结核亚单位疫苗AEC/BC-C02诱导小鼠长期的抗原特异性细胞应答 被引量：10

1

作者 卢锦标 杨蕾 +4 位作者 付丽丽 陈保文 都伟欣 王国治 徐苗 《中国防痨杂志》 CAS 2013年第1期32-36,共5页

目的动态评价结核亚单位候选疫苗AEC/BC-C02在小鼠中的细胞免疫应答水平。方法6～8周龄SPF级BALB/c雌鼠48只,按数字表法随机分成两组,一组免疫AEC/BC-C02,另一组免疫PBS。末次免疫后第1、2、4、8周分别取两组小鼠(6只/组)分离脾淋巴细胞... 目的动态评价结核亚单位候选疫苗AEC/BC-C02在小鼠中的细胞免疫应答水平。方法6～8周龄SPF级BALB/c雌鼠48只,按数字表法随机分成两组,一组免疫AEC/BC-C02,另一组免疫PBS。末次免疫后第1、2、4、8周分别取两组小鼠(6只/组)分离脾淋巴细胞,ELISPOT检测分泌抗原特异性IFN-γ的T细胞频率;在第2、4、8周ELISA检测抗原特异性IFN-γ的分泌量;在第4、8周,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测脾淋巴细胞增殖。结果 (1)末次免疫后第1、2、4、8周,对疫苗组小鼠脾淋巴细胞,Ag85B特异性的IFN-γ斑点形成细胞(spot forming cells,SFC)分别为168.8±103.5、205.2±51.0、206.8±65.3和160.0±67.9,与PBS对照组的8.9±6.0、16.1±18.8、9.3±4.9和7.7±6.6比较,差异均有统计学意义(成组t检验,t值分别为3.779、8.525、7.424、5.473;P值均<0.01);EC特异性的IFN-γSFC分别为45.1±18.6、75.6±39.3、86.2±50.4和54.3±26.3,与PBS对照组的4.5±3.5、11.7±10.5、3.8±5.8和5.2±4.3比较,差异均有统计学意义(成组t检验,t值分别为5.258、3.850、3.977、4.521;P值均<0.01)。(2)末次免疫后第2、4、8周,对疫苗组小鼠脾淋巴细胞,Ag85B多肽刺激的IFN-γ分泌量分别是(1.27±0.13)ng/ml,(1.76±0.55)ng/ml和(1.44±0.44)ng/ml;EC多肽刺激的IFN-γ分泌量分别是(0.81±0.33)ng/ml,(0.81±0.69)ng/ml和(0.54±0.29)ng/ml,两者间差异有统计学意义(配对t检验,分别为:t=3.008,P<0.05;t=2.631,P<0.05;t=10.02,P<0.01)。(3)末次免疫后第4、8周,Ag85B多肽对疫苗组小鼠脾淋巴细胞的刺激指数(SI)分别为1.756±0.339和1.936±0.287,均分别高于PBS组的1.287±0.0581和1.382±0.114,差异有统计学意义(成组t检验,分别为:t=3.030,P<0.05;t=4.387,P<0.01);EC多肽对疫苗组SI分别为1.599±0.154和1.581±0.156,均分别高于PBS组的1.380±0.126和1.314±0.170,差异有统计学意义(成组t检验,t值分别为2.540、2.844;P值均<0.05)。结论新型结核亚单位疫苗AEC/BC-C02免疫小鼠可诱导长期稳定存在的抗原特异性记忆T细胞,为后期抗Mtb保护力研究提供药理学基础。 展开更多

关键词 疫苗 亚单位 免疫 细胞 抗原 细菌 细菌蛋白质类 重组融合蛋白质类 小鼠

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异烟肼联合重组结核疫苗AEC／BC02对结核分枝杆菌感染豚鼠的治疗效果评价 被引量：7

2

作者 卢锦标 沈小兵 +4 位作者 苏城 杨蕾 都伟欣 王国治 陈保文 《中国防痨杂志》 CAS 2017年第2期123-128,共6页

目的评价异烟肼联合重组结核疫苗AEC／BC02（BCG-CpG复合佐剂，即BCG-CpG-DNA＋Al）对结核分枝杆菌感染豚鼠的治疗效果。方法选取30只无特定病原体（specific pathogen free，SPF）级豚鼠，在皮下注射结核分枝杆菌菌液[1000菌落形成单位... 目的评价异烟肼联合重组结核疫苗AEC／BC02（BCG-CpG复合佐剂，即BCG-CpG-DNA＋Al）对结核分枝杆菌感染豚鼠的治疗效果。方法选取30只无特定病原体（specific pathogen free，SPF）级豚鼠，在皮下注射结核分枝杆菌菌液[1000菌落形成单位（CFU）／只]1周后，按不同治疗方式分成4个组：即AEC／BC02组（6只），采用AEC／BC02疫苗进行肌肉免疫；INH组（6只），采用异烟肼10mg进行灌胃治疗；INH＋AEC／BC02组，先采用异烟肼进行灌胃治疗2周后，再采用AEC／BC02疫苗进行肌肉免疫；生理盐水（NS）组（12只），作为阴性对照，仅注射NS。所有豚鼠在进行攻毒（注射结核分枝杆菌菌液）后第10周被解剖，以豚鼠肝、脾、肺脏病变指数评分评价脏器病变，并计算各脏器活菌载量（1gCFU）。结果AEC／BC02组、INH组和INH＋AEC／BC02组的整体脏器综合病变评分分别为（36．7±28．2）、（20．0±12．7）和（3．3±5．2）分，均低于NS组的（69．2±24．5）分，差异均有统计学意义（分别为q=4．37，P=0．023；q=6．61，P〈0．001；q=8．85，P〈0．001）；INH＋AEC／BC02组整体脏器综合病变评分低于AEC／BC02组，差异也有统计学意义（q=3．88，P=0．049）。INH＋AEC／BC02组的脾脏活菌载量为（1．06±1．64）lgCFU，低于INH组的（3．55±1．90）lgCFU、AEC／BC02组的（4．21±0．78）lgCFU及NS组的（4．73±0．79）lgCFU，差异均有统计学意义（分别为q=4．84，P=0．011；q=6．12，P=0．001；q=8．23，P〈0．001）。INH＋AEC／BC02组的肺脏活菌载量为（0．69±1．07）lgCFU，低于INH组的（2．66±1．70）lgCFU、AEC／BC02组的（3．01±0．90）lgCFU及NS组的（4．36±0．79）lgCFU，差异均有统计学意义（分别为q=4．43，P=0．021；q=5．21，P=0．006；q=9．50，P〈0．001）；INH组的肺脏活菌载量低于NS组，差异也有统计学意义（q=4．39，P=0．022）。结论异烟肼和AEC／BC02疫苗联合使用优于单一治疗方式，能够明显减轻动物脏器病变，降低脾脏和肺脏的活菌载量。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 异烟肼 疫苗 合成 药物疗法 联合 疾病模型 动物 对比研究

