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酶法合成L-4-甲砜基苯丙氨酸 被引量：4
1
作者 刘均忠 熊吉滨 +2 位作者 赵根海 刘茜 焦庆才 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2010年第11期2234-2238,共5页
以4-甲砜基苯丙酮酸和L-天冬氨酸为底物,利用重组大肠杆菌DM204(pGEX-KG-aspC/BL21)表达的天冬氨酸转氨酶酶法转化得到了L-4-甲砜基苯丙氨酸,优化得到的酶法最佳转化条件为:转化温度37℃,反应体系pH=8,底物4-甲砜基苯丙酮酸质量分数8%,... 以4-甲砜基苯丙酮酸和L-天冬氨酸为底物,利用重组大肠杆菌DM204(pGEX-KG-aspC/BL21)表达的天冬氨酸转氨酶酶法转化得到了L-4-甲砜基苯丙氨酸,优化得到的酶法最佳转化条件为:转化温度37℃,反应体系pH=8,底物4-甲砜基苯丙酮酸质量分数8%,质量分数0.6%的吐温80和10-4mol/L Mg2+对酶活有促进作用.在最佳工艺条件下经过12 h酶促反应,4-甲砜基苯丙酮酸摩尔转化率达95%.本研究利用化学生物法制备了L-4-甲砜基苯丙氨酸,为制备其它天然氨基酸衍生物提供了新思路. 展开更多
关键词 基因工程 天冬氨酸转氨酶 酶法合成 氨基酸衍生物
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固定化细胞酶法拆分DL-精氨酸 被引量：2
2
作者 刘均忠 蒋丽丽 +2 位作者 沈俞 刘茜 焦庆才 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第1期33-36,共4页
以DL-精氨酸为原料,用固定化细胞酶法拆分DL-精氨酸,并对拆分条件进行了研究。结果表明:最适反应温度55℃,最适pH=6.0,c(DL-精氨酸)=0.3 mol/L,ρ(菌体)=30 g/L,拆分反应10 h,拆分率达98%以上。连续反应10批次,固定化细胞仍保留最高酶... 以DL-精氨酸为原料,用固定化细胞酶法拆分DL-精氨酸,并对拆分条件进行了研究。结果表明:最适反应温度55℃,最适pH=6.0,c(DL-精氨酸)=0.3 mol/L,ρ(菌体)=30 g/L,拆分反应10 h,拆分率达98%以上。连续反应10批次,固定化细胞仍保留最高酶活力的75%。产物经分离纯化,D-精氨酸收率达84.0%,[α]2D5=-27.4°〔ρ(D-精氨酸)=20 g/L,5 mol/L盐酸〕。 展开更多
关键词 DL-精氨酸 精氨酸脱亚胺酶 粪链球菌 固定化细胞 光学拆分 生物工程
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响应面法优化海洋细菌MP-2酯酶发酵条件 被引量：24
3
作者 平芮巾 孙谧 +3 位作者 刘均忠 王跃军 郝建华 张胜军 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期548-552,共5页
采用响应面法(Response surface methodology)对海洋细菌MP-2酯酶的发酵条件进行了优化.首先采用了Plackett-Burman方法对影响酯酶发酵的因素进行评价,筛选出了3个显著因素为豆饼粉、花生粕和种龄,并利用DesignExpert7.0.3软件完成RSM... 采用响应面法(Response surface methodology)对海洋细菌MP-2酯酶的发酵条件进行了优化.首先采用了Plackett-Burman方法对影响酯酶发酵的因素进行评价,筛选出了3个显著因素为豆饼粉、花生粕和种龄,并利用DesignExpert7.0.3软件完成RSM法对显著性因素的进一步优化从而确定最佳条件.当花生粕0·9%;豆饼粉2·29%;接种量5·98%时,此时预测的最大酯酶活力为334·46U/mL.在最佳发酵条件下,优化后该酯酶活力由258·8U/mL提高到318·2U/mL.实际酶活力达到理论预测值的95%,十分接近. 展开更多
关键词 海洋 地衣芽孢杆菌 酯酶 发酵 PLACKETT-BURMAN RSM Design EXPERT
