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水牛髓样分化因子88融合蛋白真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达 被引量：1
1
作者 匡文华 张晓茹 +7 位作者 成鹰 杜丽 雷明 焦寒伟 张冬琳 郝永昌 祁超 王凤阳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第4期50-54,共5页
将水牛髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)cDNA全长定向克隆至pEGFP-C1真核表达载体,通过酶切和测序鉴定正确后,经脂质体介导将重组质粒转染至HEK293细胞,应用荧光显微镜、流氏细胞术和Westernblotting检测MyD88... 将水牛髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)cDNA全长定向克隆至pEGFP-C1真核表达载体,通过酶切和测序鉴定正确后,经脂质体介导将重组质粒转染至HEK293细胞,应用荧光显微镜、流氏细胞术和Westernblotting检测MyD88蛋白的表达。结果表明,酶切及测序结果证实重组质粒含有MyD88全长CDS序列,融合蛋白读码正确;荧光显微镜、流式细胞术和Western blotting检测证实,水牛EGFP-MyD88融合蛋白真核表达载体能够在HEK293细胞表达。本研究成功构建了pEGFP-C1-MyD88真核表达载体,并使其在HEK293细胞中获得表达,为进一步研究该基因的生物学功能奠定基础。 展开更多
关键词 水牛 髓样分化因子88 EGFP 融合蛋白 真核表达
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水牛TLR4 cDNA全长的克隆及其生物信息学分析
2
作者 匡文华 张晓茹 +8 位作者 成鹰 杜丽 张冬琳 郝永昌 雷明 焦寒伟 刘涛 祁超 王凤阳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第7期108-114,共7页
本研究利用RT-PCR方法分段克隆水牛TLR4 cDNA后拼接成全长,并克隆于pMD20-T载体中,同时运用生物信息学软件对其核苷酸序列及编码蛋白质的结构进行分析和预测。结果表明,克隆的TLR4 cDNA ORF全长2526 bp,共编码841个氨基酸,N端具有由25... 本研究利用RT-PCR方法分段克隆水牛TLR4 cDNA后拼接成全长,并克隆于pMD20-T载体中,同时运用生物信息学软件对其核苷酸序列及编码蛋白质的结构进行分析和预测。结果表明,克隆的TLR4 cDNA ORF全长2526 bp,共编码841个氨基酸,N端具有由25个氨基酸组成的信号肽,该蛋白预测的分子质量为95.98 ku,等电点为6.37;水牛TLR4与GenBank中登录的水牛TLR4(DQ857349)核苷酸序列同源性达99.01%,与黄牛、绵羊、野猪、马、人和黑猩猩的同源性超过80%,与小鼠和狗的同源性次之,分别为72.17%和61.30%,与鸡的最低,仅为53.94%;该蛋白是由胞外区(1-634位氨基酸)、跨膜区(635-657位氨基酸)和胞内区(658-841位氨基酸)3部分构成的跨膜蛋白,胞外区含有12个LRR串联重复结构域、胞内区具有TIR结构域。本试验成功克隆了水牛TLR4 cDNA全长,并获得了核苷酸及其蛋白质的生物信息学分析数据,为进一步研究其功能奠定了基础。 展开更多
关键词 水牛 TLR4 CDNA 克隆 生物信息学分析
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Mg(OH)2晶须的制备 被引量：9
3
作者 吴健松 肖应凯 +3 位作者 张丽 匡文华 梁海群 吴康娣 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期529-533,共5页
以MgCl2为原料,NaOH为沉淀剂,研究了它们的浓度配比、反应温度、晶化温度、晶化时间、晶化方式等因素对形成Mg(OH)2晶须的影响。结果表明,当n(MgCl2)∶n(NaOH)=1.20∶1.92、混合温度Tm=86℃、晶化温度Tc=100℃、晶化时间Time=5.5h时,可... 以MgCl2为原料,NaOH为沉淀剂,研究了它们的浓度配比、反应温度、晶化温度、晶化时间、晶化方式等因素对形成Mg(OH)2晶须的影响。结果表明,当n(MgCl2)∶n(NaOH)=1.20∶1.92、混合温度Tm=86℃、晶化温度Tc=100℃、晶化时间Time=5.5h时,可以得到发育不完全的初级Mg(OH)2晶须。若改用水热法晶化,可得到发育较好的Mg(OH)2晶须。在此基础上,若在NaOH溶液中加入一定量的有机溶剂OR(NaOH浓度不变)时,即可得到发育更完善的Mg(OH)2晶须。电子显微镜照片显示,粒子呈晶须形状,粒度分布均匀,分散性好,晶形好,纯度高。并对晶须生长机理进行了初步分析。 展开更多
关键词 MG(OH)2 晶须 水热法 功能材料
