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3株临床分离的猪流行性腹泻病毒S基因克隆及序列分析 被引量：2
1
作者 张辛铭 杨顺利 +4 位作者 马雪婷 曹钰莹 何雪阳 蔡建平 尹双辉 《动物医学进展》 北大核心 2020年第7期16-20,共5页
对临床分离鉴定的3株猪流行性腹泻病毒(PEDV)的S基因进行克隆及序列分析,对丰富我国PEDV的遗传衍化特征具有重要意义。S基因序列分析发现,JX18毒株与CV777亲缘关系较近,核苷酸同源性为99.71%,氨基酸同源性95.7%,属于G1-b进化分支。JX18... 对临床分离鉴定的3株猪流行性腹泻病毒(PEDV)的S基因进行克隆及序列分析,对丰富我国PEDV的遗传衍化特征具有重要意义。S基因序列分析发现,JX18毒株与CV777亲缘关系较近,核苷酸同源性为99.71%,氨基酸同源性95.7%,属于G1-b进化分支。JX18毒株与CV777经典毒株S蛋白氨基酸序列相比较,不存在氨基酸的插入或缺失,在中和表位区及已鉴定抗原表位区仅有一处氨基酸突变。SD18、JingTai18与PEDV CV777亲缘关系较远,核苷酸同源性分别为93.64%和92.64%,S蛋白氨基酸序列同源性分别为93%和93.5%。SD18和JingTai18位于G2-b进化分支。SD18与JingTai18株与CV777经典毒株相比,S蛋白氨基酸序列中存在插入缺失及多位点的氨基酸突变。研究结果为进一步了解我国PEDV流行及变异情况提供了数据支持。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 S基因 生物信息学分析 遗传变异
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穿膜肽与抗猪流行性腹泻病毒膜蛋白单域抗体融合表达和入胞活性分析 被引量：2
2
作者 李丽 张辛铭 +3 位作者 尹双辉 张涛涛 杨顺利 薛慧文 《动物医学进展》 北大核心 2021年第6期8-13,共6页
为获得能自主进入细胞的单域抗体(sdAb),将抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)膜蛋白(M)的sdAb与一种细胞穿膜肽(TAT)融合表达,并纯化重组TAT-sdAb蛋白。用ELISA方法检测TAT-sdAb与M蛋白的结合活性,免疫荧光试验验证其穿Vero细胞膜活性、最适作... 为获得能自主进入细胞的单域抗体(sdAb),将抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)膜蛋白(M)的sdAb与一种细胞穿膜肽(TAT)融合表达,并纯化重组TAT-sdAb蛋白。用ELISA方法检测TAT-sdAb与M蛋白的结合活性,免疫荧光试验验证其穿Vero细胞膜活性、最适作用时间和剂量,并将TAT-sdAb与胞内PEDV进行共定位研究。结果证实,sdAb与TAT融合表达不影响其与M蛋白的结合活性,在使用剂量为50μg/mL、作用3 h时,能明显观察到其进入Vero细胞,并与胞内的PEDV呈现共定位分布。结果表明,融合TAT的sdAb具有抗原结合活性和穿膜活性,为基于单域抗体的药物研发提供了理论基础,为PEDV感染细胞的动态过程研究提供了可靠工具。 展开更多
关键词 细胞穿膜肽 流行性腹泻病毒 膜蛋白 单域抗体
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猪圆环病毒2型衣壳蛋白优势B细胞表位重组蛋白免疫原性研究 被引量：1
3
作者 高雪 张辛铭 +4 位作者 肖星星 杨顺利 尚佑军 尹双辉 蔡建平 《动物医学进展》 北大核心 2020年第3期1-7,共7页
猪圆环病毒2型(PCV-2)衣壳蛋白(Cap)是研制基因工程疫苗和血清抗体检测方法的主要候选抗原。为筛选免疫原性强的Cap抗原表位,将定位在Cap上的6个B细胞线性表位的编码基因序列重新组合,命名为R1234、R1235、R1236、R2345、R2346和R3456,... 猪圆环病毒2型(PCV-2)衣壳蛋白(Cap)是研制基因工程疫苗和血清抗体检测方法的主要候选抗原。为筛选免疫原性强的Cap抗原表位,将定位在Cap上的6个B细胞线性表位的编码基因序列重新组合,命名为R1234、R1235、R1236、R2345、R2346和R3456,然后克隆至pET32a原核表达载体,转化到大肠埃希菌中进行诱导表达。通过对表达和纯化条件的优化,最终获得6个多抗原表位串联体的重组蛋白。