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牛精子原位杂交DTT去凝集条件优化 被引量：1
1
作者 孙献莹 孟浩 +2 位作者 骆新荣 沈波 高庆华 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1313-1316,共4页
【目的】确定牛精子原位杂交DTT去凝集处理的优化浓度及时间。【方法】牛精子解冻后经密度梯度离心优选并制片,采用05、、10、20、40、80和100 mmol/L六个DTT浓度以及15、304、5和60 min 4个时间段的28个组合进行去凝集处理,Motic Image... 【目的】确定牛精子原位杂交DTT去凝集处理的优化浓度及时间。【方法】牛精子解冻后经密度梯度离心优选并制片,采用05、、10、20、40、80和100 mmol/L六个DTT浓度以及15、304、5和60 min 4个时间段的28个组合进行去凝集处理,Motic Images Advanced 3.2软件测量精子解聚后头部面积。【结果】40 mmol/L DTT处理45 min精子头部面积为(52.32±4.68)μm2,浓度<40 mmol/L的16个处理组及浓度≥40 mmol/L、处理时间<45 min的6个处理组,精子头部面积小于(52.32±4.68)μm2(P<0.01);浓度>40 mmol/L、时间≥45 min的5个处理组,精子头部面积与40 mmol/L DTT 45 min组差异不显著(P>0.05),但精子形态不完整。【结论】40mmol/L DTT 45 min为较优处理组合。 展开更多
关键词 牛 精子 原位杂交 DTT 解聚 头部面积
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Sry基因探针FISH检测奶牛XY精子纯度
2
作者 孙献莹 高庆华 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期13-17,共5页
为探讨荧光原位杂交技术(FISH)在评价奶牛精子纯度方面的应用价值,制备地高辛标记Sry基因探针,对分选X、Y精子及常规精子标本进行RNA水平的精子荧光原位杂交分析。结果显示,荧光原位杂交测定分选X、Y精子及常规精子纯度分别为94.6%、93... 为探讨荧光原位杂交技术(FISH)在评价奶牛精子纯度方面的应用价值,制备地高辛标记Sry基因探针,对分选X、Y精子及常规精子标本进行RNA水平的精子荧光原位杂交分析。结果显示,荧光原位杂交测定分选X、Y精子及常规精子纯度分别为94.6%、93.3%、50.3%,与对应精子纯度比较差异不显著(P>0.05),杂交信号多出现在精子尾部中段。可见:建立的Sry基因探针FISH方法评价奶牛精子纯度鉴定结果准确可靠,为其他精子纯度评价方法提供可靠的技术支持。 展开更多
关键词 奶牛 分选精子 纯度评价 Sry基因探针 荧光原位杂交
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奶牛精子RNA提取 被引量：5
3
作者 王惠娥 孙献莹 +3 位作者 高庆华 韩春梅 沈波 武延风 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第3期80-84,共5页
优选3头公牛细管冻精,采用上游法获得纯化精子,以含体细胞污染的精子作对照,应用离心层析柱方法和Trizol一步法相结合提取总RNA,紫外分光光度计检测总RNA的D260/280值和产量,并对总RNA进行RT-PCR和凝胶电泳。结果显示,纯化的牛精子中不... 优选3头公牛细管冻精,采用上游法获得纯化精子,以含体细胞污染的精子作对照,应用离心层析柱方法和Trizol一步法相结合提取总RNA,紫外分光光度计检测总RNA的D260/280值和产量,并对总RNA进行RT-PCR和凝胶电泳。结果显示,纯化的牛精子中不含体细胞,奶牛细管精液总RNA在2 h内完成提取,D260/280值为1.80,大于200 bp的总RNA产量为0.92μg/107个精子,精子总RNA进行RT-PCR,电泳后可得到清晰的SRY、LEP和RPS23基因3条带,不含18S rRNA基因条带。结果表明,离心层析柱法和Trizol一步法相结合可获得高质量的奶牛精子总RNA,且纯度和完整度高,可满足分子生物学研究的要求。 展开更多
关键词 奶牛 精子 总RNA RT-PCR
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奶牛精子原位杂交蛋白酶K浓度的优化 被引量：1
4
作者 沈波 孙献莹 +1 位作者 孟浩 高庆华 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第23期14111-14111,14119,共2页
