MAVS全长及其截短体真核表达载体的构建和鉴定

1

作者 玉妹 毕冬琳 +1 位作者 郑天倚 李琼毅 《浙江农业学报》 北大核心 2025年第1期49-60,共12页

建立线粒体抗病毒蛋白(mitochondrial antiviral-signaling protein,MAVS)全长及截短体的真核表达载体,并检测其在HEK293细胞中的表达,为后续探索MAVS在病毒逃逸机制研究中的作用提供重要的实验材料。首先,根据NCBI数据库中人源MAVS的... 建立线粒体抗病毒蛋白(mitochondrial antiviral-signaling protein,MAVS)全长及截短体的真核表达载体,并检测其在HEK293细胞中的表达,为后续探索MAVS在病毒逃逸机制研究中的作用提供重要的实验材料。首先,根据NCBI数据库中人源MAVS的全长序列,设计截短体引物,通过PCR从cDNA模板中扩增出MAVS全长及不同截短体的基因片段,并将其克隆到pcDNA3.1-3xflag载体中。随后,将构建好的载体转染到HEK-293细胞中,利用RT-PCR技术检测扩增产物大小,与目的大小进行对比,用Western blot技术检测MAVS蛋白在293细胞中的表达情况。结果表明,成功构建了全长MAVS(MAVS-FL)及其截短体MAVS-△C、MAVS-△CP、MAVS-PBD、MAVS-△Tm的真核表达载体,Western blot结果表明,构建的载体蛋白在HEK-293中能够有效表达。本研究成功构建了MAVS全长及其截短体的真核表达载体,并在HEK-293细胞中表达了这些蛋白,为后续研究MAVS蛋白的功能和抗病毒机制提供了实验材料。 展开更多

关键词 线粒体抗病毒蛋白 真核表达载体 截短体构建 蛋白表达

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脑心肌炎病毒VP22A基因真核表达载体的构建

2

作者 邵帅 纪晓岚 +1 位作者 刘明启 李琼毅 《中国动物保健》 2025年第1期240-241,共2页

为构建脑心肌炎病毒VP2 2A基因真核表达载体。参考EMCV毒株基因组序列,设计VP2 2A基因特异性引物,PCR扩增VP22A基因目的片段,双酶切目的基因和pc DNA3.1-Flag质粒产生相同的黏性末端,使用T4 DNA连接酶连接相同的黏性末端,连接产物转化至... 为构建脑心肌炎病毒VP2 2A基因真核表达载体。参考EMCV毒株基因组序列,设计VP2 2A基因特异性引物,PCR扩增VP22A基因目的片段,双酶切目的基因和pc DNA3.1-Flag质粒产生相同的黏性末端,使用T4 DNA连接酶连接相同的黏性末端,连接产物转化至DH5α感受态细胞,菌液PCR鉴定阳性单克隆菌落,对阳性单克隆提取重组质粒并双酶切进行验证,对阳性重组质粒进行测序。重组质粒双酶切和测序结果表明,pc DNA3.1-Flag-VP2和pc DNA3.1-Flag-2A真核表达载体构建成功。 展开更多

关键词 脑心肌炎病毒 VP2基因 2A基因 真核表达载体

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小反刍兽疫病毒非结构蛋白C单克隆抗体的制备与鉴定

3

作者 李菊 毕冬琳 +5 位作者 杨晓莉 杨东亮 张潇文 刘方程 李琼毅 柏家林 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第5期1047-1054,共8页