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水牛MyD88 cDNA的克隆与原核表达 被引量：6
4
作者 张晓茹 匡文华 +8 位作者 成鹰 杜丽 张冬琳 郝永昌 雷明 焦寒伟 刘涛 祁超 王凤阳 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期190-196,共7页
采用RT-PCR方法从水牛外周血白细胞总RNA中扩增出髓样分化因子88(mydoid differentiation factor88,MyD88)cDNA序列,PCR产物分离纯化后,与pMD20-T载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后测序,并进行生物信息学分析;构建pET28a-MyD88表达载... 采用RT-PCR方法从水牛外周血白细胞总RNA中扩增出髓样分化因子88(mydoid differentiation factor88,MyD88)cDNA序列,PCR产物分离纯化后,与pMD20-T载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后测序,并进行生物信息学分析;构建pET28a-MyD88表达载体,并将其转化至E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、镍柱亲和层析纯化和Western blotting分析。结果显示,克隆到的水牛MyD88cDNA全长为1189bp,含有1个891bp的开放阅读框,编码296个氨基酸,理论等电点为5.65。经IPTG诱导表达后,得到一个带His·Tag的约39kD的重组融合蛋白。用抗His单克隆抗体进行Western blotting,得到1条约39kD特异性抗体结合带,表明水牛MyD88原核表达载体成功构建并表达。本研究为进一步开展水牛MyD88的结构功能分析奠定了基础。 展开更多
关键词 MYD88 水牛 基因克隆 原核表达
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水牛TLR2cDNA的克隆与生物信息学分析 被引量：4
5
作者 张晓茹 匡文华 +8 位作者 成鹰 杜丽 张冬琳 郝永昌 雷明 刘涛 焦寒伟 王凤阳 祁超 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第11期35-41,共7页
本研究通过RT-PCR分段扩增得到水牛Toll样受体2(TLR2)cDNA序列,并利用亚克隆重叠区进行全长序列拼接。将拼接产物与pMD20-T载体连接,重组质粒经PCR酶切鉴定后测序,并进行生物信息学分析。结果表明,克隆得到的序列全长2 455bp,含有一个... 本研究通过RT-PCR分段扩增得到水牛Toll样受体2(TLR2)cDNA序列,并利用亚克隆重叠区进行全长序列拼接。将拼接产物与pMD20-T载体连接,重组质粒经PCR酶切鉴定后测序,并进行生物信息学分析。结果表明,克隆得到的序列全长2 455bp,含有一个大小为2 355bp的开放阅读框,共编码784个氨基酸,分子质量为90.2ku,理论等电点为6.92;TLR2ORF序列与GenBank上登载的水牛核苷酸序列同源性为99.53%,与黄牛、马、人、黑猩猩和狗的核苷酸序列同源性分别为97.88%、84.94%、83.12%、82.95%和82.74%,具有很高的相似性;该蛋白是一个跨膜蛋白,存在LRR、LRR-TYP、LRRCT及TIR结构域,与Toll样受体家族成员的共同结构相一致。水牛TLR2基因的成功克隆及序列分析和结构预测为进一步研究其生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 TOLL样受体2 水牛 分子克隆 生物信息学分析
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阻燃型氢氧化镁研制进展 被引量：7
6
作者 吴健松 匡文华 梁海群 《盐业与化工》 CAS 北大核心 2008年第2期35-38,共4页
综述了近年来氢氧化镁制备技术、应用状况、市场需求、研究热点及新动态。
关键词 阻燃剂 氢氧化镁 水热法 超重力技术法 纳米材料 氢氧化镁晶须
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水牛MD-2 cDNA基因的克隆与原核表达 被引量：1
7
作者 焦寒伟 杜丽 +6 位作者 雷明 张冬琳 郝永昌 张晓茹 匡文华 成鹰 王凤阳 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第9期9-13,共5页
