马立克病病毒meq基因缺失毒株HN302Δmeq的构建及致病性分析

1

作者 张志会 滕蔓 +9 位作者 刘金玲 郑鹿平 王伟东 张文凯 张多 李林燕 张卓 柴书军 樊剑鸣 罗俊 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第10期71-79,共9页

马立克病(MD)是由马立克病病毒(MDV)感染引起的一种重要的家禽免疫抑制病与肿瘤病,严重危害世界养禽业。随着MDV持续进化及毒力增强,急需研发新型高效的MD疫苗以加强该病的有效防控。本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,以MDV变异株HN30... 马立克病(MD)是由马立克病病毒(MDV)感染引起的一种重要的家禽免疫抑制病与肿瘤病,严重危害世界养禽业。随着MDV持续进化及毒力增强,急需研发新型高效的MD疫苗以加强该病的有效防控。本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,以MDV变异株HN302为亲本毒株,成功构建了meq基因缺失的毒株HN302Δmeq,经过PCR扩增鉴定及测序分析,证实meq基因缺失且传代稳定。间接免疫荧光试验(IFA)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析均证实HN302Δmeq感染鸡胚成纤维细胞(CEF)中无meq基因表达,并且meq基因的缺失不影响其他病毒基因的表达。利用RT-qPCR分析HN302Δmeq在CEF中的体外增殖曲线,结果显示meq基因的缺失不影响MDV体外复制。1日龄SPF鸡攻毒试验结果显示,与亲本毒株HN302相比,HN302Δmeq对宿主无致病性,其诱导的MD发病率、死亡率和肿瘤发生率均为0,且未观察到明显的免疫器官萎缩。上述数据表明,HN302Δmeq的毒力明显丧失,具备继续作为疫苗候选株开展相关研究的可能性。本研究成功构建了MDV变异株HN302的meq基因缺失毒株,为后续MDV的致病机制及新型疫苗研究奠定了基础。 展开更多

关键词 鸡 马立克病病毒 MEQ基因 CRISPR/Cas9 基因编辑 致病性

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重组苦瓜MAP30蛋白对大肠癌LoVo细胞凋亡的影响 被引量：4

2

作者 樊剑鸣 张晓峰 +2 位作者 张巧 姚武 徐玉宝 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2009年第1期116-119,共4页

目的:克隆及重组苦瓜蛋白MAP30,观察MAP30对大肠癌LoVo细胞凋亡的影响。方法:RT-PCR法克隆MAP30基因的cDNA序列,并表达、纯化MAP30蛋白;MTT法测定纯化的MAP30蛋白对LoVo细胞的生长抑制作用;彗星实验观察MAP30引起凋亡的LoVo细胞基因组... 目的:克隆及重组苦瓜蛋白MAP30,观察MAP30对大肠癌LoVo细胞凋亡的影响。方法:RT-PCR法克隆MAP30基因的cDNA序列,并表达、纯化MAP30蛋白;MTT法测定纯化的MAP30蛋白对LoVo细胞的生长抑制作用;彗星实验观察MAP30引起凋亡的LoVo细胞基因组的降解情况。结果:成功克隆了苦瓜蛋白MAP30基因;MAP30蛋白对LoVo细胞体外生长具有抑制作用;MAP30蛋白对LoVo细胞半数抑制质量浓度(IC50)为70.0mg/L。MAP30在体外能诱导LoVo细胞凋亡。结论:重组的苦瓜MAP30蛋白在体外能抑制LoVo细胞生长,并能诱导其凋亡。 展开更多

关键词 苦瓜蛋白MAP30 大肠肿瘤 LOVO细胞 细胞生长抑制率 凋亡

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苦瓜核糖体失活蛋白MAP30基因的表达及特性分析 被引量：4

3

作者 樊剑鸣 许君 +2 位作者 张巧 姚武 徐玉宝 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2008年第6期1142-1146,共5页