为制备小反刍兽疫病毒(PPRV)非结构蛋白C单克隆抗体,根据PPRV C基因编码多肽链氨基酸序列抗原性分析,设计合成一条含20个氨基酸的抗原肽(CRSGKPRGETPGPLLPEIMQ)和一条含21个氨基酸的筛选抗原多肽(PLRAGERGLAPQAVQHRTLIK),将它们分别与... 为制备小反刍兽疫病毒(PPRV)非结构蛋白C单克隆抗体,根据PPRV C基因编码多肽链氨基酸序列抗原性分析,设计合成一条含20个氨基酸的抗原肽(CRSGKPRGETPGPLLPEIMQ)和一条含21个氨基酸的筛选抗原多肽(PLRAGERGLAPQAVQHRTLIK),将它们分别与钥孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin, KLH)和生物素羧基蛋白(biotin carboxyl carrier protein, Biotin)交联,制备获得免疫原和筛选抗原。用免疫原肌肉注射5只8~12周龄、体重约20 g的无特定病原体(specific pathogen free, SPF)级BALB/c雌性小鼠,第1次免疫后分别间隔7 d进行第2次免疫和第3次免疫,三免后21 d进行冲击免疫,冲击免疫后第3天采集血液分离血清,采用间接酶联免疫吸附法(ELISA)测得1只免疫小鼠血清抗体效价为1∶312 500,2只为1∶62 500。取3只小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0经聚乙二醇(PEG)融合制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA筛选出26株阳性淋巴杂交瘤细胞,进一步经克隆化培养筛选出46株单克隆细胞株。通过Western blot(WB)筛选获得2株能稳定分泌特异性抗PPRV C蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,WB、间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay, IFA)鉴定显示,制备的单克隆抗体具有较好的灵敏性和病毒反应性。研究结果为进一步阐明C蛋白在PPRV生命周期中的作用奠定了基础,也为小反刍兽疫(PPR)诊断提供了有效的诊断试剂。 展开更多

关键词 小反刍兽疫病毒 非结构蛋白C 杂交瘤细胞技术 单克隆抗体

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IFN-β在病毒感染中的作用研究进展

4

作者 邵帅 纪晓岚 +2 位作者 范益阳 柏家林 李琼毅 《免疫学杂志》 CSCD 2024年第11期844-855,共12页

IFN-β由成纤维细胞、白细胞、上皮细胞等多种细胞分泌,在固有免疫应答中发挥重要作用,通过激活一系列抗病毒基因的表达,增强宿主的免疫应答。具有抑制病毒复制、抗寄生虫、影响细胞增殖、参与免疫调节、抗肿瘤等多种生物功能。本文主... IFN-β由成纤维细胞、白细胞、上皮细胞等多种细胞分泌,在固有免疫应答中发挥重要作用,通过激活一系列抗病毒基因的表达,增强宿主的免疫应答。具有抑制病毒复制、抗寄生虫、影响细胞增殖、参与免疫调节、抗肿瘤等多种生物功能。本文主要综述了DNA病毒和RNA病毒感染后IFN-β的激活及其抗病毒作用和部分病毒进化出的免疫逃逸机制,总结了病毒感染调控干扰素信号通路研究进展,为今后抗病毒感染机制研究及其防治提供参考。 展开更多

关键词 干扰素 IFN-Β 抗病毒 感染

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泡球蚴组织的体外培养及在药物筛选中的应用 被引量：8

5

作者 李琼毅 陈根 +2 位作者 包根书 周海霞 史大中 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2006年第4期263-265,277,F0003,共5页

目的建立泡球蚴组织的体外培养模型,对4种药物的体外抗泡球蚴疗效进行初步筛选。方法泡球蚴组织体外培养9周后,分为7组:阿苯达唑组、汉防己甲素组、己酮可可碱组、苦豆碱组、氧氟沙星组、未用药组和二甲基亚砜组。在加药24 h和18 d后,... 目的建立泡球蚴组织的体外培养模型,对4种药物的体外抗泡球蚴疗效进行初步筛选。方法泡球蚴组织体外培养9周后,分为7组:阿苯达唑组、汉防己甲素组、己酮可可碱组、苦豆碱组、氧氟沙星组、未用药组和二甲基亚砜组。在加药24 h和18 d后,分别取样固定并在电子显微镜下观察超微结构。实验期间对囊泡计数。实验结束后,将培养物接种BALB/c小鼠进行活力测试。结果汉防己甲素和己酮可可碱在体外能抑制泡球蚴的生长(P<0.005),氧氟沙星对泡球蚴没有作用(P>0.005),苦豆碱能促进泡球蚴生长。接种各药物组培养物的BALB/c小鼠饲养80 d后处死并解剖,发现所有小鼠的腹腔中均有泡球蚴生长。结论汉防己甲素和己酮可可碱在体外对泡球蚴有一定的抑制作用,氧氟沙星和苦豆碱对寄生虫无治疗作用。活力测试提示所选药物只能抑制寄生虫生长而无杀灭作用。 展开更多