为探讨水牛抵抗革兰阴性菌感染的免疫机制,克隆、表达了水牛髓样分化蛋白-2(bMD-2)基因,并用Western blot进行鉴定。采用RT-PCR方法从水牛外周血白细胞中扩增bMD-2基因,构建pET28a-bMD-2表达载体,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,IPTG诱导... 为探讨水牛抵抗革兰阴性菌感染的免疫机制,克隆、表达了水牛髓样分化蛋白-2(bMD-2)基因,并用Western blot进行鉴定。采用RT-PCR方法从水牛外周血白细胞中扩增bMD-2基因,构建pET28a-bMD-2表达载体,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果显示,bMD-2基因含有一个483 bp的开放阅读框,编码161个氨基酸;37℃条件下,经1 mmol/LIPTG诱导表达6 h后,His-bMD-2在E.coliBL21中表达量最高,并以包涵体的形式存在,融合蛋白的分子质量约为25 ku。结果表明水牛MD-2原核表达载体成功构建并表达,为继续深入对水牛MD-2基因功能的研究提供参考。 展开更多
关键词 水牛 MD-2 克隆 原核表达
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海南坡鹿MD2 cDNA的克隆及其生物信息学分析
8
作者 杜丽 谢少林 +8 位作者 成鹰 张晓茹 匡文华 焦寒伟 张冬琳 郝永昌 雷明 刘涛 王凤阳 《热带生物学报》 2011年第1期1-5,共5页
以海南坡鹿外周血白细胞总RNA为模板,利用RT-PCR技术,获得海南坡鹿MD2全长cDNA,并对其进行较系统的生物信息学分析,内容包括序列特征分析、同源性分析、编码蛋白质理化性质及结构预测。结果表明:海南坡鹿MD2的CDS序列长度为486 bp,编码... 以海南坡鹿外周血白细胞总RNA为模板,利用RT-PCR技术,获得海南坡鹿MD2全长cDNA,并对其进行较系统的生物信息学分析,内容包括序列特征分析、同源性分析、编码蛋白质理化性质及结构预测。结果表明:海南坡鹿MD2的CDS序列长度为486 bp,编码160个氨基酸,与黄牛、人、欧洲兔、褐家鼠的核苷酸序列同源性分别为98.55%,77.43%,78.47%和74.74%。该基因编码的蛋白质相对分子质量约为19×103,理论等电点为8.18。对编码蛋白的分子结构预测发现,该蛋白为非跨膜蛋白,其二级结构中,α-螺旋占16.25%,β-折叠片占38.13%,无规则卷曲占45.63%。 展开更多
关键词 海南坡鹿 MD2 克隆 生物信息学分析
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水牛Cdc42 cDNA的克隆与生物信息学分析
9
作者 张晓茹 匡文华 +7 位作者 成鹰 杜丽 雷明 焦寒伟 张冬琳 郝永昌 祁超 王凤阳 《热带生物学报》 2011年第4期349-354,共6页
通过RT-PCR扩增得到水牛细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)cDNA序列,将扩增产物与pMD20-T载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后测序并进行生物信息学分析。结果表明:克隆得到的序列全长626bp,含有1个大小为576bp的开放阅读框,共编码191个氨基酸... 通过RT-PCR扩增得到水牛细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)cDNA序列,将扩增产物与pMD20-T载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后测序并进行生物信息学分析。结果表明:克隆得到的序列全长626bp,含有1个大小为576bp的开放阅读框,共编码191个氨基酸,相对分子质量为21.3×103,理论等电点为6.16;Cdc42ORF序列与Genbank上登载的黄牛、狗、小鼠和人的核苷酸序列同源性分别为99.65%、96.70%、94.97%和94.10%,具有很高的相似性;该蛋白为非跨膜蛋白,存在1个RHO结构域。 展开更多
关键词 CDC42 水牛 基因克隆 生物信息学分析
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女警肖金晶专注人像重构 以笔为刃 让“恶”无处遁形
10
作者 肖月 匡文华 +1 位作者 许魏(摄影) 巍史伟(摄影) 《武汉宣传》 2022年第6期50-53,共4页
近日,探案悬疑剧《猎罪图鉴》火热播出,将警察队伍中的“画像师”推上了热搜风口。剧中,男主仅凭一张嫌疑人戴着口罩的模糊人影,就画出其五官全貌,并将其抓获归案。尝鼎一脔,窥豹一斑,在武汉市公安局就有这样一名“画像师”--专注人像... 近日,探案悬疑剧《猎罪图鉴》火热播出,将警察队伍中的“画像师”推上了热搜风口。剧中,男主仅凭一张嫌疑人戴着口罩的模糊人影,就画出其五官全貌,并将其抓获归案。尝鼎一脔,窥豹一斑,在武汉市公安局就有这样一名“画像师”--专注人像重构的女警肖金晶。她通过捕捉嫌疑人的面部特征,协助队伍全力破案。在“人民公安为人民”的庄严承诺下,她以画笔为利刃,笔笔精准出鞘,亮正义之剑,让“恶”无处遁形。 展开更多
关键词 武汉市公安局 面部特征 女警 无处遁形 警察队伍 人民公安为人民 嫌疑人 重构
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