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抗菌性海藻酸钠涂膜在罗非鱼片保鲜中的应用 被引量：24
4
作者 张杰 王跃军 +3 位作者 刘均忠 郑媛 王伟 孙谧 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2010年第2期102-108,共7页
采用测定涂膜抑菌性能、缓释效果来探讨抗菌性海藻酸钠涂膜的抑菌机理并将其应用在罗非鱼片的涂膜保鲜中。实验结果表明,抗菌膜是一种具有缓释效果的保鲜膜,对大肠杆菌Esche-richia coli、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、枯草芽... 采用测定涂膜抑菌性能、缓释效果来探讨抗菌性海藻酸钠涂膜的抑菌机理并将其应用在罗非鱼片的涂膜保鲜中。实验结果表明,抗菌膜是一种具有缓释效果的保鲜膜,对大肠杆菌Esche-richia coli、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis、腐败希瓦氏菌Shewanella putrefaciens及鱼片表面其他杂菌均有较好的抑制效果,保鲜剂在40h内可从涂膜中完全释放;与未经涂膜处理的对照组相比,抗菌膜可以明显控制鱼片细菌总数的增长、维持较低的挥发性盐基氮值和改善鱼片的感官质量,综合考虑鲜度指标并本着以感官评分为基础的原则,抗菌涂膜处理可以将罗非鱼片的保鲜期延长约5.5d。 展开更多
关键词 海藻酸钠涂膜 抗菌性 缓释 罗非鱼片 保鲜
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海洋侧孢短芽孢杆菌Lh-1抗菌活性物质的分离及特性研究 被引量：22
5
作者 任召珍 郑媛 +3 位作者 孙谧 刘均忠 王跃军 郝建华 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期997-1001,共5页
采用超滤、DEAE-Sephadex A25和CM-Sepharose FF离子交换层析及HPLC反相层析等步骤得到了海洋侧孢短芽孢杆菌（Brevibacillus laterosporus）Lh-1的抗菌活性物质，命名为R-1。HPLC纯化出的抗菌物质经质谱测定其分子量为1608．023Da，BIO... 采用超滤、DEAE-Sephadex A25和CM-Sepharose FF离子交换层析及HPLC反相层析等步骤得到了海洋侧孢短芽孢杆菌（Brevibacillus laterosporus）Lh-1的抗菌活性物质，命名为R-1。HPLC纯化出的抗菌物质经质谱测定其分子量为1608．023Da，BIO．RAD等电聚焦测得其pI为8．55，氨基酸分析表明该物质由Leu、Tyr、val、Ile、Lys、Gly、Met、Ser、Ala9种氨基酸组成。该抗菌物质具有极强的耐热、耐酸碱特性，在pH 11．0～12．0条件下，121℃处理1h，其活力保持在75％以上。经3种蛋白酶（碱性蛋白酶、胰酶、胃蛋白酶）处理后，活性保持在80％以上。茚三酮反应阳性。推测R-1可能是低分子量的脂肽。抑菌试验表明对食品腐败菌、致病性革兰氏阴性、阳性菌及少数真菌均有抑菌活性。 展开更多
关键词 海洋侧孢短芽孢杆菌Lh-1 抗菌活性物质 分离纯化 性质
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微生物扩增子高通量测序技术在水产品加工与贮藏中的应用 被引量：13
6
作者 王伟 冷凯良 +2 位作者 刘均忠 郝建华 孙谧 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期263-268,共6页
简介了微生物扩增子高通量测序技术,简述该技术在水产品加工与贮藏研究中的应用现状。在发酵水产品、水产品低温加工和保鲜防腐等方向,众多研究以高通量方法测定细菌和古菌的16S rRNA基因片段,准确获得水产品中微生物的种类和数量信息... 简介了微生物扩增子高通量测序技术,简述该技术在水产品加工与贮藏研究中的应用现状。在发酵水产品、水产品低温加工和保鲜防腐等方向,众多研究以高通量方法测定细菌和古菌的16S rRNA基因片段,准确获得水产品中微生物的种类和数量信息。微生物扩增子高通量测序技术优于传统的可培养法,也优于许多非培养分析技术。同时还指出了该技术的存在问题及对策,并探讨了该技术的发展方向和应用前景。 展开更多
