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莲腐败病菌遗传转化体系的构建 被引量：1
1
作者 叶丽芳 张逸凡 +4 位作者 张连虎 林桠春 郑兴汶 崔汝强 况卫刚 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期211-218,共8页
由共享镰刀菌Fusarium commune引起的莲腐败病是我国莲生产上的主要病害之一。本研究以强致病力菌株FCN23为供试菌株,通过PEG介导的遗传转化法研究了菌龄、酶解时间和渗透压稳定剂等对原生质体制备的影响。结果表明,分生孢子在YPD液体... 由共享镰刀菌Fusarium commune引起的莲腐败病是我国莲生产上的主要病害之一。本研究以强致病力菌株FCN23为供试菌株,通过PEG介导的遗传转化法研究了菌龄、酶解时间和渗透压稳定剂等对原生质体制备的影响。结果表明,分生孢子在YPD液体培养基培养24 h获得新鲜菌丝,在酶解时间为2.5 h,渗透压稳定剂为0.7 mol/L NaCl溶液时原生质体制备效率最高。进而将遗传霉素的抗性基因和绿色荧光蛋白基因转入莲腐败病菌原生质体中,获得了稳定表达的转化子,能够稳定遗传gfp基因,说明莲腐败病菌的遗传转化体系构建成功。该体系的建立为莲腐败病菌的侵染过程及基因功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 莲腐败病 共享镰刀菌 原生质体 遗传转化 GFP
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莲腐败病菌多聚半乳糖醛酸酶Fcpg1基因功能研究
2
作者 叶丽芳 宋水林 +3 位作者 张连虎 林桠春 崔汝强 况卫刚 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期77-85,共9页
【目的】共享镰刀菌(Fusarium commune)侵染莲引起的莲腐败病严重影响莲的生产,鉴定莲腐败病菌中多聚半乳糖醛酸酶基因Fcpg1,分析其在生长发育及致病过程中的作用,为进一步研究共享镰刀菌的致病机理及莲腐败病菌的防治提供依据。【方法... 【目的】共享镰刀菌(Fusarium commune)侵染莲引起的莲腐败病严重影响莲的生产,鉴定莲腐败病菌中多聚半乳糖醛酸酶基因Fcpg1,分析其在生长发育及致病过程中的作用,为进一步研究共享镰刀菌的致病机理及莲腐败病菌的防治提供依据。【方法】利用BLASTP在莲腐败病菌全基因组数据中查找PG同源蛋白,并使用ExPASy等在线软件对Fcpg1氨基酸序列进行生物信息学分析。通过基因敲除的方法,获得Fcpg1基因敲除突变体ΔFcpg1和回补菌株ΔFcpg1-Com。测定野生型菌株FCN23、突变体ΔFcpg1和回补菌株ΔFcpg1-Com的菌落形态、生长速率、产孢量及致病力。【结果】Fcpg1基因编码388个氨基酸,分子量为40.354 ku,分子式为C_(1756)H_(2775)N_(489)O_(577)S_(12),理论等电点为6.57,脂溶系数为79.9。Fcpg1为稳定的、易溶于水的外泌性蛋白,其信号肽剪切位点在第16~17个氨基酸,主要定位于胞外基质。Fcpg1蛋白与尖孢镰刀菌的多聚半乳糖醛酸酶蛋白序列具有较高的同源性。与野生型菌株FCN23和回补菌株ΔFcpg1-Com相比,ΔFcpg1突变体的菌落形态、营养生长和产孢量等方面均无明显差异,但突变体ΔFcpg1的致病力显著减弱。【结论】Fcpg1是典型的多聚半乳糖醛酸酶蛋白,参与对莲腐败病致病力的调控。 展开更多
关键词 莲 Fusarium commune 基因敲除 多聚半乳糖醛酸酶 表型 致病力
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两种白莲叶斑病病原菌室内药剂筛选 被引量：2
3
作者 况卫刚 龚鑫 +2 位作者 张连虎 林桠春 崔汝强 《生物灾害科学》 2022年第4期485-488,共4页
【目的】白莲是江西省广昌县重要的经济作物,种植广泛,在农业发展中占据重要地位。白莲病害危害严重,对莲子的产量和质量造成潜在影响。研究拟通过室内毒力测定筛选到对白莲叶斑病有效的防治药剂,为白莲病害的综合防治提供理论基础。【... 【目的】白莲是江西省广昌县重要的经济作物,种植广泛,在农业发展中占据重要地位。白莲病害危害严重,对莲子的产量和质量造成潜在影响。研究拟通过室内毒力测定筛选到对白莲叶斑病有效的防治药剂,为白莲病害的综合防治提供理论基础。【方法】采用生长速率法测定了3种杀菌剂对白莲叶斑病2种病原菌梨形黑孢菌和链格孢菌的室内毒力。【结果】所选的3种杀菌剂均对梨形黑孢菌和链格孢菌有一定的抑菌作用。对于链格孢菌,抑制效果最好的是56%啶酰肟菌酯和45%咪鲜胺,其EC50值分别为8.294μg/mL和8.371μg/mL。对于梨形黑孢菌,45%咪鲜胺抑制效果最好,EC50为11.488μg/mL;其次为56%啶酰肟菌酯和40%苯醚甲环唑,EC50分别为20.592μg/mL和59.476μg/mL。【结论】56%啶酰肟菌酯对链格孢菌的杀菌效果较好,45%咪鲜胺对梨形黑孢菌的杀菌效果较好。 展开更多