目的:克隆苦瓜MAP30蛋白基因的cDNA序列,并在体外进行原核表达和纯化,体外测定MAP30对镰刀菌的抑制作用并测定MAP30基因的表达模式。方法:利用RT-PCR技术扩增861 bp的苦瓜蛋白MAP30基因编码区序列,克隆至pMD18-T载体。构建苦瓜MAP30原... 目的:克隆苦瓜MAP30蛋白基因的cDNA序列,并在体外进行原核表达和纯化,体外测定MAP30对镰刀菌的抑制作用并测定MAP30基因的表达模式。方法:利用RT-PCR技术扩增861 bp的苦瓜蛋白MAP30基因编码区序列,克隆至pMD18-T载体。构建苦瓜MAP30原核表达质粒pET-28a-MAP30,SDS-PAGE和Western blot检测MAP30的表达。采用镍离子亲合层析纯化MAP30,并采用真菌抑制实验检测对镰刀菌的抑制作用,Northern blot检测其表达模式。结果:克隆片段与基因库所登录的序列一致,表达的MAP30蛋白相对分子质量约为30 000,MAP30体外能抑制镰刀菌的生长,镰刀菌能诱导MAP30基因的表达。结论:MAP30基因可能参与植物早期的过敏反应并在植物的抗病中发挥重要的作用。 展开更多

关键词 苦瓜 MAP30蛋白 镰刀菌

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小鼠B16黑色素瘤细胞酪氨酸酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达 被引量：1

4

作者 樊剑鸣 张晓峰 +3 位作者 罗俊 许君 张巧 张改平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期828-830,共3页

目的:克隆酪氨酸酶基因(TYR),并在毕赤酵母中表达和纯化其融合蛋白,体外测定纯化的TYR活性。方法:利用RT-PCR技术,从小鼠B16黑色素瘤细胞中克隆全长TYR,克隆至pMD18-T载体,进行双链核苷酸序列测定。构建TYR毕赤酵母表达质粒pPICZaA-TYR... 目的:克隆酪氨酸酶基因(TYR),并在毕赤酵母中表达和纯化其融合蛋白,体外测定纯化的TYR活性。方法:利用RT-PCR技术,从小鼠B16黑色素瘤细胞中克隆全长TYR,克隆至pMD18-T载体,进行双链核苷酸序列测定。构建TYR毕赤酵母表达质粒pPICZaA-TYR并导入毕赤酵母Pichia pastoris GS115,表达的重组蛋白用SDS-PAGE和Western blot进行分析,采用Co2+离子亲和层析柱纯化TYR并采用TYR多巴速率氧化法体外测定纯化的TYR活性。结果:克隆了TYR基因。构建了重组表达质粒pPICZaA-TYR。SDS-PAGE和Western blot分析显示,在相对分子质量(Mr)为约53000处出现1条特异性蛋白带,且能与兔抗TYR抗体发生反应。结论:克隆TYR基因片段与基因库所登录的序列相一致,并在毕赤酵母中获得表达和纯化并在体外测定了纯化的TYR活性。 展开更多

关键词 酪氨酸酶基因 黑色素瘤细胞 毕赤酵母

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苦瓜蛋白MAP30对大肠癌细胞株LoVo细胞生长及凋亡的影响 被引量：1

5

作者 樊剑鸣 马建新 +4 位作者 高德富 许君 张巧 姚武 徐玉宝 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2009年第5期983-985,共3页

目的:观察苦瓜蛋白MAP30对大肠癌细胞株LoVo细胞生长及凋亡的影响。方法:采用MTT比色法分别观察20、40、60、80和100mg/LMAP30处理48h及40mg/LMAP30处理24、36、48和72h对LoVo细胞生长的影响,计算细胞生长抑制率。采用流式细胞仪检测40m... 目的:观察苦瓜蛋白MAP30对大肠癌细胞株LoVo细胞生长及凋亡的影响。方法:采用MTT比色法分别观察20、40、60、80和100mg/LMAP30处理48h及40mg/LMAP30处理24、36、48和72h对LoVo细胞生长的影响,计算细胞生长抑制率。采用流式细胞仪检测40mg/LMAP30处理24h对LoVo细胞凋亡的影响。采用Northern blot和Western blot分别检测40mg/LMAP30作用于LoVo细胞0～120h,细胞bcl-2和bax基因和蛋白的表达。结果:MAP30可呈剂量、时间依赖性抑制LoVo细胞的生长(F=128.3,107.5,P<0.05),促进LoVo细胞凋亡(F=92.7,P<0.05)。MAP30还可上调Bax基因与蛋白表达,下调Bcl-2基因与蛋白的表达。结论:MAP30可影响LoVo细胞Bcl-2和Bax的表达,从而诱导细胞凋亡,抑制细胞生长。 展开更多