关键词 扩增子高通量测序 16S RRNA基因 水产品加工与贮藏 微生物检测
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海洋细菌S-12-86的产溶菌酶条件 被引量：12
7
作者 张琇 王跃军 +2 位作者 孙谧 王清印 刘均忠 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期425-429,共5页
从中国东海海域底泥中筛选获得一株产溶菌酶的海洋细菌S-12-86,采用摇瓶发酵的方式,分别从培养基组分与发酵条件两个方面对海洋细菌S-12-86产酶的影响进行研究。结果表明,菌株S-12-86能够利用麦芽糖、淀粉、甘油和葡萄糖作为碳源,不能... 从中国东海海域底泥中筛选获得一株产溶菌酶的海洋细菌S-12-86,采用摇瓶发酵的方式,分别从培养基组分与发酵条件两个方面对海洋细菌S-12-86产酶的影响进行研究。结果表明,菌株S-12-86能够利用麦芽糖、淀粉、甘油和葡萄糖作为碳源,不能利用蔗糖与甘露醇;能够利用牛肉膏、酵母膏、蛋白胨和硫酸铵作为氮源,其中牛肉膏效果最佳,而硝酸钾、氯化铵和尿素几乎不能被利用;Zn2+、Mn2+、Cu2+对菌株S-12-86的生长和产酶均有抑制作用;Fe2+对菌体生长无明显影响,但明显抑制菌体产酶;Na+、K+对菌体的生长和产酶无明显影响;Ca2+对菌体生长有促进作用;Mg2+对菌体生长和产酶均有促进作用。菌株S-12-86最适发酵条件为:培养温度30℃、接种体积比4.0%、装液量体积比10.0%、产酶高峰在发酵开始后24 h。与白色链霉菌G(Streptomyces albusG)、灰色链霉菌P-51(S.griseusP-51)、枯草芽孢杆菌77(Bacillus subtilis77)等产溶菌酶微生物的产酶条件相比较,菌株S-12-86具有易培养、产酶量较高、生产成本较低等优点。因此,菌株S-12-86有较大的生产开发潜力。 展开更多
关键词 细菌S-12—86 溶菌酶 发酵
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水/有机溶剂双相体系中色氨酸合成酶酶法合成L-色氨酸 被引量：6
8
作者 徐礼生 刘均忠 +4 位作者 王治元 张宏娟 刘伟 刘茜 焦庆才 《催化学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1405-1410,共6页
在水/有机溶剂双相体系中,利用重组大肠杆菌DM206[pET28a-trpBA/BL21(DE3)]色氨酸合成酶催化L-丝氨酸和吲哚合成了L-色氨酸.考察了有机溶剂、有机相乙酸乙酯体积分数、反应温度、水相pH、底物L-丝氨酸与吲哚摩尔比、底物L-丝氨酸浓度、... 在水/有机溶剂双相体系中,利用重组大肠杆菌DM206[pET28a-trpBA/BL21(DE3)]色氨酸合成酶催化L-丝氨酸和吲哚合成了L-色氨酸.考察了有机溶剂、有机相乙酸乙酯体积分数、反应温度、水相pH、底物L-丝氨酸与吲哚摩尔比、底物L-丝氨酸浓度、表面活性剂和酶添加量对色氨酸合成酶酶活的影响.结果表明,酶法最佳转化条件为:有机相溶剂为乙酸乙酯,乙酸乙酯的体积分数为2.5%,反应温度为35oC,水相pH值为8,底物L-丝氨酸与吲哚的摩尔比为1:1.2,底物L-丝氨酸浓度为100mmol/L,吐温80的质量分数为0.4%,反应介质中酶的添加量为20g/L.在此条件下酶促反应2.5h,L-丝氨酸转化率可达95%. 展开更多
关键词 色氨酸合成酶 L-色氨酸 L-丝氨酸 吲哚 乙酸乙酯 水
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重组酪氨酸酚裂解酶全细胞催化合成L-酪氨酸 被引量：11
9
