯化重组蛋白。纯化后的重组蛋白经Western blot法、间接ELISA鉴定其免疫活性。结果重组表达载体经NcoⅠ和EcoRⅠ酶切鉴定正确;IPTG诱导后经SDS-PAGE分析表明获得了相对分子质量(Mr)78 000大小的重组蛋白;纯化后的蛋白纯度达到90%。Western blot法和ELISA检测证实纯化的CT40L分子能够与特异性抗体及相应受体发生反应,表明该融合蛋白具有良好的免疫学活性。结论成功构建了原核表达载体pET42a-CT40L,利用大肠杆菌表达系统实现了融合分子的可溶性表达,纯化后CT40L融合蛋白经检测具备较高的免疫学活性。 展开更多
关键词 CD40L 靶向治疗 原核表达 腺病毒感染效率
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小鼠VEGFR2胞外1-4IgG样结构域的原核表达、纯化及活性鉴定
15
作者 王伟 殷小涛 +4 位作者 李云奇 田仁礼 阎瑾琦 高江平 于继云 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期13-17,共5页
目的获得小鼠血管内皮生长因子Ⅱ型受体(mVEGFR2)胞外1-4IgG样结构域融合蛋白并验证其免疫原性及生物活性。方法利用RT-PCR法从孕龄14 d的Balb/c小鼠胚胎组织中扩增mVEGFR2D1-4基因,测序正确后将其克隆至原核表达载体pET-42a,构建重组质... 目的获得小鼠血管内皮生长因子Ⅱ型受体(mVEGFR2)胞外1-4IgG样结构域融合蛋白并验证其免疫原性及生物活性。方法利用RT-PCR法从孕龄14 d的Balb/c小鼠胚胎组织中扩增mVEGFR2D1-4基因,测序正确后将其克隆至原核表达载体pET-42a,构建重组质粒pET-42a-mVEGFR2D1-4。将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析,目的蛋白用Western blotting鉴定后,亲和层析法纯化融合蛋白,ELISA法检测纯化蛋白的抗原活性,并通过体外细胞培养检测该融合蛋白对血管内皮生长因子(VEGF)促人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的阻断作用。结果测序结果证实成功扩增出目的基因mVEGFR2D1-4;酶切和测序结果证实pET-42a-mVEGFR2D1-4原核表达载体构建成功;转化后可以成功诱导并纯化出大小与预期一致的蛋白;Western blotting证实纯化的蛋白能与特异性抗体发生反应;ELISA检测显示纯化后的mVEGFR2D1-4融合蛋白具有免疫原性,并且体外细胞培养试验证实其能阻断VEGF对HUVEC的促增殖作用。结论成功获得mVEGFR2D1-4/GST融合蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性及生物活性,为进一步研究以VEGFR2为靶点的抗肿瘤主动免疫治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子Ⅱ型受体 1-4IgG样结构 原核表达 蛋白纯化
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身体质量指数对血清前列腺特异性抗原水平的影响 被引量:4
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作者 齐思勇 李方龙 +7 位作者 殷小涛 金一鹏 昭阳 唐杰 石怀银 崔亮 张旭 高江平 《现代泌尿外科杂志》 CAS 2017年第2期134-137,共4页
目的基于中国人数据探讨肥胖因素对血清前列腺特异性抗原(PSA)水平的影响,以及PSA质量和PSA质量比在不同血容量和身体质量指数(BMI)水平中的稳定性。方法回顾性分析2004年6月至2013年11月在解放军总医院进行PSA检查者,所有研究对象进行... 目的基于中国人数据探讨肥胖因素对血清前列腺特异性抗原(PSA)水平的影响,以及PSA质量和PSA质量比在不同血容量和身体质量指数(BMI)水平中的稳定性。方法回顾性分析2004年6月至2013年11月在解放军总医院进行PSA检查者,所有研究对象进行经直肠超声、经腹部超声以及MRI中的至少1种检查,且均未发现可疑前列腺癌,选取年龄50~80岁、PSA值在4ng/mL以下者纳入研究,共7 584例。分别计算PSA质量和PSA质量比两个参数,分析身体质量指数(BMI)、血容量与PSA、PSA质量和PSA质量比等参数的关系。