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对我国结核病免疫预防策略的探讨 被引量：8

3

作者 卢锦标 赵爱华 +1 位作者 王国治 徐苗 《中国防痨杂志》 CAS 2014年第11期927-929,共3页

目前国内外对结核病的预防控制的设想基本达成共识,即在现用卡介苗无可替代的情况下,积极研究新的初免用疫苗、卡介苗初免后加强免疫用疫苗,以及结核分枝杆菌潜伏感染人群用疫苗.这3种类型的结核病新疫苗针对的人群具有各自不同的免疫标... 目前国内外对结核病的预防控制的设想基本达成共识,即在现用卡介苗无可替代的情况下,积极研究新的初免用疫苗、卡介苗初免后加强免疫用疫苗,以及结核分枝杆菌潜伏感染人群用疫苗.这3种类型的结核病新疫苗针对的人群具有各自不同的免疫标识,如何筛查出这些不同类型的人群并采取相应的疫苗进行免疫预防是结核病控制中的重点.作者就上述问题展开探讨,尝试对我国结核病免疫预防策略提出建议. 展开更多

关键词 结核/预防和控制 卡介苗 接种

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结核菌素类产品不同生产用菌种与剂量差异对迟发型超敏反应强度影响探讨——兼对孟炜丽医生《几点说明》一文回复 被引量：2

4

作者 卢锦标 王国治 赵爱华 《中国防痨杂志》 CAS 2015年第2期214-215,共2页

非常感谢孟炜丽医生从使用者角度对《关于BCG-PPD与TB-PPD在结核分枝杆菌感染、结核病筛查结果差异的相关意见》提出自己的见解。鉴于目前国内BCG-PPD和5IU与2IU2种剂量的TB-PPD全面恢复生产，不少使用者对此类产品的选择存在一定困惑... 非常感谢孟炜丽医生从使用者角度对《关于BCG-PPD与TB-PPD在结核分枝杆菌感染、结核病筛查结果差异的相关意见》提出自己的见解。鉴于目前国内BCG-PPD和5IU与2IU2种剂量的TB-PPD全面恢复生产，不少使用者对此类产品的选择存在一定困惑，孟炜丽医生提出的问题与意见有一定代表性。 展开更多

关键词 结核菌素类 医生 反应强度 剂量 产品 BCG-PPD 迟发型 结核分枝杆菌感染

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Poly I∶C联合BCG-CpG复合佐剂对结核亚单位疫苗免疫效果的影响 被引量：2

5

作者 卢锦标 杨蕾 +4 位作者 陈保文 沈小兵 苏城 徐苗 王国治 《微生物学免疫学进展》 2014年第3期6-12,共7页

目的探讨聚肌胞苷酸(Poly I∶C)联合BCG-CpG复合佐剂(BCG-CpG-DNA+Al,简称BC02)对结核亚单位疫苗的免疫效果是否有增强作用。方法 BALB/c小鼠分成5组,3组分别免疫含有不同剂量poly I∶C(10、25、50μg/剂)的结核亚单位疫苗(Ag85b+ESAT6-... 目的探讨聚肌胞苷酸(Poly I∶C)联合BCG-CpG复合佐剂(BCG-CpG-DNA+Al,简称BC02)对结核亚单位疫苗的免疫效果是否有增强作用。方法 BALB/c小鼠分成5组,3组分别免疫含有不同剂量poly I∶C(10、25、50μg/剂)的结核亚单位疫苗(Ag85b+ESAT6-CFP10)/(BC02+poly I∶C)3针,间隔10 d;2组分别免疫PBS或(Ag85b+ESAT6-CFP10)/BC02作为对照。末次免疫后第7 d,分离脾淋巴细胞,进行抗原特异性的IFN-γELISPOT检测、ELISA检测和淋巴细胞增殖检测以评价细胞免疫应答。豚鼠分成4组,1组免疫含有50μg poly I∶C/剂的新亚单位疫苗(Ag85b+ESAT6-CFP10)/(BC02+poly I∶C)3针,间隔10 d;3组分别免疫(Ag85b+ESAT6-CFP10)/BC02疫苗、生理盐水和BCG作为对照。末次免疫30 d后,每只豚鼠皮下攻击250 CFU结核分枝杆菌。41 d后,解剖豚鼠,进行肝、脾、肺脏器综合病变评分和脾菌计数以评价保护力。结果含不同剂量poly I∶C的(Ag85b+ESAT6-CFP10)/(BC02+poly I∶C)疫苗免疫组小鼠的脾淋巴细胞分别经Ag85b和ESAT6-CFP10多肽刺激后,分泌IFN-γ的抗原特异性T细胞频数、IFN-γ分泌量和细胞增殖指数均较(Ag85b+ESAT6-CFP10)/(BC02)组大幅度提高,且应答强度与poly I∶C呈现较为明显的量效关系。(Ag85b+ESAT6-CFP10)/(BC02+poly I∶C)组豚鼠脏器综合病变指数(27.5±20.4)和脾菌分离数[(4.22±0.59)log10CFU]均低于(Ag85b+ESAT6-CFP10)/BC02组[35.8±27.3,(5.19±0.66)log10CFU],其中脾菌分离数的差异有显著统计学意义(P=0.003 0)。结论 Poly I∶C佐剂对结核亚单位疫苗(Ag85b+ESAT6-CFP10)/BC02诱导的细胞免疫应答和抗结核保护力均有一定的增强效果。 展开更多