作者 常俊俊 刘均忠 +1 位作者 刘茜 焦庆才 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1112-1116,1137,共6页
利用基因工程手段重组表达了弗氏柠檬酸杆菌来源的酪氨酸酚裂解酶(TPL),以丙酮酸和L-丝氨酸为底物全细胞催化合成L-酪氨酸,考察了pH、温度、表面活性剂、金属离子、铵盐种类和氯化铵浓度等因素对L-酪氨酸合成的影响,并比较了两种底物合... 利用基因工程手段重组表达了弗氏柠檬酸杆菌来源的酪氨酸酚裂解酶(TPL),以丙酮酸和L-丝氨酸为底物全细胞催化合成L-酪氨酸,考察了pH、温度、表面活性剂、金属离子、铵盐种类和氯化铵浓度等因素对L-酪氨酸合成的影响,并比较了两种底物合成L-酪氨酸的转化率。结果表明,TPL的最适反应条件是45℃,pH=8.0,4mmol/L PLP,氯化铵浓度350 mmol/L。1 mmol/L triton-x 100对TPL酶活有促进作用,金属离子对TPL酶活都有明显的抑制作用。0.1 mol/L丙酮酸的转化率约是L-丝氨酸的1.8倍。 展开更多
关键词 酪氨酸酚裂解酶 L-酪氨酸 丙酮酸 L-丝氨酸 生物工程
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乙酰鸟氨酸脱乙酰酶固定化细胞拆分D,L-缬氨酸 被引量：7
10
作者 张飞 熊吉滨 +2 位作者 刘均忠 刘鹏刚 焦庆才 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1577-1580,共4页
报道了一种利用具有乙酰鸟氨酸脱乙酰酶活性的固定化细胞拆分D,L-缬氨酸的新方法. 该酶促反应最适条件： pH=6, 反应温度50 ℃, 底物N-乙酰-D,L-缬氨酸浓度200 mmol/L, 固定化细胞用量0.2 g/mL（或100 U/mL）. 0.1 mmol/L CoCl2条件对... 报道了一种利用具有乙酰鸟氨酸脱乙酰酶活性的固定化细胞拆分D,L-缬氨酸的新方法. 该酶促反应最适条件： pH=6, 反应温度50 ℃, 底物N-乙酰-D,L-缬氨酸浓度200 mmol/L, 固定化细胞用量0.2 g/mL（或100 U/mL）. 0.1 mmol/L CoCl2条件对该酶促反应有显著的激活作用. 在以上条件下反应2～3 h, 测得产物L-缬氨酸浓度95 mmol/L. 该固定化细胞连续10次使用, 平均转化率为90.8%（以N-乙酰-L-缬氨酸计）, 显示出了良好的工业化应用前景. 展开更多
关键词 乙酰鸟氨酸脱乙酰酶 拆分 固定化细胞 D L-缬氨酸
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L-谷氨酰肼为底物酶法制备茶氨酸 被引量：6
11
作者 张飞 熊吉滨 +2 位作者 刘均忠 赵根海 焦庆才 《精细化工》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期130-132,141,共4页
采用一种廉价的底物L-谷氨酰肼代替L-谷氨酰胺,成功地合成了茶氨酸,并且对该酶促反应的条件进行了初步优化。结果表明,以L-谷氨酰肼为底物时,γ-谷氨酰转肽酶(GGT)活性约是以L-谷氨酰胺为底物时的78.3%。该酶促反应的最适条件为:pH=10,... 采用一种廉价的底物L-谷氨酰肼代替L-谷氨酰胺,成功地合成了茶氨酸,并且对该酶促反应的条件进行了初步优化。结果表明,以L-谷氨酰肼为底物时,γ-谷氨酰转肽酶(GGT)活性约是以L-谷氨酰胺为底物时的78.3%。该酶促反应的最适条件为:pH=10,反应温度40℃,n(L-谷氨酰肼)∶n(乙胺)=1∶10,L-谷氨酰肼初始浓度0.3mol/L。利用以上条件进行了茶氨酸的小量制备,投料L-谷氨酰肼50g,乙胺140g,反应40h,L-谷氨酰肼的摩尔转化率达84.1%,经离子交换树脂分离产物,得到31.8g高纯度茶氨酸。该结果显示良好应用前景。 展开更多
关键词 L-谷氨酰肼 茶氨酸 Γ-谷氨酰转肽酶 酶法合成 生物工程
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用固定化L-赖氨酸脱羧酶细胞制备1,5-戊二胺 被引量：5