关键词 泡球蚴 体外培养 药物治疗 汉防己甲素 己酮可可碱 苦豆碱 氧氟沙星

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缺氧诱导因子-1在病毒感染中的作用 被引量：4

6

作者 李琼毅 冯若飞 +1 位作者 乔自林 马忠仁 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2014年第1期88-91,共4页

缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)是一种由β亚单位和α亚单位组成的异二聚体转录因子,其表达产物参与细胞的许多生理过程。越来越多的研究提示HIF-1在病毒感染中发挥着重要作用。通过检索相关文献,对人病毒感染中HIF-... 缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)是一种由β亚单位和α亚单位组成的异二聚体转录因子,其表达产物参与细胞的许多生理过程。越来越多的研究提示HIF-1在病毒感染中发挥着重要作用。通过检索相关文献,对人病毒感染中HIF-1活性改变及其在病毒感染中的作用进行了综述,为研究HIF-1在病毒感染中的作用提供参考。 展开更多

关键词 缺氧诱导因子-1(HIF-1) 人免疫缺陷病毒-1 丙型肝炎病毒 戊型肝炎病毒 呼吸道合胞病毒

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膜联蛋白A2在病毒感染中的作用研究进展 被引量：5

7

作者 李琼毅 赵克学 +1 位作者 梁浩勤 冯若飞 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期79-81,共3页

膜联蛋白A2(Annexin A2,ANXA2)是一类由Ca 2+调控的具有磷脂结合特性的膜联蛋白,与多种细胞生理过程和临床疾病相关;越来越多的研究证实ANXA2在多种病毒复制周期的不同阶段发挥着重要作用。对ANXA2在病毒感染过程中的作用进行综述,为阐... 膜联蛋白A2(Annexin A2,ANXA2)是一类由Ca 2+调控的具有磷脂结合特性的膜联蛋白,与多种细胞生理过程和临床疾病相关;越来越多的研究证实ANXA2在多种病毒复制周期的不同阶段发挥着重要作用。对ANXA2在病毒感染过程中的作用进行综述,为阐明ANXA2与病毒感染之间的相互作用提供参考。 展开更多

关键词 膜联蛋白A2(ANXA2) 人乳头瘤病毒 人免疫缺陷病毒-1 丙型肝炎病毒

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泡型棘球蚴组织的体外培养技术及应用 被引量：2

8

作者 李琼毅 史大中 《国外医学（寄生虫病分册）》 2005年第4期159-161,共3页

泡型棘球蚴病是一种严重危害牧区人民健康和畜牧业发展的寄生虫病。虽然科学工作者已成功建立了泡球蚴感染的动物模型,但为了能在分子水平上研究泡球蚴的致病机制,体外培养渐渐受到大多数学者的青睐。该文就泡球蚴组织的体外培养作一综... 泡型棘球蚴病是一种严重危害牧区人民健康和畜牧业发展的寄生虫病。虽然科学工作者已成功建立了泡球蚴感染的动物模型,但为了能在分子水平上研究泡球蚴的致病机制,体外培养渐渐受到大多数学者的青睐。该文就泡球蚴组织的体外培养作一综述,并展望其发展前景。 展开更多

关键词 泡型棘球蚴组织 体外培养 泡型棘球蚴病 致病机制

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新生牛皮胶原蛋白海绵的制备及其体外细胞相容性(英文) 被引量：9

9

作者 马忠仁 冯玉萍 +5 位作者 李明生 冯若飞 乔自林 李琼毅 侯兰新 李倬 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第41期8171-8174,共4页

