目的基于前期对灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides转录组测序结果,从灰毡毛忍冬RNA中克隆灰毡毛忍冬MADS-box基因家族蕾期延长相关基因AGL15,并对其进行生物信息学及表达分析。方法对灰毡毛忍冬总RNA进行反转录酶链式反应(reverse trans...目的基于前期对灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides转录组测序结果,从灰毡毛忍冬RNA中克隆灰毡毛忍冬MADS-box基因家族蕾期延长相关基因AGL15,并对其进行生物信息学及表达分析。方法对灰毡毛忍冬总RNA进行反转录酶链式反应(reverse transcription-PCR,RT-PCR)和c DNA末端快速扩增反应(rapid amplification of c DNA ends,RACE),获得完整的开放阅读框(ORF)。运用生物信息学的方法对该序列进行同源性分析和相似性比较,预测编码蛋白,并对其进行各种理化性质分析。运用半定量PCR测得该基因在灰毡毛忍冬不同部位的表达情况。结果获得AGL15基因,ORF长795 bp,编码264个氨基酸,与葡萄Vitis vinifera中MADS-box基因家族AGL15基因相似性最高,且包含MADS和K-box的保守序列。AGL15蛋白无跨膜区域,定位于细胞质中,在灰毡毛忍冬各部位均有表达。结论首次从灰毡毛忍冬中克隆得到可能控制蕾期延长的基因,分析了其在灰毡毛忍冬不同部位表达差异性,为灰毡毛忍冬蕾期延长研究提供参考。展开更多
目的筛选灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides基因表达分析的内参基因,研究其Mads-box基因家族AGL15基因(Lm AGL15)的时空表达特性。方法克隆灰毡毛忍冬内参基因18 S r RNA、Ubiquilin、Actin和Efl-β的基因片段,评价了4个基因在不同部位...目的筛选灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides基因表达分析的内参基因,研究其Mads-box基因家族AGL15基因(Lm AGL15)的时空表达特性。方法克隆灰毡毛忍冬内参基因18 S r RNA、Ubiquilin、Actin和Efl-β的基因片段,评价了4个基因在不同部位叶、茎和花蕾,以及4个基因在灰毡毛忍冬生长不同时期的稳定性,筛选内参基因,分析Lm AGL15基因的时空表达特性。结果 18 S r RNA表达最稳定,适宜作为内参基因,叶片、茎的Lm AGL15基因相对表达量较低,花蕾相对表达量较高。花蕾不同发育时期,Lm AGL15的相对表达量呈现逐渐降低的变化,20 d后Lm AGL15的相对表达量最低,然后依次是花蕾初期(15 d)、青绿色花蕾期(10 d)、绿白色花蕾期(5 d)。结论 18 S r RNA是适宜的内参基因。叶片、茎和花蕾中,Lm AGL15的相对表达量差异明显。花蕾发育不同时期,Lm AGL15的相对表达量呈逐渐降低的变化,与花蕾开放变化规律相似。展开更多
基于网络药理学方法分析黄精芡实汤治疗糖尿病前期的分子机制。运用系统药理学方法查找并从中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP,http://Lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php)筛选黄精芡实汤方剂中各药材的活性成分及靶点,查找糖尿病前期相关基...基于网络药理学方法分析黄精芡实汤治疗糖尿病前期的分子机制。运用系统药理学方法查找并从中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP,http://Lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php)筛选黄精芡实汤方剂中各药材的活性成分及靶点,查找糖尿病前期相关基因,确定黄精芡实汤治疗糖尿病前期的靶点。利用Cytoscape构建"药物成分-靶标"网络,筛选关键化合物。利用STRING建立蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,并通过Cytoscape-CytoNCA拓扑分析筛选核心靶点。