关键词 Poly I∶C 佐剂 结核疫苗 (Ag85b+ESAT6-CFP10) BC02 细胞免疫应答 保护效果

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炭疽PA和芽孢双组分候选疫苗免疫豚鼠的免疫学初步评价 被引量：2

6

作者 卢锦标 魏东 王国治 《中国医药生物技术》 2013年第2期125-128,共4页

目的对豚鼠免疫重组PA抗原和甲醛灭活芽孢组成的炭疽候选疫苗,评价其免疫效果。方法将豚鼠随机分成5个实验组,分别免疫高、中、低剂量候选疫苗、炭疽活疫苗或生理盐水;免疫后不同时间点采血进行抗体检测、XTT法淋巴细胞增殖检测以及皮... 目的对豚鼠免疫重组PA抗原和甲醛灭活芽孢组成的炭疽候选疫苗,评价其免疫效果。方法将豚鼠随机分成5个实验组,分别免疫高、中、低剂量候选疫苗、炭疽活疫苗或生理盐水;免疫后不同时间点采血进行抗体检测、XTT法淋巴细胞增殖检测以及皮肤迟发型超敏反应检测。结果抗体检测结果显示,双组分炭疽候选疫苗能诱导较强的体液免疫应答;XTT细胞增殖结果显示,外周血淋巴细胞特异性增殖不明显,但所有候选疫苗组针对rPADTH阳转率24h后均为100%。结论双组分炭疽候选疫苗能诱导豚鼠产生体液免疫和细胞免疫应答。 展开更多

关键词 芽孢杆菌 炭疽 炭疽菌苗 豚鼠 免疫评价

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结核灭活疫苗的临床研究进展 被引量：2

7

作者 卢锦标 徐苗 《微生物学免疫学进展》 2019年第4期69-74,共6页

分枝杆菌灭活疫苗(inactivated mycobacterium vaccines)是一种最原始、简单制备方法的产物,但在结核疫苗史上始终拥有一席之地。从早期的旧结核菌素和死卡介苗以及中期唯一的分枝杆菌疫苗,到如今逐个出现的新疫苗,分枝杆菌灭活疫苗仍... 分枝杆菌灭活疫苗(inactivated mycobacterium vaccines)是一种最原始、简单制备方法的产物,但在结核疫苗史上始终拥有一席之地。从早期的旧结核菌素和死卡介苗以及中期唯一的分枝杆菌疫苗,到如今逐个出现的新疫苗,分枝杆菌灭活疫苗仍受到研究者的重视,其用途也从结核病患者的免疫治疗,扩大到潜伏感染人群的预防和卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin, BCG)初免后的加强免疫。现就分枝杆菌灭活疫苗的临床研究历史和现状作一综述,为新疫苗的研制提供参考。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 灭活 临床试验 疫苗

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对王永红医生《对（2008~2014年中国石油大学（北京）新生PPD试验结果与结核发病情况分析〉一文的商榷意见的答复》的回复

8

作者 卢锦标 徐苗 赵爱华 《中国防痨杂志》 CAS 2015年第9期1001-1002,共2页

非常感谢王永红医生对商榷意见的答复。在该答复中王永红医生明确了2013年以前PPD试验试剂为BCG-PPD，使用剂量5IU／人；2013年以后PPD试验试剂为TB-PPD，使用剂量2IU／人。对于PPD结果在2013年前后趋势发生重大变化，王永红医生主要考... 非常感谢王永红医生对商榷意见的答复。在该答复中王永红医生明确了2013年以前PPD试验试剂为BCG-PPD，使用剂量5IU／人；2013年以后PPD试验试剂为TB-PPD，使用剂量2IU／人。对于PPD结果在2013年前后趋势发生重大变化，王永红医生主要考虑两个因素：①与PPD的剂量有关；②与BCG-PPD和TB-PPD也可能有关。 展开更多

关键词 PPD试验 医生 答复 发病情况 石油大学 BCG-PPD 结核 新生

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对《2008-2014年中国石油大学（北京）新生PPD试验结果与结核发病情况分析》一文的商榷意见

9

作者 卢锦标 徐苗 赵爱华 《中国防痨杂志》 CAS 2015年第8期818-818,共1页

《2008-2014年中国石油大学（北京）新生PPD试验结果与结核发病情况分析》一文刊于《中国防痨杂志》2015年第37卷第6期第645～649页。作者收集了中国石油大学（北京）20082014年入学共计13093名本科新生的PPD试验结果，采用描述性统计... 《2008-2014年中国石油大学（北京）新生PPD试验结果与结核发病情况分析》一文刊于《中国防痨杂志》2015年第37卷第6期第645～649页。作者收集了中国石油大学（北京）20082014年入学共计13093名本科新生的PPD试验结果，采用描述性统计方法分析了PPD试验阴性率与强阳性率的变化趋势。结果显示2008-2014年度PPD试验阴性率逐年增加，PPD试验阳性率和强阳率逐年下降。无论PPD阴性率还是PPD阳性率和强阳性率，趋势发生重大变化的年度均为2013年度，并且2013年和2014年三者的检测结果明显偏离往年。作者明确2013年前使用的PPD为成都生物制品研究所生产，2013年后使用的PPD为北京祥瑞生物制品有限公司生产。 展开更多

关键词 PPD试验 石油大学 本科新生 发病情况 北京 中国 成都生物制品研究所 结核

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关于BCG—PPD与TB—PPD在结核分枝杆菌感染、结核病筛查结果差异的相关意见