背景:现已证实,人肌腱、牛肌腱、鼠尾、猪皮、新生牛跟腱制备的胶原蛋白海绵有良好的细胞相容性。目的:采用新生牛皮提取胶原蛋白、制备生物医用胶原蛋白海绵,观察其与羔羊肾成纤维细胞的相容性。设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-... 背景:现已证实,人肌腱、牛肌腱、鼠尾、猪皮、新生牛跟腱制备的胶原蛋白海绵有良好的细胞相容性。目的:采用新生牛皮提取胶原蛋白、制备生物医用胶原蛋白海绵,观察其与羔羊肾成纤维细胞的相容性。设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-05/2007-02在西北民族大学生命科学与工程学院生物工程与技术国家民委重点实验室完成。材料:出生24h内宰杀的新生尕里巴牛犊皮,岷县黑裘皮羔羊肾原代成纤维细胞。方法:取新生牛犊皮,经脱毛、胃蛋白酶+冰醋酸联合处理、盐析、透析、冻干后制备胶原蛋白海绵。将海绵与羔羊肾F3代成纤维细胞混悬液共培养,分别设胶原海绵材料组、阴性对照组(生理盐水)、阳性对照组(橡胶塞浸提液)。主要观察指标:应用倒置相差显微镜及JVC数码摄像系统观察、拍摄与记录细胞形态、生长情况。培养20,35d,对共培养物进行AO染色,观察细胞在胶原海绵中的增殖情况。培养65d后制石蜡切片,行苏木精-伊红染色,观察细胞在胶原海绵中的生长情况。结果:阳性对照组细胞培养24h细胞圆缩,不贴壁,3d后全部死亡。胶原海绵材料组与阴性对照组细胞形态均正常,细胞贴壁生长良好。随着培养时间的延长,海绵孔隙逐渐变小,细胞数量增加,形态变小,海绵外观从柔软、混浊变得挺拔、透明。AO染色显示培养20,35d的胶原海绵-羔羊肾成纤维细胞共培养物中有大量细胞存在,并且在胶原蛋白空隙中有大量细胞成团簇状生长。苏木精-伊红染色显示有大量蓝色细胞核和新生的红色胶原纤维。结论:制备的新生牛皮胶原蛋白海绵对岷县黑裘皮羔羊肾成纤维细胞有良好的相容性。 展开更多

关键词 新生牛皮 胶原蛋白海绵 羔羊肾细胞 生物相容性 生物材料

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GnRH激动剂主动免疫母羊对生殖激素分泌的作用 被引量：4

10

作者 魏锁成 巩转娣 +6 位作者 欧阳霞辉 董江陵 李琼毅 韦敏 谢坤 张锋 孙建龙 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期132-136,共5页

目的:探讨GnRH激动剂(GnRHa)主动免疫对绵羊生殖激素合成与分泌的作用,并深入研究GnRH-A免疫调节动物生殖功能的机理。方法:42只5～6月龄母绵羊(Ovis aries)随机分为6组(n=7),EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别于0和14天皮下注射阿拉瑞林抗原200... 目的:探讨GnRH激动剂(GnRHa)主动免疫对绵羊生殖激素合成与分泌的作用,并深入研究GnRH-A免疫调节动物生殖功能的机理。方法:42只5～6月龄母绵羊(Ovis aries)随机分为6组(n=7),EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别于0和14天皮下注射阿拉瑞林抗原200、300和400μg;EG-Ⅳ和EG-Ⅴ分别皮下注射阿拉瑞林抗原200、300、0、7、14和21天各一次,共4次;对照组在0和14天皮下注射抗原溶媒(除不用阿拉瑞林外,其余成分和制备方法与阿拉瑞林抗原相同)2.0 ml。无菌采集不同时段的血液,分离血清。以ELISA测定血清GnRH抗体浓度,用激素检测试剂盒(ELISA)分别测定血清GnRH、FSH、LH和E2浓度。结果:①阿拉瑞林首次免疫7天后,各实验组的抗体浓度逐渐升高,EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别在28、28和35天达到峰值(P<0.05),EG-IV和EG-V则在在45天达到峰值(P<0.01),至60天时仍明显高于对照组(P<0.05)。14～60天间EG-IV和EG-V抗体浓度均高于EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ(P<0.05)。②EG-Ⅰ、EG-Ⅱ的GnRH在21和28天抵谷值(P<0.05),EG-Ⅲ、EG-Ⅳ和EG-Ⅴ则在45天抵谷值(P<0.01),且以EG-Ⅴ为最低。谷值之后逐渐上升趋势,70天时达到免疫注射前水平。③实验组血清FSH浓度始终高于对照组(P<0.05)。EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ于28、28和35天达到峰值(P<0.05),而EG-IV和EG-V在60天达到高峰值(P<0.01)。④实验组绵羊血清LH呈下降趋势,EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别在21、21和28天达到谷值(P<0.01),EG-Ⅳ和EG-Ⅴ在35天达到谷值(P<0.01)。35天时EG-Ⅳ和EG-Ⅴ低于EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ。⑤各组的血清E2含量无显著差异。结论:GnRH激动剂(阿拉瑞林)抗原主动免疫可促进GnRH抗体的生成,抑制母羊GnRH和LH的合成与分泌,增强FSH的合成与分泌,且随着注射剂量和注射次数的增加,这种作用更加明显,而对血清E2无明显影响。 展开更多