关键词 MAP30 凋亡 大肠肿瘤

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基于SPOC混合学习模式的“毒理学”教学探索 被引量：1

6

作者 樊剑鸣 唐宇君 +1 位作者 时子昂 张晓峰 《教育教学论坛》 2021年第28期104-107,共4页

公共卫生事业的发展需要探索符合时代要求和应用型人才培养的模式,“毒理学”作为预防医学人才培养过程中的一门重要基础学科,采用传统的教学方式已无法满足专业培养与社会发展的需求。目前高速发展的信息技术为创新教学模式提供了新方... 公共卫生事业的发展需要探索符合时代要求和应用型人才培养的模式,“毒理学”作为预防医学人才培养过程中的一门重要基础学科,采用传统的教学方式已无法满足专业培养与社会发展的需求。目前高速发展的信息技术为创新教学模式提供了新方向,SPOC因具有小众性、集约性、限制性的优点,使其结合混合学习模式融入“毒理学”课程实践,通过线上和线下学习的有机融合,转变教师和学生在课堂中的角色,有助于改善以教师为主导的学习模式的局限性,推动从以“教”为主向以“学”为主的教学模式转变,从而为“毒理学”的教学改革提供新思路。 展开更多

关键词 毒理学 SPOC 混合学习模式 教学改革

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猪流行性乙型脑炎病毒种猪精液分离株的鉴定及进化分析 被引量：10

7

作者 王兴涛 罗俊 +5 位作者 滕蔓 樊剑鸣 鄂巍 禹斌 刘力 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2011年第5期152-157,共6页

利用RT-PCR技术对河南省某规模化猪场乙脑疑似病例的种猪精液进行分析,从部分样本中扩增出与流行性乙型脑炎病毒(JEV)M基因和E基因具有高度同源性的预期产物。在3日龄乳鼠脑内接种种猪精液上清,10 d左右即出现典型神经症状,并且病死鼠... 利用RT-PCR技术对河南省某规模化猪场乙脑疑似病例的种猪精液进行分析,从部分样本中扩增出与流行性乙型脑炎病毒(JEV)M基因和E基因具有高度同源性的预期产物。在3日龄乳鼠脑内接种种猪精液上清,10 d左右即出现典型神经症状,并且病死鼠脑组织RT-PCR结果均为阳性。用病死鼠脑组织研磨上清接种BHK-21细胞,感染60 h后用JEV单抗进行间接免疫荧光鉴定均为阳性,这表明分离毒株均为JEV流行毒株,分别命名为BSF.ZZ-1和BSF.ZZ-3。对新分离毒株进行体外细胞培养,BSF.ZZ-1和BSF.ZZ-3连续传代3次后病毒量均获得明显增加,最高分别可达104.5±0.1TCID50/mL和104.2±0.2TCID50/mL。用生物学软件MEGA 4.0分别构建JEV基因的系统进化树,发现BSF.ZZ-1和BSF.ZZ-3处于同一进化分支,均属于基因Ⅲ型。 展开更多

关键词 流行性乙型脑炎病毒 分离鉴定 M基因 E基因 系统进化树 基因Ⅲ型

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猪乙脑病毒CSF.XZ-2D株的分离鉴定及其体外培养特性研究 被引量：8

8

作者 滕蔓 罗俊 +5 位作者 樊剑鸣 王兴涛 王方雨 柴书军 杨继飞 张改平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期274-278,共5页