10

作者 卢锦标 王国治 赵爱华 《中国防痨杂志》 CAS 2015年第2期212-213,共2页

目前国内有经结核分枝杆菌滤液提取的PPD（TB-PPD）与减毒牛分枝杆菌提取的PPD（BCG-PPD）2种产品，TB-PPD还有5IU／人份与2IU／人份2种剂量，使用者对不同品种与剂量产品用途存在疑问。根据由国家药品主管部门批准的PPD规程与使用说明... 目前国内有经结核分枝杆菌滤液提取的PPD（TB-PPD）与减毒牛分枝杆菌提取的PPD（BCG-PPD）2种产品，TB-PPD还有5IU／人份与2IU／人份2种剂量，使用者对不同品种与剂量产品用途存在疑问。根据由国家药品主管部门批准的PPD规程与使用说明书，TB-PPD与BCG-PPD均以PPD国际标准PPDS标化的同剂量国家标准品进行标化，活性效价完全一致。目前国内使用的主流产品50IU／ml规格的TB-PPD与BCG-PPD用途相同，可用于结核病的临床诊断、卡介苗接种对象的选择及卡介苗接种后的质量监测；而20IU／ml规格的TB-PPD则专供结核病流行病学调查及临床疑似结核病患者诊断使用。建议使用者根据PPD使用说明书及用途选择适用的制品。 展开更多

关键词 BCG-PPD 结核分枝杆菌感染 结核病患者 筛查结果 使用说明书 TB 临床诊断 流行病学调查

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我国卡介苗保护力评价参考体系建立的探讨 被引量：16

11

作者 陈保文 沈小兵 +4 位作者 都伟欣 苏城 杨蕾 卢锦标 王国治 《中国防痨杂志》 CAS 2012年第3期150-153,共4页

目的探讨我国结核病新疫苗评价用卡介苗参考体系对豚鼠的保护力。方法采用我国卡介苗(D2PB 302)菌株制备的疫苗,以1/10人用剂量(0.005mg/0.2ml)经皮下注射免疫豚鼠,对照组等体积注射生理盐水。共进行4个实验,免疫与感染间隔分别为:实验... 目的探讨我国结核病新疫苗评价用卡介苗参考体系对豚鼠的保护力。方法采用我国卡介苗(D2PB 302)菌株制备的疫苗,以1/10人用剂量(0.005mg/0.2ml)经皮下注射免疫豚鼠,对照组等体积注射生理盐水。共进行4个实验,免疫与感染间隔分别为:实验Ⅰ与Ⅱ免疫后进行Mtb感染的时间间隔为5周(其中实验Ⅱ为实验Ⅰ的重复实验,实验Ⅰ中BCG组和对照组均入组8只豚鼠;实验Ⅱ中BCG组入组6只豚鼠,对照组入组8只豚鼠),实验Ⅲ为28周(BCG组入组5只豚鼠,对照组入组6只豚鼠),实验Ⅳ为60周(BCG组和对照组均入组8只豚鼠),感染剂量为每只豚鼠2×(102～103)CFU Mtb/ml,注射0.5ml,感染途径为皮下注射,感染后6周,进行豚鼠解剖,观察豚鼠肝脾肺的病变程度并进行脾脏Mtb的分离,计算脾脏Mtb分离数和对数值。结果 (1)BCG免疫5周组,豚鼠的肝脾肺综合病变指数为10.0±3.8,较对照组(46.9±4.8)差异有显著统计学意义(t=-0.63,P<0.01);脾脏Mtb分离数的对数值(lg)为0.49±0.49,较对照组(5.41±0.18)差异有显著统计学意义(t=-9.43,P<0.01)。(2)BCG免疫5周重复实验组,豚鼠的肝脾肺综合病变指数为6.7±2.1,较对照组(36.3±6.0)差异有显著统计学意义(t=-4.63,P<0.01);脾脏Mtb分离数的对数值(lg)为0.38±0.38,较对照组(5.11±0.19)差异有显著统计学意义(t=-11.22,P<0.01)。(3)BCG免疫28周组,豚鼠的肝脾肺综合病变指数为10.0±4.5,较对照组(57.5±6.2)差异有显著统计学意义(t=-6.24,P<0.01);脾脏Mtb分离数的对数值(lg)为2.16±0.93,较对照组(5.44±0.27)差异有统计学意义(t=-3.39,P<0.05)。(4)BCG免疫60周组,豚鼠的肝脾肺综合病变指数为14.4±4.8,较对照组(56.9±5.0)差异有显著统计学意义(t=-6.16,P<0.01);脾脏Mtb分离数的对数值(lg)为1.46±0.69,较对照组(5.43±0.20)差异有显著统计学意义(t=-5.55,P<0.01)。结论卡介苗保护力评价参考体系可靠稳定,我国临床应用卡介苗在该体系呈现优良保护效果。 展开更多

关键词 卡介苗 治疗结果 疾病模型 动物 评价研究

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卡介菌CpG DNA复合佐剂-02系统(BC-C02)有效性与安全性评价 被引量：12

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作者 赵爱华 李凤祥 +11 位作者 寇丽杰 李长贵 乔来艳 王鹏 陈保文 徐苗 都伟欣 沈小兵 苏城 卢锦标 杨蕾 王国治 《中国防痨杂志》 CAS 2012年第3期161-167,共7页