关键词 促性腺激素释放激素激动剂 阿拉瑞林 生殖激素 绵羊

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新生牛皮胶原蛋白海绵的制备及其体外细胞相容性 被引量：3

11

作者 马忠仁 冯玉萍 +5 位作者 李明生 冯若飞 乔自林 李琼毅 侯兰新 李倬 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第26期5147-5150,共4页

目的:采用新生牛皮提取胶原蛋白、制备生物医用胶原蛋白海绵,观察其生物学活性与细胞相容性。方法:实验于2006-05/2007-02在西北民族大学生命科学与工程学院生物工程与技术国家民委重点实验室完成。实验方法:①取出生24h内宰杀的新生尕... 目的:采用新生牛皮提取胶原蛋白、制备生物医用胶原蛋白海绵,观察其生物学活性与细胞相容性。方法:实验于2006-05/2007-02在西北民族大学生命科学与工程学院生物工程与技术国家民委重点实验室完成。实验方法:①取出生24h内宰杀的新生尕里巴牛犊皮制备胶原蛋白海绵。②将新生牛皮胶原蛋白海绵与黑裘皮羔羊肾F3代成纤维细胞混悬液共培养,分别设胶原海绵材料组、阴性对照组(生理盐水)、阳性对照组(橡胶塞浸提液)。实验评估:①应用倒置相差显微镜观察细胞形态。②培养20,35d对细胞与胶原蛋白海绵共培养物进行AO染色观察细胞在胶原海绵中的增殖情况。③培养65d后制石蜡切片,行苏木精-伊红染色观察细胞在胶原海绵中的生长情况。结果:①细胞形态观察结果:阳性对照组细胞培养24h细胞圆缩,不贴壁,3d后全部死亡。胶原海绵材料组与阴性对照组细胞形态均正常,细胞贴壁生长良好。随着培养时间的延长,海绵孔隙逐渐变小,细胞数量增加,形态变小,海绵外观从柔软、混浊变得挺拔、透明。②细胞在胶原海绵中的增殖情况:吖啶橙-AO染色显示培养20,35d胶原海绵-羔羊肾成纤维细胞共培养物中有大量细胞存在,并且在胶原蛋白空隙中有大量细胞成团簇状生长。③细胞在胶原海绵中的生长情况:苏木精-伊红染色显示有大量蓝色细胞核和新生的红色胶原纤维。结论:制备的新生牛皮胶原蛋白海绵对岷县黑裘皮羔羊肾成纤维细胞有良好的生物相容性,无细胞毒性。 展开更多

关键词 新生牛皮 胶原蛋白海绵 黑裘皮羔羊肾细胞 生物相容性

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Alarelin免疫绵羊对垂体GnRHR、FSHR和LHR基因表达与生殖激素分泌的作用 被引量：3

12

作者 魏锁成 巩转娣 +3 位作者 董江陵 谢坤 李琼毅 韦敏 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2012年第10期1137-1142,共6页

