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利用特异性抗体建立金黄色葡萄球菌肠毒素B快速检测方法
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作者 周刘忠 胡乃静 +4 位作者 张丁木 王志宏 吴佳果 罗龙龙 石艳春 《生物技术通讯》 CAS 2020年第6期720-726,共7页
目的:利用特异性靶向金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)的抗体建立2种体外快速检测SEB的方法。方法:通过间接ELISA法及生物膜干涉技术测定3株抗体(LXY8、LXY9和LXY10)与SEB的结合活性;通过竞争ELISA法鉴定3株抗体的表位交叉情况;利用配对抗体... 目的:利用特异性靶向金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)的抗体建立2种体外快速检测SEB的方法。方法:通过间接ELISA法及生物膜干涉技术测定3株抗体(LXY8、LXY9和LXY10)与SEB的结合活性;通过竞争ELISA法鉴定3株抗体的表位交叉情况;利用配对抗体建立双夹心ELISA检测法和胶体金试纸条层析技术检测SEB。结果:3株抗体与SEB均具有较高的亲和力(LXY8:KD=5.25×10^-10 mol/L;LXY9:KD=5.18×10^-9 mol/L;LXY10:KD=8.93×10^-10 mol/L);经间接ELISA法获得生物素标记的抗体与SEB结合的最低饱和浓度为0.25μg/mL,以该浓度作为抗原表位竞争的浓度,竞争ELISA结果表明3株抗体与SEB结合的表位不交叉;根据双夹心配伍实验的结果,获得LXY8与LXY10的最佳配对,SEB的最低检测限为240 pg/mL,而基于LXY8与LXY10配对的胶体金检测试纸条能够在5~10 min内完成样品的检测,且检测灵敏度约为2 ng/mL。结论:基于双夹心酶联免疫吸附技术建立了一种特异、灵敏的体外检测SEB的方法,利用胶体金层析技术开发了SEB快速检测的胶体金检测试纸条,能够实现SEB现场快速高效检测。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌肠毒素B 检测抗体 双夹心酶联免疫吸附检测法 胶体金层析检测法
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利用特异性识别N蛋白抗体建立SARS-CoV-2的快速检测方法 被引量：1
2
作者 吴佳果 张丁木 +1 位作者 罗龙龙 杨开明 《军事医学》 CAS 2022年第1期48-53,共6页
目的 筛选特异性识别严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核衣壳蛋白(N)高亲和力抗体,并建立一种基于双抗夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)快速检测SARS-CoV-2 N蛋白的方法。方法 使用噬菌体展示技术筛选特异性识别SARS-CoV-2 N蛋白的... 目的 筛选特异性识别严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核衣壳蛋白(N)高亲和力抗体,并建立一种基于双抗夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)快速检测SARS-CoV-2 N蛋白的方法。方法 使用噬菌体展示技术筛选特异性识别SARS-CoV-2 N蛋白的抗体,用ELISA和生物膜干涉技术(BLI)验证抗体结合活性和亲和力,使用双夹心ELISA检测获得配对抗体,用于SARS-CoV-2 N蛋白的体外快速检测。结果 利用噬菌体展示技术获得了3株特异性识别SARS-CoV-2 N蛋白的抗体,3株抗体均具有良好的结合活性和亲和力,并通过双夹心配伍试验最终获得一组最优配对抗体S005和S006-Biotin,其检测SARS-CoV-2 N蛋白的有效线性区间为12.35~333 ng/ml,最低检测灵敏度为12.35 ng/ml。结论 筛选获得了用于SARS-CoV-2 N蛋白的检测抗体对,并建立了体外快速检测新冠病毒的抗原检测方法。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征冠状病毒2 2019新型冠状病毒肺炎 核衣壳蛋白 噬菌体展示 酶联免疫吸附测定 抗原检测
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