[目的]确定奶牛精子原位杂交中最佳蛋白酶K浓度。[方法]设置6个蛋白酶K浓度(10、20、30、40、60、80μg/ml),奶牛精子在37℃消化处理20 min,以精子尾部颈段和中段的存在作为选定最佳蛋白酶K浓度的标准。[结果]30μg/m l蛋白酶K既能有效... [目的]确定奶牛精子原位杂交中最佳蛋白酶K浓度。[方法]设置6个蛋白酶K浓度(10、20、30、40、60、80μg/ml),奶牛精子在37℃消化处理20 min,以精子尾部颈段和中段的存在作为选定最佳蛋白酶K浓度的标准。[结果]30μg/m l蛋白酶K既能有效去除精子蛋白质,又能保持精子的基本形态。[结论]精子原位杂交的最佳蛋白酶K浓度是30μg/ml。 展开更多
关键词 精子 原位杂交 蛋白酶K浓度 奶牛 优化
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异性孪生不育研究进展 被引量：1
5
作者 宫昌海 马桢 +6 位作者 韩春梅 艾布什 胡晓龙 沈波 孙献莹 武延风 高庆华 《草食家畜》 2012年第4期37-41,46,共6页
本文综述了当前的异性孪生不育生物学、诊断和非牛物种发生状况的研究。异性孪生胎儿胎盘间血管发生联系导致XX/XY间性嵌合体,而雌性胎儿生殖器发生雄性化导致不孕。异性孪生不育是最常见的牛间性形式,偶尔其他物种。建立早期诊断异性... 本文综述了当前的异性孪生不育生物学、诊断和非牛物种发生状况的研究。异性孪生胎儿胎盘间血管发生联系导致XX/XY间性嵌合体,而雌性胎儿生殖器发生雄性化导致不孕。异性孪生不育是最常见的牛间性形式,偶尔其他物种。建立早期诊断异性孪生不育的新的诊断方法的基础上检测Y染色体DNA片段的聚合酶链反应较常规核型分析和临床检查显示灵敏度和效率的改善,异性孪生不育检测有较大的经济重要性。新的异性孪生不育主要在异性孪生嵌合体形成机理、缪勒氏管抑制物(MIS)抗癌应用、移植免疫学和致突变致畸形研究领域。 展开更多
关键词 异性孪生 不育 研究进展
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哺乳动物X、Y精子分离研究进展 被引量：8
6
作者 高庆华 韩春梅 孙献莹 《中国男科学杂志》 CAS CSCD 2008年第9期59-61,65,共4页
哺乳动物性别控制是一项复杂的生物技术。这技术能使动物生产与人类意愿相一致性别的后代，意味着生产资料的高效利用和牧业生产效率的提高。性别控制技术也被用于挽救濒危物种，还可以使我们通过后代性别的选择而避免性连锁疾病的发生... 哺乳动物性别控制是一项复杂的生物技术。这技术能使动物生产与人类意愿相一致性别的后代，意味着生产资料的高效利用和牧业生产效率的提高。性别控制技术也被用于挽救濒危物种，还可以使我们通过后代性别的选择而避免性连锁疾病的发生。性别控制技术具有非常重要的理论和现实意义。 展开更多
关键词 哺乳动物 性别控制 流式细胞分选 X Y精子
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精子RNA的研究进展 被引量：1
7
作者 高庆华 韩春梅 +1 位作者 唐纪伟 孙献莹 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期141-144,共4页
关键词 精子 RNA 基因表达 表现信息
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草乌甲素在家兔3种方式破损皮肤的体外透过率比较研究
8
作者 苏敏 刘红斌 +7 位作者 崔佳丽 周辉 孙献莹 毛勇 张培培 赵高琼 徐红花 王京昆 《药物评价研究》 CAS 2015年第5期491-496,共6页
目的比较草乌甲素在不同方式制备的家兔破损皮肤体外渗透速率的差异,了解皮肤破损方式对草乌甲素透过率的影响。方法结合组织病理学检查,对所获破损皮肤的破损程度进行判断,同时采用改良Franz扩散池装置进行透皮试验,以草乌甲素含量为... 目的比较草乌甲素在不同方式制备的家兔破损皮肤体外渗透速率的差异,了解皮肤破损方式对草乌甲素透过率的影响。方法结合组织病理学检查,对所获破损皮肤的破损程度进行判断,同时采用改良Franz扩散池装置进行透皮试验,以草乌甲素含量为考察指标,HPLC-MS/MS法测定接受液中指标性成分含量。结果针头划伤、砂纸打磨、4%Na2S脱毛剂处理这3种方式均能得到不同损伤程度的破损皮肤;组织病理学检查显示砂纸打磨至皮肤发红时,破损程度比较适宜,局部表皮缺失,真皮完好。三者渗透速率常数存在明显差别,分别为96.82、210.2、2.821 ng/(cm·h),以砂纸打磨所获破损皮肤的渗透速率常数最大。结论砂纸打磨可以获得较好的破损皮肤模型,该模型对药物透过率影响较小。 展开更多
关键词 草乌甲素 破损皮肤 HPLC-MS/MS 渗透速率
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