目的探讨GnRHa主动免疫对绵羊腺垂体GnRHR、FSHR和LHR表达及生殖激素的作用。方法 42只5～6月龄母绵羊均分为6组。EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别皮下注射阿拉瑞林抗原200、300和400μg,0和14 d各1次;EG-Ⅳ和EG-Ⅴ皮下注射阿拉瑞林抗原200、30... 目的探讨GnRHa主动免疫对绵羊腺垂体GnRHR、FSHR和LHR表达及生殖激素的作用。方法 42只5～6月龄母绵羊均分为6组。EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别皮下注射阿拉瑞林抗原200、300和400μg,0和14 d各1次;EG-Ⅳ和EG-Ⅴ皮下注射阿拉瑞林抗原200、300μg,0、7、14和21 d各1次;对照组皮下注射药物的溶媒。于70 d无菌切取腺垂体、子宫及卵巢。实时荧光定量PCR测定GnRHR、FSHR和LHR mRNA的表达。ELISA测定血清GnRH、FSH、LH和E2浓度。结果实验组GnRHR、FSHR和LHR mRNAs的2-(ΔΔCt)值均低于对照组,EG-Ⅳ和EG-Ⅴ的GnRHR、FSHR和LHR mRNA的2-(ΔΔCt)值低于EG-Ⅰ和EG-Ⅱ(P<0.05)。EG-Ⅰ和EG-Ⅱ血清GnRH在21和28 d达到谷值(P<0.05),EG-Ⅲ、EG-Ⅳ和EG-Ⅴ则在45d达到谷值(P<0.01)。实验组血清FSH始终高于对照组(P<0.05),EG-IV和EG-V在45和60 d达到峰值(P<0.01)。EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ血清LH分别在21、21和28 d抵至谷值(P<0.05),EG-Ⅳ和EG-Ⅴ在35 d抵至谷值(P<0.01);35 d时,EG-Ⅳ和EG-Ⅴ低于EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ。结论阿拉瑞林主动免疫可抑制垂体GnRHR、FSHR和LHR mRNAs表达,促进FSH的合成与释放,降低GnRH和LH的合成与释放,增加抗原的注射剂量和次数,作用更明显。 展开更多

关键词 促性腺激素释放激素激动剂 受体 表达 生殖激素 绵羊

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微生物学实验教学新体系的构建 被引量：7

13

作者 董开忠 刘翊中 +2 位作者 王冬梅 雒晓芳 李琼毅 《实验科学与技术》 2010年第2期88-90,共3页

实验教学是培养学生实践能力和创新精神的重要教学环节。文章旨在探索培养学生创新能力的微生物学实验教学新体系,通过对实验教学体系、内容、方法和考核方法等的改革,构建了新的微生物学实验教学体系。实践证明,新的实验教学体系成效明... 实验教学是培养学生实践能力和创新精神的重要教学环节。文章旨在探索培养学生创新能力的微生物学实验教学新体系,通过对实验教学体系、内容、方法和考核方法等的改革,构建了新的微生物学实验教学体系。实践证明,新的实验教学体系成效明显,是培养学生创新能力的有效方式。 展开更多

关键词 微生物学 实验教学 课程体系 创新能力

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与脑心肌炎病毒衣壳蛋白相互作用宿主蛋白的筛选 被引量：1

14

作者 谢晶莹 邓盈盈 +4 位作者 韩玉梅 张海霞 李向茸 李琼毅 冯若飞 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期20-24,共5页

应用Dual hunter酵母双杂交系统,以脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)衣壳蛋白VP1、VP2和VP3为诱饵,通过对BHK-21细胞cDNA文库的筛选,共得到24个互作蛋白。经过生物信息学分析,发现其功能包括蛋白结合、催化活性、转运活... 应用Dual hunter酵母双杂交系统,以脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)衣壳蛋白VP1、VP2和VP3为诱饵,通过对BHK-21细胞cDNA文库的筛选,共得到24个互作蛋白。经过生物信息学分析,发现其功能包括蛋白结合、催化活性、转运活性和结构分子活性;参与生物调节、细胞形成、细胞代谢、发育过程、细胞定位和免疫反应等多个生理过程,并参考文献资料分析这些蛋白在病毒复制中可能起到的作用,为研究EMCV感染及其致病机理提供参考。 展开更多

关键词 脑心肌炎病毒 衣壳蛋白 宿主蛋白 筛选

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跨膜蛋白39A基因SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立及评价