通过R-clusterProfiler对靶基因进行基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析,以预测其可能的信号通路,探究其分子机制。筛选得到黄精芡实汤79种活性成分及与糖尿病相关的靶点785个,GO和KEGG富集分析发现其功能主要与羧酸循环、肽结合、酰胺结合、水解酶活性、激酶活性调节等反应有关,富集在AGE-RAGE信号通路、TNF信号通路、AMPK信号通路、IL-17信号通路、胰岛素信号通路等。Western blot检测结果显示,黄精芡实汤含药血清能够显著降低胰岛素抵抗模型细胞AKT1、AGE、RAGE蛋白表达量。黄精芡实汤治疗糖尿病前期具有多途径、多靶点、多层次的特征,主要机制包括以zhonghualiaoine、黄芩素、山柰酚、木犀草素为代表的多成分,以通过作用于AKT1靶点,阻滞AGE-RAGE信号通路发挥诱导胰岛素抵抗的作用,以改善糖尿病前期状态作用,也为后续黄精芡实汤治疗糖尿病前期的机制研究及临床应用提供依据。展开更多
目的:观察隔药饼灸对功能性消化不良(FD)肝郁脾虚模型大鼠HPA轴中枢相关受体及激素的影响,探讨隔药饼灸治疗FD可能的作用机制。方法:将SD大鼠随机分为空白(A)组、模型(B)组、隔药饼灸(C)组、艾炷灸(D)组和逍遥散(E)组,每组10只,除A组外...目的:观察隔药饼灸对功能性消化不良(FD)肝郁脾虚模型大鼠HPA轴中枢相关受体及激素的影响,探讨隔药饼灸治疗FD可能的作用机制。方法:将SD大鼠随机分为空白(A)组、模型(B)组、隔药饼灸(C)组、艾炷灸(D)组和逍遥散(E)组,每组10只,除A组外,其余4组采用复合病因造模法造模,连续3周;再按被试因素施加方法,分别进行隔药饼灸、艾炷灸和逍遥散灌胃治疗14d;实验结束后采用RT-PCR检测下丘脑、垂体糖皮质激素受体(GR)m RNA表达,ELISA检测下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、垂体促肾上腺皮质激素(ACTH)及肾上腺皮质酮(CORT)的含量。结果:与A组比较,B组大鼠GR m RNA在下丘脑及垂体的表达显著下降(P<0.01),且下丘脑CRH、垂体ACTH、肾上腺CORT含量显著上升(P<0.01);与B组比较,C、D、E组治疗组大鼠GR m RNA在下丘脑及垂体的表达显著上升(P<0.01),且下丘脑CRH、垂体ACTH、肾上腺CORT含量均显著下降(P<0.01);与E组比较,C组大鼠GR m RNA在下丘脑及垂体的表达及下丘脑CRH、垂体ACTH、肾上腺CORT含量相当;而D组大鼠GR m RNA在下丘脑及垂体的表达较C、E组较低(P<0.01),且下丘脑CRH、垂体ACTH、肾上腺CORT含量较C、E组较高(P<0.05)。结论:隔药饼灸能显著上调FD模型大鼠下丘脑、垂体GR m RNA表达,下调其下丘脑CRH、垂体ACTH、肾上腺CORT含量,其作用与逍遥散相当,优于艾炷灸。通过纠正HPA轴中枢相关受体及激素的异常表达,抑制HPA轴功能亢进,改善胃肠动力,这可能是隔药饼灸法治疗FD的另一作用机制。展开更多
文摘目的基于前期对灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides转录组测序结果,从灰毡毛忍冬RNA中克隆灰毡毛忍冬MADS-box基因家族蕾期延长相关基因AGL15,并对其进行生物信息学及表达分析。方法对灰毡毛忍冬总RNA进行反转录酶链式反应(reverse transcription-PCR,RT-PCR)和c DNA末端快速扩增反应(rapid amplification of c DNA ends,RACE),获得完整的开放阅读框(ORF)。运用生物信息学的方法对该序列进行同源性分析和相似性比较,预测编码蛋白,并对其进行各种理化性质分析。运用半定量PCR测得该基因在灰毡毛忍冬不同部位的表达情况。结果获得AGL15基因,ORF长795 bp,编码264个氨基酸,与葡萄Vitis vinifera中MADS-box基因家族AGL15基因相似性最高,且包含MADS和K-box的保守序列。AGL15蛋白无跨膜区域,定位于细胞质中,在灰毡毛忍冬各部位均有表达。结论首次从灰毡毛忍冬中克隆得到可能控制蕾期延长的基因,分析了其在灰毡毛忍冬不同部位表达差异性,为灰毡毛忍冬蕾期延长研究提供参考。