12
作者 蒋丽丽 刘均忠 +2 位作者 沈俞 刘茜 焦庆才 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1080-1084,共5页
研究了4种固定化蜂房哈夫尼菌(H.alveiAS1.1009)菌体细胞的材料和方法,包括海藻酸钙包埋法、半透膜透析袋法、海藻酸钙-明胶交联包埋法和明胶包埋法。其中海藻酸钙包埋法稳定性最好,该方法最优转化条件为:在ρ(海藻酸钠)=30g/L的水溶液... 研究了4种固定化蜂房哈夫尼菌(H.alveiAS1.1009)菌体细胞的材料和方法,包括海藻酸钙包埋法、半透膜透析袋法、海藻酸钙-明胶交联包埋法和明胶包埋法。其中海藻酸钙包埋法稳定性最好,该方法最优转化条件为:在ρ(海藻酸钠)=30g/L的水溶液中,最适菌体质量浓度为ρ(菌体)=30.8g/L,100mL转化液中海藻酸钙球体体积为30mL,转化最适温度为37℃,最适pH=5.0。用该方法转化测得比酶活可达1028.9U。重复性佳:第一批固定化细胞酶活可达游离菌体的98.62%,第四批可达第一批酶活的38.68%。 展开更多
关键词 海藻酸钙 L-赖氨酸脱羧酶 1 5-戊二胺 固定化 生物工程
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海洋微生物溶菌酶的发酵优化与中试生产 被引量：6
13
作者 张琇 孙谧 +2 位作者 王清印 王跃军 刘均忠 《化学工程》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第7期45-48,共4页
以海洋细菌S-12-86为试验菌株,采用摇瓶发酵优化的方式,研究培养基组分(碳源、氮源、碳源与氮源的比例、金属离子)与发酵条件(培养温度、接种体积分数、装液体积分数、起始pH值、产酶周期)对海洋微生物溶菌酶产量的影响,并进行中试放大... 以海洋细菌S-12-86为试验菌株,采用摇瓶发酵优化的方式,研究培养基组分(碳源、氮源、碳源与氮源的比例、金属离子)与发酵条件(培养温度、接种体积分数、装液体积分数、起始pH值、产酶周期)对海洋微生物溶菌酶产量的影响,并进行中试放大试验。结果表明:该菌产酶最佳培养基组分为:葡萄糖10 g/L,蛋白胨5 g/L,MgSO45 g/L,CaCl22 g/L;最适发酵培养温度为30℃,接种体积分数为4.0%,装液体积分数为10.0%,起始pH值为8.0,发酵周期24 h。海洋细菌S-12-86发酵优化后的产酶量(25636.8 U/mL)较优化前的产酶量(14454.4 U/mL)提高了75.4%。海洋微生物溶菌酶中试发酵的产酶量达26697.87 U/mL。说明摇瓶发酵优化条件可以应用于海洋微生物溶菌酶中试生产上。 展开更多
关键词 菌株S-12-86 海洋微生物溶菌酶 发酵优化
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固定化细胞酶法拆分N-乙酰-D,L-3-甲氧基丙氨酸 被引量：6
14
作者 熊吉滨 刘均忠 +1 位作者 刘茜 焦庆才 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1560-1563,共4页
利用氨基酰化酶固定化细胞酶法拆分了N-乙酰-D,L-3-甲氧基丙氨酸.考察了温度、pH值、底物浓度、金属离子和拆分时间对酶促反应的影响.确定了氨基酰化酶固定化细胞手性拆分N-乙酰-D,L-3-甲氧基丙氨酸的最佳工艺条件为pH=7.0、反应温度50... 利用氨基酰化酶固定化细胞酶法拆分了N-乙酰-D,L-3-甲氧基丙氨酸.考察了温度、pH值、底物浓度、金属离子和拆分时间对酶促反应的影响.确定了氨基酰化酶固定化细胞手性拆分N-乙酰-D,L-3-甲氧基丙氨酸的最佳工艺条件为pH=7.0、反应温度50℃及底物浓度500mmol/L.10-4mol/L的Co2+和Mg2+对氨基酰化酶有显著激活作用,Cu2+和Zn2+对酶促反应有明显抑制作用.在最佳条件下,氨基酰化酶固定化细胞对N-乙酰-L-3-甲氧基丙氨酸的摩尔转化率达96%. 展开更多
关键词 氨基酰化酶 D L-3-甲氧基丙氨酸 固定化细胞 手性拆分