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作者 李向茸 王兴陇 +5 位作者 李倩 马瑞仙 张海霞 李琼毅 马忠仁 冯若飞 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第11期1958-1964,共7页

为建立一种快速检测跨膜蛋白39A(TMEM39A)基因的方法,根据GenBank中登录的不同种属TMEM39A基因序列的保守区域,设计并合成1对荧光定量通用性引物,经过条件优化,建立了检测TMEM39A基因的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。结果显示:标准... 为建立一种快速检测跨膜蛋白39A(TMEM39A)基因的方法,根据GenBank中登录的不同种属TMEM39A基因序列的保守区域,设计并合成1对荧光定量通用性引物,经过条件优化,建立了检测TMEM39A基因的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。结果显示:标准品模板在3. 937×10~8～3. 937×10~3拷贝·μL^(-1)范围内呈良好的线性关系,R^2可达0. 999;该方法特异性较好,检测灵敏度可达3. 937×10~2拷贝·μL^(-1);组内和组间变异系数均小于1%,具有较高的重复性和稳定性;利用该方法能够检测出不同细胞中的TMEM39A含量,具有种属通用性。该研究方法的建立为临床上提供了一种TMEM39A的快速检测和定量分析技术。 展开更多

关键词 跨膜蛋白39A SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR 特异性 灵敏性

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重组人白细胞介素7在HEK293细胞中稳定分泌表达

16

作者 李向茸 王兴陇 +5 位作者 令瑛 徐雷 李琼毅 张海霞 包晓婧 冯若飞 《生物学杂志》 CAS CSCD 2017年第5期24-28,共5页

通过构建人白细胞介素7的重组真核表达载体,转染HEK293细胞,实现IL-7在HEK293细胞中的稳定分泌表达,为生产试剂级的IL-7奠定基础。从质粒p LV-CMV-EF1-GP-r IL-7中扩增人IL-7全长基因,并将其构建于pc DNA3.1真核表达载体上。利用脂质体... 通过构建人白细胞介素7的重组真核表达载体,转染HEK293细胞,实现IL-7在HEK293细胞中的稳定分泌表达,为生产试剂级的IL-7奠定基础。从质粒p LV-CMV-EF1-GP-r IL-7中扩增人IL-7全长基因,并将其构建于pc DNA3.1真核表达载体上。利用脂质体法将重组质粒转染HEK293细胞,经G418筛选及单克隆,获得稳定分泌表达IL-7的HEK293-r IL-7细胞系。成功构建真核表达质粒pc DNA3.1-r IL-7,并实现IL-7在HEK293细胞上的稳定分泌表达,最终获得了1株表达量较高的细胞株,命名为HEK293-IL7-2G3细胞,培养48 h的细胞上清中IL-7的含量为3.2 ng/m L。为进一步实现人白细胞介素7在哺乳动物细胞中的分泌表达及药物开发奠定基础。 展开更多

关键词 白细胞介素7 转染 绿色荧光蛋白 分泌表达

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高等院校科研实验室管理模式的探索与思考

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作者 李向茸 柏家林 +1 位作者 李琼毅 乔自林 《科技创新导报》 2020年第34期115-118,共4页

高等院校科研实验室的有效管理,不仅能够降低实验室的运行成本,还能提升科研创新能力,促进高校快速稳步发展。本文就当前高等院校科研实验室管理中存在的弊端进行了分析,探索和思考了利用健全实验室安全制度、加强专业技术人才队伍建设... 高等院校科研实验室的有效管理,不仅能够降低实验室的运行成本,还能提升科研创新能力,促进高校快速稳步发展。本文就当前高等院校科研实验室管理中存在的弊端进行了分析,探索和思考了利用健全实验室安全制度、加强专业技术人才队伍建设、完善经费管理制度、加大实验室开放共享制度、定制智能化实验室管理系统等举措来改进实验室管理模式,为未来高等院校科研实验室的建设和发展提供了借鉴和参考。 展开更多

关键词 高等院校 科研实验室 管理模式 智能化

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MAVS在病毒逃避宿主天然免疫中的研究进展

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作者 毕冬琳 杨晓莉 +4 位作者 杨东亮 刘方程 张潇文 李琼毅 柏家林 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期2452-2457,2464,共7页