目的对卡介菌(BCG)CpG DNA复合佐剂-02系统(BC-C02)的有效性及安全性进行评价,为其应用提供研究基础。方法以流式细胞法检测经CpG DNA与细胞体外共培养后B细胞内TLR-9,巨噬细胞内IL-12、TLR-9表达,以酶联免疫斑点法检测人外周血单个核细... 目的对卡介菌(BCG)CpG DNA复合佐剂-02系统(BC-C02)的有效性及安全性进行评价,为其应用提供研究基础。方法以流式细胞法检测经CpG DNA与细胞体外共培养后B细胞内TLR-9,巨噬细胞内IL-12、TLR-9表达,以酶联免疫斑点法检测人外周血单个核细胞(PBMC)经CpG DNA刺激后IL-12的分泌。单纯H1N1抗原低、中、高三个剂量组及三个剂量抗原添加CpG DNA后免疫小鼠,每组20只动物,免疫后测定其抗体效价及H1N1病毒感染后死亡率。经Mtb感染后豚鼠,以Ag85B+BC-C02疫苗低、中、高组与BC-C02及生理盐水(NS)进行免疫治疗,每组10只豚鼠,观察动物脏器结核病变指数。同时分别检测CpG DNA注射小鼠后IgE产生和复合佐剂BC-C02注射豚鼠后全身过敏毒性。结果BC-C02中的生物佐剂可刺激B细胞增殖[佐剂组CD19+%为41%,培养基对照组(NCS)组为27%;t=-4.40,P<0.05];促进B细胞内TLR-9表达(佐剂组CD19+TLR-9+%为2.8%,NCS组为1.1%;t=-5.92,P<0.05);上调巨噬细胞表面MHC-Ⅱ类分子表达(佐剂组F4/80+I-A/I-E+%为82%,NCS组为31%;t=-4.32,P<0.05);可促进巨噬细胞内TLR-9和IL-12的分泌(佐剂组F4/80+I-A/I-E+TLR-9+IL-12+%为2.1%,NCS组为0.1%;t=4.80 P<0.05)。BC-C02中的生物佐剂作为H1N1疫苗佐剂,在检测时间内(5、7、14、28d),PBS组4个时间点血凝抑制(HI)抗体滴度均<10;H1N1低剂量组滴度<中剂量组滴度<高剂量组滴度,抗原复合CpG组均高于单纯抗原组,且佐剂可促进抗原特异性IgG2a的提高。H1N1保护力实验中,PBS组、H1N1低剂量组、H1N1低剂量+CpG DNA组、H1N1高剂量组、H1N1高剂量+CpG DNA组存活率分别为30%、50%、90%、100%、100%,显示佐剂可提高40%动物存活率。Mtb潜伏感染动物经疫苗治疗后,对照组动物100%病变,疫苗组完全转阴的动物达到30%,而且病变指数<30的动物达到60%～70%。佐剂注射小鼠后IgE抗体与NS无区别,豚鼠过敏毒性试验显示佐剂不会引起动物全身过敏反应。结论BC-C02既能诱导细胞免疫反应,也能诱导体液免疫反应,并能提高疫苗保护效力,可作为一种新型疫苗用佐剂的候选佐剂。 展开更多

关键词 分枝杆菌 牛 DNA 细菌 佐剂 免疫 可重复性 结果

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探针熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌注射类二线药耐药突变 被引量：7

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作者 张婷 付军 +5 位作者 王国治 陈保文 杨蕾 卢锦标 许晔 李庆阁 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期412-417,共6页

目的评价结核分枝杆菌注射类二线药耐药突变检测试剂盒MeltPro TB/SL的分析性能以及临床性能。方法首先使用企业参考品对试剂盒的突变检出能力进行考察,之后将野生型基因组DNA以10倍梯度稀释后考察试剂盒的最低检测限,使用野生型质粒以... 目的评价结核分枝杆菌注射类二线药耐药突变检测试剂盒MeltPro TB/SL的分析性能以及临床性能。方法首先使用企业参考品对试剂盒的突变检出能力进行考察,之后将野生型基因组DNA以10倍梯度稀释后考察试剂盒的最低检测限,使用野生型质粒以及含常见耐药突变的质粒以不同突变比例混合考察试剂盒检测不均一耐药样本的能力,并使用23株非结核分枝杆菌标准株考察试剂盒的分析特异性,最后使用241份临床分离株对试剂盒进行临床评价。结果该试剂盒可以将9种耐药相关突变与1种野生型多态性与野生型进行区分。可以检测到低至5个拷贝的野生型基因组DNA。当突变比例为30%或更高时,试剂盒可以将其与野生型进行区分。23种非结核分枝杆菌的结果显示该试剂盒有良好的特异性。和比例法药敏试验进行对比,该试剂盒的临床灵敏度为卡那霉素90.0%(9/10),阿米卡星80.0%(8/10),卷曲霉素85.7%(6/7);特异性为卡那霉素98.8%(85/86),阿米卡星98.8%(85/86),卷曲霉素96.6%(86/89)。试剂盒检测结果与测序结果一致。结论该试剂盒灵敏度高、特异性好,可以快速、准确地检测结核分枝杆菌注射类二线药常见的耐药突变,有望应用于临床。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 注射类二线药 耐药突变 探针熔解曲线法

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重组结核分枝杆菌11kDa蛋白鉴别潜伏性结核感染与卡介苗接种的研究 被引量：6

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作者 赵爱华 康万里 +7 位作者 王国治 高正伦 都伟欣 卢锦标 沈小兵 苏城 徐苗 郑素华 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2020年第8期821-825,共5页