结果线性回归分析显示,BMI与血容量、前列腺体积均相关(r血容量=0.613,r前列腺体积=0.001,P<0.01)。PSA质量和PSA质量比,均与BMI呈负相关(P<0.05)。当将BMI分成正常组(BMI<23)、超重组(BMI:23~24.9)和肥胖组(BMI>25)时,血容量在各组之间差异明显(P<0.05);PSA、前列腺体积、PSA质量和PSA质量比在正常组和超重组之间无明显差异(P>0.05),在其他组间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BMI的增加会导致血容量的增大、而对前列腺体积无明显影响,从而通过血液稀释作用影响血清PSA水平。PSA<4ng/mL时,PSA质量比和PSA质量无助于消除BMI对PSA的影响。 展开更多
关键词 前列腺特异性抗原 肥胖 稀释 前列腺体积 身体质量指数
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过表达Sprouty2分子促进HEK293T细胞增殖与存活 被引量:1
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作者 朱静潆 杜芝燕 +4 位作者 王芳 于继云 田仁礼 殷小涛 张巍 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期485-488,共4页
目的构建表达人Sprouty 2(SPRY2)基因的重组表达载体pDC315/hSPRY2,转染人胚肾(HEK)293T细胞表达目的蛋白,初步探讨其对HEK293T细胞增殖与存活的影响。方法构建hSPRY2重组腺病毒表达载体,体外转染HEK293T细胞,以Western blot法检测目的... 目的构建表达人Sprouty 2(SPRY2)基因的重组表达载体pDC315/hSPRY2,转染人胚肾(HEK)293T细胞表达目的蛋白,初步探讨其对HEK293T细胞增殖与存活的影响。方法构建hSPRY2重组腺病毒表达载体,体外转染HEK293T细胞,以Western blot法检测目的蛋白的表达,以CCK-8法检测SPRY2对HEK293T细胞增殖或去血清条件下细胞存活的影响。结果成功构建重组表达载体pDC315/hSPRY2,在转染的HEK293T细胞中检测到目的蛋白hSPRY2的表达,转染pDC315/hSPRY2组HEK293T细胞的增殖率及存活率均明显高于对照组即转染pDC315/EGFP组(P<0.05)。结论成功构建了hSPRY2重组表达载体,过表达hSPRY2可促进HEK293T细胞的增殖与存活。 展开更多
关键词 人SPRY2 HEK293T细胞 过表达 增殖 存活
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SPRY2正向调节TNF-α诱导的成纤维细胞瘤L929细胞毒作用 被引量:1
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作者 朱静潆 杜芝燕 +5 位作者 王芳 殷小涛 田仁礼 王启宇 武帅 张巍 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期569-573,共5页
目的探索SPRY2分子在肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的L929细胞毒作用中的调节作用。方法应用RT-PCR方法观察SPRY2基因在不同质量浓度TNF-α刺激作用下表达水平的变化;应用重组腺病毒介导SPRY2基因过表达方法观察其对TNF-α细胞毒活性的调... 目的探索SPRY2分子在肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的L929细胞毒作用中的调节作用。方法应用RT-PCR方法观察SPRY2基因在不同质量浓度TNF-α刺激作用下表达水平的变化;应用重组腺病毒介导SPRY2基因过表达方法观察其对TNF-α细胞毒活性的调解效应。结果 L929细胞中存在SPRY2基因的天然表达,并且其表达水平随TNF-α刺激质量浓度的升高而升高,过表达SPRY2基因促进TNF-α诱导的L929细胞死亡。结论 SPRY2分子在TNF-α介导的肿瘤细胞杀伤效应中发挥正向调节作用。 展开更多
关键词 SPRY2 TNF-Α L929细胞 细胞毒性
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p53AIP1基因转染对PC-3M人前列腺癌细胞生物学特性的影响