为了解河南省规模化猪场日本乙型脑炎病毒(JEV)流行株的特征,本研究对临床流产胎儿脑脊液进行病毒盲传分离,经RT-PCR等分子生物学方法及乳鼠感染试验,分离鉴定了1株基因Ⅲ型JEV株,命名为CSF.XZ-2D。采用BHK-21细胞对该分离株的体外培养... 为了解河南省规模化猪场日本乙型脑炎病毒(JEV)流行株的特征,本研究对临床流产胎儿脑脊液进行病毒盲传分离,经RT-PCR等分子生物学方法及乳鼠感染试验,分离鉴定了1株基因Ⅲ型JEV株,命名为CSF.XZ-2D。采用BHK-21细胞对该分离株的体外培养特性进行研究,结果表明,在25 cm2细胞瓶中,用1.25×106个细胞/瓶的初始量制备细胞单层,以较低剂量的病毒液吸附细胞并洗涤弃去游离病毒粒子,可在感染后60 h达到最大增殖量,病毒效价为105.0TCID50/0.1 mL以上。本研究为其他JEV分离株的体外培养提供了参考。 展开更多

关键词 日本乙型脑炎病毒 分离鉴定 脑脊液 BHK-21细胞 体外培养

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以合成肽为抗原检测O型口蹄疫病毒抗体ELISA方法的建立和评价 被引量：5

9

作者 杨苏珍 杨继飞 +6 位作者 鲍登克 刘庆堂 罗俊 樊剑鸣 李学伍 邓瑞广 张改平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1826-1830,共5页

作者以固相法合成特异性FMDV主要保护性抗原VP1上的表位肽,将其与载体蛋白BSA偶联,作为包被抗原,制备检测抗O型口蹄疫病毒(FMDV)抗体的ELISA试剂盒,并对该试剂盒进行方法考核。结果表明该方法的敏感性为95.12%,特异性为100%。检测199份... 作者以固相法合成特异性FMDV主要保护性抗原VP1上的表位肽,将其与载体蛋白BSA偶联,作为包被抗原,制备检测抗O型口蹄疫病毒(FMDV)抗体的ELISA试剂盒,并对该试剂盒进行方法考核。结果表明该方法的敏感性为95.12%,特异性为100%。检测199份血清标本,与UBI FMD VP1试剂盒的符合率达到98.49%,与液相阻断ELISA试剂盒的符合率达到96.98%。该多肽ELISA试剂盒特异、敏感、稳定、操作简便,可用来监控口蹄疫抗体水平。 展开更多

关键词 FMDV 抗体 ELISA 合成肽

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照光对玉米黄化幼苗超氧物歧化酶活性的影响 被引量：13

10

作者 郭振飞 樊剑鸣 +2 位作者 卢少云 李宝盛 李明启 《植物生理学报（0257-4829)》 CAS CSCD 1997年第3期279-282,共4页

玉米黄化苗经光照（80μmolm－2s－1）后超氧物歧化酶（SOD）活性提高，放线菌酮抑制光下SOD活性的提高。照光能提高玉米幼苗O-2产生速率；百草枯（0．01mmol／L）可提高照光和黑暗条件下SOD活性，抗坏血酸和甘露醇却消除光对SOD的激活... 玉米黄化苗经光照（80μmolm－2s－1）后超氧物歧化酶（SOD）活性提高，放线菌酮抑制光下SOD活性的提高。照光能提高玉米幼苗O-2产生速率；百草枯（0．01mmol／L）可提高照光和黑暗条件下SOD活性，抗坏血酸和甘露醇却消除光对SOD的激活作用。 展开更多

关键词 超氧化物歧化酶 玉米 黄化幼苗 照光

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低盐腐乳生产过程中抗氧化和ACE抑制活性的变化 被引量：7

11

作者 张晓峰 樊剑鸣 +2 位作者 陈慕华 王丽英 李里特 《中国调味品》 CAS 北大核心 2009年第5期63-66,共4页

文章通过改进盐腌和后酵工艺制备含盐量6%的低盐腐乳,分析低盐腐乳生产过程中抗氧化和ACE抑制活性的变化,并与10%含盐量腐乳进行比较。结果表明,腐乳前酵生产过程中抗氧化和ACE抑制活性分别提高了37%和140%;腌渍过程中产品的功能活性并... 文章通过改进盐腌和后酵工艺制备含盐量6%的低盐腐乳,分析低盐腐乳生产过程中抗氧化和ACE抑制活性的变化,并与10%含盐量腐乳进行比较。结果表明,腐乳前酵生产过程中抗氧化和ACE抑制活性分别提高了37%和140%;腌渍过程中产品的功能活性并未降低;在腐乳后酵生产过程中,6%食盐含量腐乳的清除自由基能力和ACE抑制能力均明显高于10%食盐含量的腐乳,且活性保持能力高于10%食盐含量的腐乳。 展开更多