目的评价重组结核分枝杆菌11kDa(相对分子质量为11000)蛋白(简称"重组11kDa蛋白")在潜伏性结核感染筛查和卡介苗接种鉴别中的应用。方法由首都医科大学附属北京胸科医院联合北京市昌平区结核病防治所、北京市怀柔区结核病防... 目的评价重组结核分枝杆菌11kDa(相对分子质量为11000)蛋白(简称"重组11kDa蛋白")在潜伏性结核感染筛查和卡介苗接种鉴别中的应用。方法由首都医科大学附属北京胸科医院联合北京市昌平区结核病防治所、北京市怀柔区结核病防治所和北京市大兴区结核病防治所,于2014年7月至2016年3月在以上3个区的高校和工厂招募健康志愿者。共计招募3001名志愿者,所有志愿者体检合格,均签订知情同意书。对所有志愿者采用Mantoux法进行重组11kDa蛋白和结核菌素纯蛋白衍生物(TB-PPD)同体双臂皮肤试验,分别于不同前臂皮内注射0.1ml重组11kDa蛋白(10μg/ml)和0.1ml TB-PPD(50U/ml),观察注射后72h后的皮肤反应。于皮肤试验前采集所有志愿者的静脉血,进行体外γ-干扰素释放试验(IGRA)检测。采用"一致率(%)"和"一阶一致性系数(the first-order agreement coefficient,AC1)比较重组11kDa蛋白皮肤试验、TB-PPD试验及IGRA结果的差异。3001名志愿者均接受3种方法检测,其中475名3种检测结果均为阴性的受试者,采用数字表法按随机双盲的原则,以2∶1的比例接种卡介苗(318名;失访8例)和安慰剂(147名;失访2例),接种3个月后再次进行重组11kDa蛋白皮肤试验、TB-PPD皮肤试验及IGRA,采用"一致率(%)"和"AC1"比较其结果差异。结果健康志愿者潜伏性结核感染筛查中,IGRA阳性率(34.4%,1033/3001)明显高于重组11kDa蛋白(32.2%,966/3001),差异有统计学意义(χ^2=22.787,P<0.001);IGRA与重组11kDa蛋白的一致率为93.4%(2804/3001),AC1值为0.882(95%CI=0.866~0.898),两者有较好的一致性。TB-PPD阳性率(47.7%,1430/3001)明显高于重组11kDa蛋白(32.2%,966/3001),差异有统计学意义(χ^2=182.146,P<0.001);TB-PPD与重组11kDa蛋白的一致率为60.6%(1819/3001),AC1值为0.243(95%CI=0.207~0.279),两者的一致性较差。卡介苗接种鉴别研究中,接种卡介苗的志愿者重组11kDa蛋白的阳性率(1.3%,4/318)与IGRA(3.1%,10/318)比较,差异无统计学意义(χ^2=2.571,P=0.109);一致率为95.6%(304/318),AC1值为0.954(95%CI=0.929~0.979),两者有较好的一致性。重组11kDa蛋白的阳性率(1.3%,4/318)低于TB-PPD(56.3%,179/318),差异有统计学意义(χ^2=167.350,P<0.001);TB-PPD与重组11kDa蛋白的一致率为42.5%(135/318),AC1值为0.025(95%CI=-0.106~0.155),两者的一致性较差。接种安慰剂的志愿者重组11kDa蛋白的阳性率(4.1%,6/147)与IGRA(1.4%,2/147)比较,差异无统计学意义(χ^2=2.667,P=0.109);一致率为95.9%(141/147),AC1值为0.957(95%CI=0.921~0.993),两者有较好的一致性。TB-PPD的阳性率(17.7%,26/147)高于重组11kDa蛋白(4.1%,6/147),差异有统计学意义(χ^2=15.385,P<0.001),一致率为82.3%(121/147),AC1值为0.781(95%CI=0.690~0.871),两者有较好的一致性。结论重组11kDa蛋白在潜伏性结核感染筛查和卡介苗接种方面与IGRA有很好的一致性,可作为潜伏性结核感染者筛查与卡介苗接种鉴别的候选诊断试剂。 展开更多

关键词 重组蛋白质类 潜伏性结核病 试剂盒 诊断 皮肤试验 卡介苗 诊断 鉴别

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冻干重组结核杆菌融合蛋白(EC)原液效力评价用国家参考品的初步建立 被引量：4

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作者 都伟欣 韦芬 +4 位作者 卢锦标 赵爱华 蒲江 王国治 徐苗 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2020年第8期826-831,共6页

目的以冻干重组结核杆菌融合蛋白(EC)[该制品名称是国家药典委员会确定的药品中文通用名称,"EC"为重组融合蛋白"结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶6(ESAT-6)和培养滤液蛋白10(CFP-10)"](以下简称"EC")原液为... 目的以冻干重组结核杆菌融合蛋白(EC)[该制品名称是国家药典委员会确定的药品中文通用名称,"EC"为重组融合蛋白"结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶6(ESAT-6)和培养滤液蛋白10(CFP-10)"](以下简称"EC")原液为原材料,研制EC变态反应原原液效力评价用国家参考品。方法以电泳法、高效液相色谱法分别测定备选EC原液纯度,纯度合格后经精密称量、分装、冻干制成候选国家参考品,再测定其蛋白质和水分含量。将候选国家参考品稀释成不同稀释度后,皮内注射结核分枝杆菌活菌致敏的豚鼠,根据皮肤试验硬结或红晕反应平均直径大小(简称"反应平均直径大小")结果探索原液效价测定的适宜稀释度。在此基础上,将候选国家参考品用于EC原液的效价测定并进行方法验证,初步评价其适用性能。研究还初步观察了候选品在-20℃放置24个月的稳定性。结果 EC原液电泳法纯度为100.00%,高效液相色谱法纯度为95.33%,候选国家参考品蛋白质含量为508μg/瓶,水分含量为1.57%,分装精度控制在±1%以内。稀释度探索结果显示:候选品稀释度为2.5μg/ml(12.5U/ml)、5μg/ml(25U/ml)和10μg/ml(50U/ml)时剂量对数反应平均直径大小曲线有良好的线性关系(R^2=0.9944),可作为后续研究的适宜稀释度。将候选国家参考品用于EC原液效价测定,两者剂量对数反应平均直径大小曲线趋势基本一致(R^2=0.9878,R^2=0.9643),且每个稀释度EC原液与相应稀释度候选国家参考品反应平均直径大小的比值均满足1.0±0.2。方法验证结果显示:候选国家参考品和EC原液的剂量对数反应平均直径大小曲线趋势基本一致(R^2=0.9999,R^2=0.9815),且两者相应稀释度反应平均直径大小的比值均满足1.0±0.2,方法可行。初步稳定性研究结果显示:-20℃放置24个月的候选国家参考品效价测定性能稳定。结论候选国家参考品的纯度、蛋白质含量、水分含量及均匀性检测均符合国家参考品质量要求,将其稀释到适宜稀释度后可用于EC原液的效价测定;经方法验证与稳定性观察,显示其性能良好,为国家参考品申报提供了基础。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 重组融合蛋白质类 冷冻干燥法 参考标准 国家参考品 效价