关键词 白莲 链格孢菌 梨形黑孢菌 杀菌剂 毒力测定
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水稻烯酰辅酶A水合酶的功能预测分析
4
作者 单崇蕾 山草梅 +4 位作者 陈兰兰 况卫刚 林桠春 张连虎 崔汝强 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2023年第3期468-475,共8页
水稻潜根线虫是一类寄生于水稻根部的迁移性内寄生线虫,广泛分布于各类水稻田中,成为严重危害水稻的寄生线虫,其中水稻细尖潜根线虫是江西省最严重的水稻潜根线虫之一。目前培育抗病品种是防治水稻潜根线虫病最为经济、有效的措施。通... 水稻潜根线虫是一类寄生于水稻根部的迁移性内寄生线虫,广泛分布于各类水稻田中,成为严重危害水稻的寄生线虫,其中水稻细尖潜根线虫是江西省最严重的水稻潜根线虫之一。目前培育抗病品种是防治水稻潜根线虫病最为经济、有效的措施。通过转录组分析水稻细尖潜根线虫侵染的和未受水稻细尖潜根线虫的感病水稻品种‘霸王鞭’根组织基因表达情况,筛选出差异表达显著上调基因OsECH1,并对OsECH1蛋白及其同源蛋白进行系统发育分析。结果表明:OsECH1蛋白与其他同源蛋白具有相同的保守结构域PLN02874,属于ECH家族。同时发现在水稻‘日本晴’中有5个同源基因,其中OsECH1基因位于染色体1上;克隆获得OsECH1基因全长并利用同源重组技术构建重组表达载体,通过农杆菌转化获得转基因水稻;经RT-qPCR分析该基因表达水平对水稻细尖潜根线虫侵染的影响。结果表明,在水稻中过表达OsECH1基因会减少水稻细尖潜根线虫的侵染,沉默OsECH1基因会增加水稻细尖潜根线虫的侵染;OsECH1蛋白亚细胞定位于细胞核中;通过His-tag pull down分析,该蛋白可能与5种防御相关蛋白互作。5种防御相关蛋白分别属于vATP-synt_E家族蛋白、Ricin-B家族蛋白、过氧化氢酶和B_lectin家族。RT-qPCR结果表明OsECH1对这5种蛋白均具有调控作用,该结果为进一步揭示OsECH1基因的功能提供基础。上述结果不仅为了解OsECH1基因的分子机制奠定基础,也为进一步阐述水稻与潜根线虫的互作机制提供新方向。 展开更多
关键词 水稻潜根线虫 烯酰辅酶A水合酶 抗病基因
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共享镰孢菌FcHAT1基因鉴定及功能研究
5
作者 叶丽芳 万良鹏 +4 位作者 田维玉洁 张连虎 林桠春 崔汝强 况卫刚 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期28-38,共11页
共享镰孢菌Fusarium commune是引起莲腐败病的主要病原菌之一,明确其致病机理对于探寻莲腐败病防治策略具有重要意义。组蛋白乙酰转移酶在真核生物基因表达和各种生物过程的调控中起重要作用,然而,组蛋白乙酰转移酶FcHat1在共享镰孢菌... 共享镰孢菌Fusarium commune是引起莲腐败病的主要病原菌之一,明确其致病机理对于探寻莲腐败病防治策略具有重要意义。组蛋白乙酰转移酶在真核生物基因表达和各种生物过程的调控中起重要作用,然而,组蛋白乙酰转移酶FcHat1在共享镰孢菌的功能还未见报道。本研究利用BLASTP方法在共享镰孢菌全基因组数据中查找组蛋白乙酰转移酶Hat1同源蛋白,并分析FcHat1与同源蛋白的进化关系、保守基序和结构域等特征。根据同源重组的原理获得FcHat1-hph基因的融合片段,通过PEG介导的原生质体转化的方法获得FcHat1基因的敲除突变体和回补菌株,并对敲除突变体和回补菌株的主要生物学特性和致病力进行了分析。结果表明,FcHat1蛋白与其他同源蛋白具有相同的Hat1_N保守结构域,且与其他物种含Hat1_N结构域蛋白高度同源。对获得的FcHat1基因敲除突变体和回补菌株进行观察,结果表明敲除FcHat1不影响孢子的产量、孢子形态、孢子萌发以及DNA损伤胁迫的应答,但是ΔFcHat1突变体的生长速率、致病力与野生型相比显著降低,表明FcHat1在病菌营养生长、致病过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 共享镰孢菌 基因敲除 组蛋白乙酰转移酶 致病力
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