关键词 腐乳 发酵 抗氧化 ACE抑制

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猪乙脑病毒河南分离株CSF.ZMD-3的分离鉴定及分子进化分析 被引量：6

12

作者 卜丹 罗俊 +5 位作者 樊剑鸣 王爱萍 滕蔓 游雷鸣 陈陆 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2010年第4期101-104,共4页

采集河南省规模化猪场流产母猪死胎脑脊液作为样本,通过细胞盲传培养分离乙型脑炎病毒流行毒株,对新分离的病毒进行分子生物学鉴定,获得1株分离株并命名为CSF.ZMD-3。DNA序列测定及比对分析该分离株与已报道毒株基因的序列同源性,确定... 采集河南省规模化猪场流产母猪死胎脑脊液作为样本,通过细胞盲传培养分离乙型脑炎病毒流行毒株,对新分离的病毒进行分子生物学鉴定,获得1株分离株并命名为CSF.ZMD-3。DNA序列测定及比对分析该分离株与已报道毒株基因的序列同源性,确定该分离毒株为乙脑病毒。使用MEGA3.1软件对CSF.ZMD-3毒株主要结构蛋白E蛋白的基因序列进行分子进化分析,确定CSF.ZMD-3为基因Ⅲ型乙脑病毒。 展开更多

关键词 乙型脑炎病毒 分离鉴定 M基因 E基因 基因进化树

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酵母海藻糖合成酶基因植物表达载体的构建与转化 被引量：1

13

作者 樊剑鸣 张跃灵 +2 位作者 李莉 陈红歌 贾新成 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 2003年第2期134-136,153,共4页

以从原核表达载体中酶切得到的tps1基因为模板,设计适当的引物,利用PCR技术,克隆出大约1.5 kb的片段.PCR产物经回收后,与PCAMBIA1303连接并转化大肠杆菌DH5α,阳性重组子经PCR鉴定,表明已获得海藻糖磷酸合成酶基因的植物表达载体.用基... 以从原核表达载体中酶切得到的tps1基因为模板,设计适当的引物,利用PCR技术,克隆出大约1.5 kb的片段.PCR产物经回收后,与PCAMBIA1303连接并转化大肠杆菌DH5α,阳性重组子经PCR鉴定,表明已获得海藻糖磷酸合成酶基因的植物表达载体.用基因枪转化小麦幼胚,经组织培养得到了含有海藻糖合成酶基因的小麦植株. 展开更多

关键词 海藻糖 海藻糖合成酶基因 植物表达载体 转基因 抗逆性 基因克隆 小麦

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O型口蹄疫病毒VP1蛋白的原核表达及功能鉴定 被引量：5

14

作者 杨苏珍 张改平 +5 位作者 鲍登克 乔松林 万博 樊剑鸣 职爱民 李学伍 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第6期11-14,共4页

为获得具有免疫原性的FMDV VP1蛋白,以O型FMDV重组质粒PMD18T-VP1为模板,利用PCR技术扩增得到O型FMDVVP1基因片段,将此基因片段与原核表达载体pET32a连接,构建重组表达载体,命名为pET-VP1,经PCR和测序鉴定后,用IPTG诱导表达,收集诱导的... 为获得具有免疫原性的FMDV VP1蛋白,以O型FMDV重组质粒PMD18T-VP1为模板,利用PCR技术扩增得到O型FMDVVP1基因片段,将此基因片段与原核表达载体pET32a连接,构建重组表达载体,命名为pET-VP1,经PCR和测序鉴定后,用IPTG诱导表达,收集诱导的菌液进行SDS-PAGE电泳和Western-Blot分析。结果显示,在分子量约为45 ku处有1条明显的蛋白条带,且能被口蹄疫阳性血清识别,表达产物通过包涵体纯化后用透析法复性;ELISA检测结果显示,所复性的蛋白具有较高的活性。结果表明,FMDV VP1蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,为开发诊断制剂和疫苗的研制打下基础。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 VP1基因 原核表达 蛋白复性

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猪流行性乙型脑炎弱毒活疫苗的效价测定及保存稳定性研究 被引量：4