Western blot和间接ELISA结果显示,6组重组表位蛋白均能被PCV-2阳性血清特异性识别,具有良好的反应原性。将其与完整Cap分别免疫Balb/c小鼠,检测免疫后血清中特异性抗体和细胞因子水平以及脾脏淋巴细胞中CD4^+和CD8^+T淋巴细胞的比例。结果表明,R2346组合刺激机体产生的特异性抗体和细胞因子IFN-γ、IL-4的水平明显高于其他组,脾脏淋巴细胞中CD4^+和CD8^+T淋巴细胞含量与对照组相比显著增加(P<0.05),说明该重组蛋白能够刺激体液免疫和细胞免疫反应。因此,筛选获得的R2346重组表位蛋白可以作为研制PCV-2多表位基因工程疫苗和血清抗体诊断方法的候选抗原,用于PCV-2的预防和控制工作中。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 衣壳蛋白 抗原表位 免疫原性
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双价猪流行性腹泻病毒特异性双峰驼源单域抗体的重组表达和特征分析
4
作者 李丽 杨顺利 +3 位作者 张辛铭 蔡建平 薛慧文 尹双辉 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1052-1060,共9页
旨在构建抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)膜蛋白(M)双峰驼源sdAb(sdAb-Mc19/29/30/37)的二价抗体,并比较研究单价和二价sdAb-Mc对温度的敏感性、pH耐受性、血清抗体竞争活性及抗原捕获活性等技术指标。研究结果证实,单价和二价sdAb-Mc在30~70... 旨在构建抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)膜蛋白(M)双峰驼源sdAb(sdAb-Mc19/29/30/37)的二价抗体,并比较研究单价和二价sdAb-Mc对温度的敏感性、pH耐受性、血清抗体竞争活性及抗原捕获活性等技术指标。研究结果证实,单价和二价sdAb-Mc在30~70 ℃和pH 2~10条件下,均可以结合M蛋白,当温度高于80 ℃和pH大于11时,其与M蛋白的结合活性显著下降。此外,研究发现,重组二价抗体的血清抗体竞争活性和抗原捕获活性强于单价的抗体。研究结果说明,重组表达的二价sdAb-Mc抗体对温度和pH耐受性没有改变,但其与靶抗原结合活性得到显著提高,为研制敏感和特异的PEDV病原学快速检测方法奠定基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 双峰驼 二价单域抗体
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传染性囊病病毒对IgM^(+)TIM4^(+)B细胞分化的影响
5
作者 何雪阳 肖星星 +3 位作者 燕苗苗 杨顺利 张辛铭 蔡建平 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期908-914,共7页
以佛波酯(PMA)于体外培养中刺激原代法氏囊细胞(PBCs)诱导产生的IgM^(+)TIM4^(+)B细胞为模型,分析传染性囊病病毒(IBDV)感染对IgM^(+)TIM4^(+)B细胞分化形成及IBDV在IgM^(+)TIM4^(+)B和IgM^(+)TIM4^(-)B细胞中的复制动态。结果显示,PMA... 以佛波酯(PMA)于体外培养中刺激原代法氏囊细胞(PBCs)诱导产生的IgM^(+)TIM4^(+)B细胞为模型,分析传染性囊病病毒(IBDV)感染对IgM^(+)TIM4^(+)B细胞分化形成及IBDV在IgM^(+)TIM4^(+)B和IgM^(+)TIM4^(-)B细胞中的复制动态。结果显示,PMA刺激后第24~48小时PBCs中IgM^(+)TIM4^(+)B细胞比例相对稳定;而以IBDV感染经PMA刺激24 h的PBCs后,IgM^(+)TIM4^(+)B细胞比例显著减少且与IBDV感染剂量成负相关,IgM^(+)TIM4^(+)B细胞的IBDV-VP1 RNA水平也显著低于IgM^(+)TIM4^(-)B细胞。结果提示,IBDV在IgM+TIM4+B细胞和IgM^(+)TIM4^(-)B细胞中的复制过程存在差异。 展开更多
关键词 鸡传染性囊病病毒 原代法氏囊细胞 鸡TIM4 IgM^(+)TIM4^(+)B细胞
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