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结核菌素类产品的发展历程概述 被引量：7

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作者 都伟欣 赵爱华 +1 位作者 王国治 卢锦标 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2019年第10期1080-1083,共4页

结核菌素类产品研发至今已120多年,经历了旧结核菌素、纯蛋白衍生物和新型皮肤试验诊断试剂的不同发展阶段。本文介绍以上产品的研发历程和产品特点,以及发展趋势,供使用人员了解其背景知识,便于更合理的应用此类产品,同时也为新型皮肤... 结核菌素类产品研发至今已120多年,经历了旧结核菌素、纯蛋白衍生物和新型皮肤试验诊断试剂的不同发展阶段。本文介绍以上产品的研发历程和产品特点,以及发展趋势,供使用人员了解其背景知识,便于更合理的应用此类产品,同时也为新型皮肤试验诊断试剂的研究提供借鉴。 展开更多

关键词 结核菌素 生物制品 结核菌素试验 评论

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结核病诊断中酶联免疫斑点试验检测试剂临床应用的风险评估与控制 被引量：5

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作者 杨蕾 卢锦标 +2 位作者 都伟欣 王国治 陈保文 《中国防痨杂志》 CAS 2017年第8期894-897,共4页

通过对可能影响γ干扰素释放试验（IGRA）的酶联免疫斑点试验（ELISPOT）检测结果的受试者、检测方法、环境设施和仪器等因素的风险识别与分析，提示ELISPOT检测试剂在临床结核病诊断应用中可能产生的风险，并提出相应的风险控制措施，... 通过对可能影响γ干扰素释放试验（IGRA）的酶联免疫斑点试验（ELISPOT）检测结果的受试者、检测方法、环境设施和仪器等因素的风险识别与分析，提示ELISPOT检测试剂在临床结核病诊断应用中可能产生的风险，并提出相应的风险控制措施，以降低该类试剂的检测风险。 展开更多

关键词 结核 干扰素Γ 酶联免疫斑点检测 危险性评估 质量控制

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PPD皮肤试验方法最佳观察时间的探讨 被引量：6

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作者 都伟欣 徐苗 +5 位作者 卢锦标 杨蕾 苏城 沈小兵 王国治 陈保文 《检验医学与临床》 CAS 2012年第13期1604-1605,共2页

目的研究不同观察时间结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)皮试结果对健康志愿者和结核病患者的诊断情况,探讨其临床应用的最佳观察时间。方法随机选取506例健康志愿者和491例结核病患者,以上实验对象均皮内注射0.1mL PPD试剂,注射结束后分别于24... 目的研究不同观察时间结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)皮试结果对健康志愿者和结核病患者的诊断情况,探讨其临床应用的最佳观察时间。方法随机选取506例健康志愿者和491例结核病患者,以上实验对象均皮内注射0.1mL PPD试剂,注射结束后分别于24、48h和72h观察并记录局部皮肤反应。结果在506例健康志愿者PPD皮试结果中,24、48h和72h的阴性人数分别为291例、258例和266例。在491例结核病患者PPD皮试结果中,24、48h和72h的阳性例数分别为380例、417例和424例。应用Bonferroni法进行两两检验,其中24h和48h之间的差异有统计学意义,48h的灵敏度显著大于24h;24h和72h之间的差异有统计学意义,72h时的灵敏度显著大于24h;48h和72h之间的差异无统计学意义。结论 48h和72h不同观察时间的PPD皮试结果在健康志愿者和结核病患者中具有相同的诊断效果,因此PPD皮肤试验的最佳观察时间可以扩大为48～72h。 展开更多

关键词 结核病 皮肤试验 最佳观察时间

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重组结核杆菌融合蛋白(EC)的稳定性与有效性研究 被引量：6

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作者 杨蕾 韦芬 +6 位作者 张凯 仇晶晶 汪莹莹 都伟欣 卢锦标 陶立峰 蒲江 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2020年第8期799-806,共8页