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复合载体固定化大肠杆菌制备γ-氨基丁酸 被引量：4
15
作者 沈俞 刘均忠 +1 位作者 刘茜 焦庆才 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第5期459-462,510,共5页
用卡拉胶与明胶复合载体固定大肠杆菌,优化了固定化细胞的制备条件,并利用该复合载体固定大肠杆菌细胞进行酶法制备γ-氨基丁酸的研究。实验结果表明,最佳工艺条件为:m(卡拉胶):m(明胶)=3:2,ρ(混合胶)=12g/L,ρ(KCl)=60g/L,固定化时间... 用卡拉胶与明胶复合载体固定大肠杆菌,优化了固定化细胞的制备条件,并利用该复合载体固定大肠杆菌细胞进行酶法制备γ-氨基丁酸的研究。实验结果表明,最佳工艺条件为:m(卡拉胶):m(明胶)=3:2,ρ(混合胶)=12g/L,ρ(KCl)=60g/L,固定化时间为3h,ρ(菌体)=80g/L,反应温度为37℃,转化体系pH=4.8,ρ(底物)=40g/L。固定化细胞在最适条件下比酶活高达10740U。包埋1.0g湿菌体的固定化细胞重复使用7次,可把42gL-谷氨酸完全转化为γ-氨基丁酸。 展开更多
关键词 卡拉胶 明胶 复合载体 固定化细胞 Γ-氨基丁酸 生物工程
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生物技术在手性药物合成中的应用进展 被引量：3
16
作者 徐礼生 王治元 +3 位作者 刘均忠 张宏娟 刘茜 焦庆才 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第4期370-373,397,共5页
药物分子的立体化学决定了其生物活性,手性已成为药物研究的一个关键因素,生物技术在手性药物合成中具有重要意义,利用酶催化的相关性质,通过酶拆分外消旋体、酶法不对称合成等方法合成手性药物,采用定向进化技术、酶分子修饰、辅酶再... 药物分子的立体化学决定了其生物活性,手性已成为药物研究的一个关键因素,生物技术在手性药物合成中具有重要意义,利用酶催化的相关性质,通过酶拆分外消旋体、酶法不对称合成等方法合成手性药物,采用定向进化技术、酶分子修饰、辅酶再生等方法对手性药物合成方法进行改进,该文对近些年来生物技术在手性药物合成中的应用情况进行了综述。 展开更多
关键词 手性药物 生物技术 合成 综论
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海洋细菌QD80低温碱性蛋白酶的基因克隆和性质 被引量：3
17
作者 郝建华 孙谧 +1 位作者 王跃军 刘均忠 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期465-470,共6页
对海洋细菌QD80所产低温碱性蛋白酶进行了基因克隆和序列分析,对此酶的性质进行了初步研究.此酶基因开放阅读框架为1377bp,分子量为49.9kD.此序列上游-8bp处为该基因的SD序列,-10区和-35区分别有5′TAGAAT3′和5′TTGACC3′的保守序列.... 对海洋细菌QD80所产低温碱性蛋白酶进行了基因克隆和序列分析,对此酶的性质进行了初步研究.此酶基因开放阅读框架为1377bp,分子量为49.9kD.此序列上游-8bp处为该基因的SD序列,-10区和-35区分别有5′TAGAAT3′和5′TTGACC3′的保守序列.该酶最适pH为9.5,最适反应温度为30℃,在10℃酶活力仍能保持30%以上.该酶对氧化剂H2O2的抗氧化作用明显,浓度达到4gL时酶活仍保留85%.该蛋白酶的低温适应性和抗氧化特性将对其在低温洗涤领域的应用提供广泛的潜在应用价值. 展开更多
关键词 低温碱性蛋白酶 基因克隆 抗氧化性 低温适应性 鉴定
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产海洋细菌MP-2酯酶菌株的鉴定及酯酶理化性质的研究 被引量：3
18
作者 平芮巾 孙谧 +3 位作者 刘均忠 王跃军 郝建华 张胜军 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2009年第2期83-88,共6页