文摘目的筛选灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides基因表达分析的内参基因,研究其Mads-box基因家族AGL15基因(Lm AGL15)的时空表达特性。方法克隆灰毡毛忍冬内参基因18 S r RNA、Ubiquilin、Actin和Efl-β的基因片段,评价了4个基因在不同部位叶、茎和花蕾,以及4个基因在灰毡毛忍冬生长不同时期的稳定性,筛选内参基因,分析Lm AGL15基因的时空表达特性。结果 18 S r RNA表达最稳定,适宜作为内参基因,叶片、茎的Lm AGL15基因相对表达量较低,花蕾相对表达量较高。花蕾不同发育时期,Lm AGL15的相对表达量呈现逐渐降低的变化,20 d后Lm AGL15的相对表达量最低,然后依次是花蕾初期(15 d)、青绿色花蕾期(10 d)、绿白色花蕾期(5 d)。结论 18 S r RNA是适宜的内参基因。叶片、茎和花蕾中,Lm AGL15的相对表达量差异明显。花蕾发育不同时期,Lm AGL15的相对表达量呈逐渐降低的变化,与花蕾开放变化规律相似。
文摘基于网络药理学方法分析黄精芡实汤治疗糖尿病前期的分子机制。运用系统药理学方法查找并从中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP,http://Lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php)筛选黄精芡实汤方剂中各药材的活性成分及靶点,查找糖尿病前期相关基因,确定黄精芡实汤治疗糖尿病前期的靶点。利用Cytoscape构建"药物成分-靶标"网络,筛选关键化合物。利用STRING建立蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,并通过Cytoscape-CytoNCA拓扑分析筛选核心靶点。通过R-clusterProfiler对靶基因进行基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析,以预测其可能的信号通路,探究其分子机制。筛选得到黄精芡实汤79种活性成分及与糖尿病相关的靶点785个,GO和KEGG富集分析发现其功能主要与羧酸循环、肽结合、酰胺结合、水解酶活性、激酶活性调节等反应有关,富集在AGE-RAGE信号通路、TNF信号通路、AMPK信号通路、IL-17信号通路、胰岛素信号通路等。Western blot检测结果显示,黄精芡实汤含药血清能够显著降低胰岛素抵抗模型细胞AKT1、AGE、RAGE蛋白表达量。黄精芡实汤治疗糖尿病前期具有多途径、多靶点、多层次的特征,主要机制包括以zhonghualiaoine、黄芩素、山柰酚、木犀草素为代表的多成分,以通过作用于AKT1靶点,阻滞AGE-RAGE信号通路发挥诱导胰岛素抵抗的作用,以改善糖尿病前期状态作用,也为后续黄精芡实汤治疗糖尿病前期的机制研究及临床应用提供依据。
文摘目的:观察隔药饼灸对功能性消化不良(FD)肝郁脾虚模型大鼠HPA轴中枢相关受体及激素的影响,探讨隔药饼灸治疗FD可能的作用机制。方法:将SD大鼠随机分为空白(A)组、模型(B)组、隔药饼灸(C)组、艾炷灸(D)组和逍遥散(E)组,每组10只,除A组外,其余4组采用复合病因造模法造模,连续3周;再按被试因素施加方法,分别进行隔药饼灸、艾炷灸和逍遥散灌胃治疗14d;实验结束后采用RT-PCR检测下丘脑、垂体糖皮质激素受体(GR)m RNA表达,ELISA检测下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、垂体促肾上腺皮质激素(ACTH)及肾上腺皮质酮(CORT)的含量。结果:与A组比较,B组大鼠GR m RNA在下丘脑及垂体的表达显著下降(P<0.01),且下丘脑CRH、垂体ACTH、肾上腺CORT含量显著上升(P<0.01);与B组比较,C、D、E组治疗组大鼠GR m RNA在下丘脑及垂体的表达显著上升(P<0.01),且下丘脑CRH、垂体ACTH、肾上腺CORT含量均显著下降(P<0.01);与E组比较,C组大鼠GR m RNA在下丘脑及垂体的表达及下丘脑CRH、垂体ACTH、肾上腺CORT含量相当;而D组大鼠GR m RNA在下丘脑及垂体的表达较C、E组较低(P<0.01),且下丘脑CRH、垂体ACTH、肾上腺CORT含量较C、E组较高(P<0.05)。结论:隔药饼灸能显著上调FD模型大鼠下丘脑、垂体GR m RNA表达,下调其下丘脑CRH、垂体ACTH、肾上腺CORT含量,其作用与逍遥散相当,优于艾炷灸。通过纠正HPA轴中枢相关受体及激素的异常表达,抑制HPA轴功能亢进,改善胃肠动力,这可能是隔药饼灸法治疗FD的另一作用机制。