目的考察重组结核杆菌融合蛋白(EC)[该制品名称是国家药典委员会确定的药品中文通用名称,"EC"为重组融合蛋白"结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶6(ESAT-6)和培养滤液蛋白10(CFP-10)"](以下简称"EC")原液的储... 目的考察重组结核杆菌融合蛋白(EC)[该制品名称是国家药典委员会确定的药品中文通用名称,"EC"为重组融合蛋白"结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶6(ESAT-6)和培养滤液蛋白10(CFP-10)"](以下简称"EC")原液的储存稳定性、成品储存及使用的稳定性与有效性。方法(1)原液储存稳定性研究:将3批次EC原液储存于-70℃,观察0~36个月,保存0、3、6、9、12、18、24、36个月时取样进行致敏效应试验、鉴别试验、效价检测,以及等电点、分子量、蛋白质含量、纯度(电泳法)等检测,其中致敏效应试验用豚鼠分为试验组(注射EC原液)与对照组(注射稳定剂),观察注射后动物反应,两组动物反应应无差异;鉴别试验为卡介苗致敏后豚鼠分别皮内注射EC原液和结核菌素纯蛋白衍生物(TB-PPD),观察测量豚鼠皮肤试验检测结果,EC原液皮肤试验应呈阴性反应(硬结或红晕平均直径<5mm),而TB-PPD皮肤试验应呈阳性反应(硬结平均直径≥5mm);效价检测为结核分枝杆菌活菌致敏后6只豚鼠分别皮内注射3个稀释度的EC原液及参考品,观察测量豚鼠皮肤试验检测结果,不同稀释度的EC原液与参考品皮肤试验局部反应的硬结或红晕平均直径总和的比值(以下简称"平均直径总和比值")应为1.0±0.2;等电点应为3.5~5.3,分子量应为(23±2.0)kDa(1kDa的相对分子质量为1000),蛋白质含量应不低于450.0μg/ml,纯度(电泳法)应不低于95.0%。(2)EC成品储存稳定性研究:成品分别储存于37℃和2~8℃,分别观察0~28d和0~36个月,37℃保存0、7、14、21、28d时、2~8℃保存0、3、6、9、12、18、24、36个月时取样进行鉴别试验、效价检测,以及pH值、苯酚含量等检测,其中鉴别试验方法及检测结果判定如"EC原液"。效价检测为结核分枝杆菌活菌致敏后4只豚鼠分别皮内注射EC成品及参考品,观察测量方法及平均直径总和比值判定如"EC原液",pH值应为6.8~7.4,苯酚含量应不高于3.0g/L。(3)EC成品使用稳定性研究:成品开启后分别放置于温度(25±2)℃、湿度(60±5)%和温度(40±2)℃、湿度(75±5)%两种条件考察使用过程的稳定性,观察时间为0~50min,分别于0、10、20、30、40、50min取样进行鉴别试验、效价检测,以及pH值、渗透压摩尔浓度等检测,试验方法和检测结果判定如"EC成品",其中渗透压摩尔浓度应为(280.0±68.0)mOsmol/kg。依据定期取样检测结果是否符合EC质量标准来判断产品稳定性,并为制定EC原液、成品有效期和成品使用时的有效时间提供依据。结果(1)EC原液-70℃观察0~36个月,在各研究时间点,致敏效应试验均表现为试验组与对照组动物反应无差异;鉴别试验结果为EC原液皮肤试验呈阴性,而TB-PPD皮肤试验呈阳性;效价检测结果为不同稀释度的EC原液与参考品皮肤试验的平均直径总和比值为0.9~1.1;等电点为3.7~5.2;分子量为(23.2~24.2)kDa;蛋白质含量为(501.6~616.7)μg/ml,纯度(电泳法)均为100.0%。(2)EC成品稳定性研究:在各研究时间点,鉴别试验结果为EC成品皮肤试验呈阴性,而TB-PPD皮肤试验呈阳性;效价检测结果显示EC成品与参考品皮肤试验的平均直径总和比值为0.9~1.0;pH值为7.1~7.4、苯酚含量为(2.6~2.9)g/L。(3)EC成品使用稳定性研究结果:在各研究时间点,鉴别试验结果均为EC成品皮肤试验呈阴性,而TB-PPD皮肤试验呈阳性;效价检测结果显示EC成品与参考品皮肤试验的平均直径总和比值均为1.0;pH值为7.1~7.2;渗透压摩尔浓度为(302.4~307.4)mOsmol/kg。结论EC原液-70℃储存36个月质量稳定;成品37℃储存28d、2~8℃储存36个月质量稳定;成品在开启后50min内使用,质量稳定。 展开更多

关键词 重组结核杆菌融合蛋白(EC) 药物稳定性 有效性研究 药物评价

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结核病新疫苗的免疫毒理学评价方法研究 被引量：2

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作者 都伟欣 董娜 +5 位作者 陈保文 徐苗 杨蕾 卢锦标 沈小兵 王国治 《中国防痨杂志》 CAS 2012年第3期138-144,共7页

目的建立疫苗评价用豚鼠免疫毒理学评价方法,并应用建立的评价指标对结核病新疫苗(耻垢疫苗)的免疫毒性进行初步评价。方法制备豚鼠过敏模型30只,阴性对照15只。建立豚鼠血清总IgG1抗体检测和外周血嗜碱粒细胞体外刺激培养上清、支气管... 目的建立疫苗评价用豚鼠免疫毒理学评价方法,并应用建立的评价指标对结核病新疫苗(耻垢疫苗)的免疫毒性进行初步评价。方法制备豚鼠过敏模型30只,阴性对照15只。建立豚鼠血清总IgG1抗体检测和外周血嗜碱粒细胞体外刺激培养上清、支气管肺泡灌洗液上清,以及腹腔灌洗液中肥大细胞体外刺激培养上清中的过敏性介质(组胺和白三烯)含量的检测方法。将豚鼠分成3组,分别为过敏模型组、耻垢疫苗组和阴性对照组,每组6只,应用已建立的以上几种评价指标初步进行了结核病新疫苗(耻垢疫苗)的免疫毒性评价。结果以6μg/ml羊抗豚鼠IgG1抗体包被,待测血清稀释1∶105,以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗豚鼠IgG1抗体稀释1∶20 000的实验条件为豚鼠血清总IgG1抗体的最佳检测方法。外周血嗜碱粒细胞体外刺激培养上清中,豚鼠过敏模型组和对照组中组胺含量分别为(99.37±15.34)nmol/L和(29.94±5.86)nmol/L;白三烯含量分别为(13.09±3.87)pg/ml和(2.22±0.53)pg/ml。支气管肺泡灌洗液上清组胺含量分别为(73.42±18.60)nmol/L和(31.00±12.09)nmol/L,白三烯含量分别为(123.20±16.57)pg/ml和(39.05±16.94)pg/ml。腹腔灌洗液中肥大细胞体外刺激培养上清中组胺含量分别为(39.59±12.94)nmol/L和(14.35±5.85)nmol/L,白三烯含量分别为(6.79±2.58)pg/ml和(3.09±1.18)pg/ml。以上3种不同组织来源的样本中,过敏模型组的组胺和白三烯含量与对照组相比差异均有统计学意义(组胺:t=12.60,t=5.41,t=5.20,P<0.05;白三烯:t=8.46,t=9.15,t=3.85,P<0.05)。应用以上方法评价结核病新疫苗未见免疫学毒理学异常反应。结论实验初步建立了免疫毒理学评价方法,以该方法评价耻垢疫苗未见免疫毒理学异常反应。 展开更多

关键词 结核菌苗 毒理学 超敏反应 速发型 分枝杆菌 耻垢 评价研究

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