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作者 林晓亮 赵倩 +4 位作者 殷小涛 田仁礼 李方龙 高江平 于继云 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期819-823,共5页
目的观测p53调节的凋亡诱导蛋白1(p53AIP1)对PC-3M人前列腺癌细胞的增殖、细胞周期、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法构建真核载体pDC316-p53AIP1,并进行双酶切及PCR鉴定。在LipofectamineTM2000介导下转染至体外培养的PC-3M人前列腺癌细... 目的观测p53调节的凋亡诱导蛋白1(p53AIP1)对PC-3M人前列腺癌细胞的增殖、细胞周期、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法构建真核载体pDC316-p53AIP1,并进行双酶切及PCR鉴定。在LipofectamineTM2000介导下转染至体外培养的PC-3M人前列腺癌细胞系中,Western blot法检测其表达,CCK-8法检测PC-3M细胞增殖情况,流式细胞术分析PC-3M细胞周期变化和annexinV-FITC/PI结合流式细胞术凋亡情况,TranswellTM实验检测p53AIP1对细胞迁移及侵袭能力的影响。结果成功构建了pDC316-p53AIP1真核表达载体,重组质粒转染PC-3M细胞后,Western blot法检测p53AIP1在PC-3M细胞中有表达,CCK-8结果显示表达的p53AIP1能抑制PC-3M细胞增殖(P<0.05),流式细胞术检测细胞周期阻滞在S/G2-M期(P<0.05)且p53AIP1能促进PC-3M细胞凋亡,TranswellTM侵袭和迁移实验显示p53AIP1使细胞侵袭迁移能力均降低(P<0.05)。结论p53AIP1抑制PC-3M细胞的周期、增殖、侵袭及迁移,并能促进其凋亡。 展开更多
关键词 p53调节的凋亡诱导蛋白1 PC-3M细胞 基因转染 增殖 侵袭
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携带p53AIP1基因的重组复制缺陷型腺病毒载体的构建、鉴定及其在人宫颈癌细胞系HeLa中的表达
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作者 林晓亮 姜云波 +8 位作者 赵倩 殷小涛 田仁礼 李云奇 徐元基 阎瑾琦 张巍 高江平 于继云 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1082-1086,共5页
目的构建携带外源性p53调节的凋亡诱导蛋白1(p53AIP1)基因重组复制缺陷型腺病毒载体,观察其在HeLa细胞中的表达。方法设计针对p53AIP1基因序列并插入特定酶切位点的特异引物,通过PCR扩增p53AIP1基因序列,利用DNA重组技术将p53AIP1基因... 目的构建携带外源性p53调节的凋亡诱导蛋白1(p53AIP1)基因重组复制缺陷型腺病毒载体,观察其在HeLa细胞中的表达。方法设计针对p53AIP1基因序列并插入特定酶切位点的特异引物,通过PCR扩增p53AIP1基因序列,利用DNA重组技术将p53AIP1基因定向插入到腺病毒穿梭载体pDC316,构建穿梭质粒pDC316-p53AIP1;在LipofectamineTM2000介导下穿梭载体pDC316-p53AIP1和腺病毒骨架载体pBHGloxΔE1,3Cre共转染进HEK293细胞;通过Cre-loxP重组酶系统,使Shuttle质粒和辅助大质粒发生定点重组从而包装产生携带目的基因p53AIP1的复制缺陷型重组腺病毒(Ad-p53AIP1)。将Ad-p53AIP1和Ad-null按MOI=100感染HeLa细胞,应用Western blot法检测蛋白水平的表达。结果基因片段成功连入pDC316载体上,对所构建新载体分别行PCR扩增、酶切、测序鉴定,与预计一致。Western blot法检测证实,Ad-p53AIP1感染HeLa细胞后蛋白有表达。结论成功构建携带p53AIP1基因的重组复制缺陷型腺病毒载体,并且有较强的感染能力。 展开更多
关键词 p53调节的凋亡诱导蛋白1 腺病毒载体 HELA细胞 基因治疗
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