15

作者 滕蔓 罗俊 +5 位作者 樊剑鸣 禹乐乐 胡博 李秀杰 邓瑞广 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2015年第2期119-122,131,共5页

为评估市售商品化猪乙型脑炎(JE)弱毒活疫苗的质量以及实验室条件下疫苗的保存稳定性,采用TCID50效价测定和RT-PCR检测病毒的保守基因(E基因和C/pr M基因)2种方法对2012年市场销售的主要国产疫苗产品进行了质量评估,同时将供试疫苗产品... 为评估市售商品化猪乙型脑炎(JE)弱毒活疫苗的质量以及实验室条件下疫苗的保存稳定性,采用TCID50效价测定和RT-PCR检测病毒的保守基因(E基因和C/pr M基因)2种方法对2012年市场销售的主要国产疫苗产品进行了质量评估,同时将供试疫苗产品置-30℃保存3、6、9、12个月后分别取样测定乙脑病毒(JEV)TCID50效价。结果表明,市售的猪乙脑同类疫苗中不同品牌产品之间活病毒含量差异较大,最高可达104.33TCID50/头份,但部分产品含量极低,甚至难以检测到活病毒;E基因和C/pr M基因的RT-PCR扩增产物丰度的差异与TCID50测定结果基本一致。多数疫苗产品在有效期内病毒效价基本稳定,同一厂家生产的疫苗保存期越短,其中相对活病毒越多,效价越高。 展开更多

关键词 猪 乙型脑炎 疫苗 TCID50 RT-PCR

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RNA干扰技术及其在动物疾病研究中的应用 被引量：5

16

作者 范璐 樊剑鸣 +1 位作者 张改平 王爱萍 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期63-69,共7页

RNA干扰(RNA interference)是存在于真核细胞中的基因特异性沉默机制,可以抑制病毒抗原基因的表达或抵御转座子转座。自从发现以来,RNAi技术已在基因的功能性研究上显示出了强大的优势,特别是在动物病毒性疾病的治疗和预防上,相对于传... RNA干扰(RNA interference)是存在于真核细胞中的基因特异性沉默机制,可以抑制病毒抗原基因的表达或抵御转座子转座。自从发现以来,RNAi技术已在基因的功能性研究上显示出了强大的优势,特别是在动物病毒性疾病的治疗和预防上,相对于传统的疫苗预防和药物治疗有着无可比拟的优越性。在动物细胞中转入针对特异病毒的小干扰RNA(siRNA)或短发卡RNA(shRNA)激活RNAi通路可有效抑制病毒的复制。阐述RNA干扰的发生机制及其在动物疾病防治中的应用。 展开更多

关键词 RNAI SIRNA SHRNA 机制 动物疾病

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BHK-21细胞稳定测定猪乙型脑炎病毒半数细胞感染量效价(TCID_(50))的条件优化及应用 被引量：6

17

作者 滕蔓 罗俊 +4 位作者 樊剑鸣 邢广旭 赵东 杨苏珍 张改平 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第6期15-21,共7页

为建立BHK-21细胞测定乙型脑炎病毒(Japenese encephalitis virus,JEV)病毒效价的方法,对96孔细胞板中不同初始接种量BHK-21细胞在多种维持液中的生长状态进行探讨,发现当BHK-21细胞以1250～2500个/孔接种96孔板培养24 h后,更换含3%新... 为建立BHK-21细胞测定乙型脑炎病毒(Japenese encephalitis virus,JEV)病毒效价的方法,对96孔细胞板中不同初始接种量BHK-21细胞在多种维持液中的生长状态进行探讨,发现当BHK-21细胞以1250～2500个/孔接种96孔板培养24 h后,更换含3%新生牛血清的DMEM后在37℃、5%CO2条件下可至少良好维持72～96 h。在此条件下并基于Reed-Muench法测定病毒效价的原理,本文建立了准确测定JEV TCID50的方法,利用该方法对JEV野毒分离株及商品疫苗进行测定,均获得稳定、准确的病毒效价。本实验为JEV的体外培养、病毒定量、疫苗评价等提供了一种准确、稳定、易判定的参考方法。 展开更多