固有免疫是宿主细胞防御病毒感染的第一道防线,Toll样受体(TLR)、维甲酸诱导基因Ⅰ样受体(RLRs)等模式识别受体(PRRs)在其中发挥重要作用。病毒感染机体后,PRRs介导的信号通路中的线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)作为下游信号传递的共同接... 固有免疫是宿主细胞防御病毒感染的第一道防线,Toll样受体(TLR)、维甲酸诱导基因Ⅰ样受体(RLRs)等模式识别受体(PRRs)在其中发挥重要作用。病毒感染机体后,PRRs介导的信号通路中的线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)作为下游信号传递的共同接头分子可接收上游TLR、RIG-Ⅰ传递的信号,活化下游NF-κB和IRF3/7信号通路,进而激活干扰素(IFN)的表达,在固有免疫信号通路中起“桥梁”作用。越来越多的研究表明,病毒在长期进化过程中已进化出一系列逃逸固有免疫应答的机制,可通过干扰MAVS介导的信号通路中的多个位点来逃避宿主的抗病毒免疫应答,从而完成病毒自身的复制增殖。本文综述了MAVS在Ⅰ型IFN通路中作用及其在抗DNA病毒和RNA病毒反应机制中的最新研究进展,为研究MAVS抗病毒的分子机制提供理论参考。 展开更多

关键词 线粒体抗病毒信号蛋白 固有免疫 病毒感染 免疫逃逸

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跨膜蛋白43的研究进展 被引量：4

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作者 赵克学 梁浩勤 +1 位作者 李琼毅 冯若飞 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期74-77,共4页

跨膜蛋白43(TMEM43)是一种在物种间高度保守、定位在内核膜及内质网中且有一个大的亲水域的核膜蛋白。临床研究及流行病学调查发现,TMEM43基因的突变可导致心律失常性右心室心肌病(ARVC)和金刚砂-德雷福斯肌营养不良(EDMD)等疾病。目前... 跨膜蛋白43(TMEM43)是一种在物种间高度保守、定位在内核膜及内质网中且有一个大的亲水域的核膜蛋白。临床研究及流行病学调查发现,TMEM43基因的突变可导致心律失常性右心室心肌病(ARVC)和金刚砂-德雷福斯肌营养不良(EDMD)等疾病。目前,对此病的诊断及治疗尚存在一定的困难。此外,TMEM43与其他跨膜蛋白亦存在相互作用,但其功能和相关致病机制知之甚少。就TMEM43相关疾病及其与相关蛋白之间的作用进行综述,为后期研究TMEM43的功能及疾病治疗方面提供参考和帮助。 展开更多

关键词 跨膜蛋白43 致心律失常性右心室心肌病 金刚砂-德雷福斯肌营养不良疾病 核膜蛋白

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脑心肌炎病毒感染Hela细胞的内吞途径 被引量：2

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作者 刘杨 许淑娟 +1 位作者 李琼毅 刘翊忠 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期189-197,共9页

旨在探究脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)是否通过内吞途径以及通过何种内吞途径感染细胞,分别采用内吞途径抑制剂、网格蛋白抑制剂、巨胞饮途径抑制剂和肌动蛋白抑制剂作用于Hela细胞后接种EMCV,通过TCID50、qRT-PCR和W... 旨在探究脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)是否通过内吞途径以及通过何种内吞途径感染细胞,分别采用内吞途径抑制剂、网格蛋白抑制剂、巨胞饮途径抑制剂和肌动蛋白抑制剂作用于Hela细胞后接种EMCV,通过TCID50、qRT-PCR和Western blot等方法检测病毒感染是否受影响。结果显示,内吞途径抑制剂和肌动蛋白抑制剂作用于Hela细胞后,TCID50、qRT-PCR和Western blot等检测结果提示EMCV的感染受到抑制。表明EMCV可通过肌动蛋白参与的内吞途径感染Hela细胞。 展开更多

关键词 肌动蛋白 脑心肌炎病毒 人宫颈癌细胞

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