关键词 乙型脑炎病毒 BHK-21细胞 效价测定 TCID50

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氨基脲敏感胺氧化酶对弓形虫感染小鼠组织器官毒性作用研究 被引量：3

18

作者 朱沙 樊剑鸣 +2 位作者 陈宗德 苏堤 杨璇 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2008年第17期3384-3387,共4页

[目的]以真核单细胞微生物弓形虫为实验对象研究氨基脲敏感胺氧化酶(SSAO)的细胞毒性作用。[方法]通过腹腔注射和脂肪组织感染途径小鼠感染来自腹腔液传代弓形虫,6d后,取脂肪组织制备组织切片并进行HE染色,观察脂肪组织病变及弓形虫在... [目的]以真核单细胞微生物弓形虫为实验对象研究氨基脲敏感胺氧化酶(SSAO)的细胞毒性作用。[方法]通过腹腔注射和脂肪组织感染途径小鼠感染来自腹腔液传代弓形虫,6d后,取脂肪组织制备组织切片并进行HE染色,观察脂肪组织病变及弓形虫在脂肪组织的存在情况,并采用酶联分光光度法检测小鼠脏器组织SSAO的活性。根据弓形虫P1基因设计引物,通过PCR方法检测脂肪组织、肝脏、脾脏、肺和脑各组织弓形虫的感染情况。[结果]腹腔注射组小鼠脂肪细胞病变严重,且发现有大量弓形虫存在,脂肪组织注射组小鼠非注射处脂肪组织结构基本正常,且没有检测出弓形虫感染,而其他组织器官检测到大量弓形虫感染。与其他组织器官相比较,小鼠脂肪组织中SSAO的活性最高。[结论]脂肪细胞由于表达大量SSAO其分解底物后对真核生物的细胞感染具有毒性作用,这可能与SSAO所致血管内皮细胞损伤从而引起的动脉粥样硬化的产生与发展有着内在的联系。 展开更多

关键词 细胞毒性 氨基脲敏感胺氧化酶 组织切片 弓形虫

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腐乳ACE抑制功能的研究 被引量：4

19

作者 张晓峰 樊剑鸣 +2 位作者 陈萍萍 李里特 辰巳英三 《中国酿造》 CAS 北大核心 2008年第9X期19-21,共3页

对我国10种具有代表性的腐乳、2种日本腐乳和2种自制腐乳的ACE抑制活性进行分析,并研究了不同工艺生产腐乳过程中ACE抑制活性的变化。结果表明,腐乳试样具有ACE抑制活性,其IC50值在2.17mg/mL～3.98mg/mL。红腐乳的ACE抑制活性相比白腐... 对我国10种具有代表性的腐乳、2种日本腐乳和2种自制腐乳的ACE抑制活性进行分析,并研究了不同工艺生产腐乳过程中ACE抑制活性的变化。结果表明,腐乳试样具有ACE抑制活性,其IC50值在2.17mg/mL～3.98mg/mL。红腐乳的ACE抑制活性相比白腐乳较高,后酵40d达到最高值77.8%,白腐乳在后酵35d达到最高值71.6%。 展开更多

关键词 腐乳 发酵 ACE抑制

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水稻几丁质酶基因在大肠杆菌中的表达、纯化与活性分析 被引量：2

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作者 陈爱葵 俞陆军 +2 位作者 樊剑鸣 冯冬茹 王金发 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期188-192,共5页

将克隆并确定序列的水稻(Oryza sativa L.Cpslo17)几丁质酶基因Oschi的cDNA序列(此序列已在GenBank中注册,登录号为EU045451)插入原核表达载体pGEX-4T-1中。经酶切、序列鉴定分析后,用该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3);经IPTG诱导获得表... 将克隆并确定序列的水稻(Oryza sativa L.Cpslo17)几丁质酶基因Oschi的cDNA序列(此序列已在GenBank中注册,登录号为EU045451)插入原核表达载体pGEX-4T-1中。经酶切、序列鉴定分析后,用该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3);经IPTG诱导获得表达,并对Oschi蛋白表达条件进行了优化;在大肠杆菌中表达的几丁质酶经纯化后在一定的浓度、一定的反应时间内能高效地分解几丁质。 展开更多

关键词 水稻 几丁质酶 基因 PGEX-4T-1

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