从渤海海泥样品中分离获得1株新型酯酶菌株,经鉴定为地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis。所得的MP-2酯酶的最适作用温度范围50～70℃,在60℃表现出了最高活性,属于耐热酶;最适作用pH为10,属于碱性酶,其pH值作用范围比较窄;具有良好的... 从渤海海泥样品中分离获得1株新型酯酶菌株,经鉴定为地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis。所得的MP-2酯酶的最适作用温度范围50～70℃,在60℃表现出了最高活性,属于耐热酶;最适作用pH为10,属于碱性酶,其pH值作用范围比较窄;具有良好的热稳定性;金属离子Co2+,Li+对酶具有激活作用,Ca2+对酯酶的活力没有显著影响,化学试剂SDS、EDTA及Tween-20对酯酶的抑制效果显著,对常见有机溶剂具有良好的耐受力;该酯酶对碳链长短不同的底物表现出不同的酶活。 展开更多
关键词 海洋地衣芽孢杆菌 酯酶 鉴定 性质
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氨基酰化酶固定化细胞光学拆分DL-丙氨酸 被引量：2
19
作者 刘鹏刚 张飞 +2 位作者 刘均忠 李天童 焦庆才 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第4期345-347,359,共4页
用具有氨基酰化酶基因的大肠杆菌工程菌构建固定化细胞,并对DL-丙氨酸进行酶拆分进行了实验研究。考察了温度、pH、底物浓度、金属离子和时间对酶促反应的影响。确定了氨基酰化酶固定化细胞光学拆分DL-丙氨酸中酶促反应的最佳工艺条件:p... 用具有氨基酰化酶基因的大肠杆菌工程菌构建固定化细胞,并对DL-丙氨酸进行酶拆分进行了实验研究。考察了温度、pH、底物浓度、金属离子和时间对酶促反应的影响。确定了氨基酰化酶固定化细胞光学拆分DL-丙氨酸中酶促反应的最佳工艺条件:pH=7.5,温度50℃,反应时间6h,Co2+离子浓度5×10-4mol/L,在该条件下,D-丙氨酸产率为87.2%,光学纯度为98.0%。 展开更多
关键词 氨基酰化酶 固定化细胞 DL-丙氨酸 L-丙氨酸 D-丙氨酸 拆分 生物工程
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产脂肪酶海洋嗜冷菌的鉴定及酶学性质研究 被引量：2
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作者 郝建华 孙谧 +3 位作者 王跃军 王清印 袁翠 刘均忠 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期748-753,共6页
从东海的深海底泥中筛选出一株产脂肪酶的海洋细菌 EastSeaG5-1415,该菌为革兰氏阴性好氧菌,短杆状,0.9～1.3μm×1.5～3.8μm,无鞭毛,无芽孢,无色素,菌落光滑不透明,过氧化氢酶和氧化酶阳性,甲基红实验阴性,氧化葡萄糖产酸,可耐受... 从东海的深海底泥中筛选出一株产脂肪酶的海洋细菌 EastSeaG5-1415,该菌为革兰氏阴性好氧菌,短杆状,0.9～1.3μm×1.5～3.8μm,无鞭毛,无芽孢,无色素,菌落光滑不透明,过氧化氢酶和氧化酶阳性,甲基红实验阴性,氧化葡萄糖产酸,可耐受10%的 NaCl。此菌最适生长温度为18%,最高生长温度为35℃,在0℃也能生长,是典型的嗜冷菌。菌株脂肪酸种类为 C_(17∶1)(28.2%),C_(18∶1)9_c(49.7%),辅酶 Q-8是其主要的异戊烯醌类,DNA中 G+C 含量为45.2mol%。以16SrRNA 同源性为基础构建了相关种属细菌在内的系统发育树,在系统发育树中,分离菌株 EastSeaG5—1415与 Psychrobacter glacincola 在同一分支,二者的序列相似性为97.6%,DNA 杂交显示与 P.glacincola 最为相近,达到87%。结合形态和生理生化试验,将其鉴定为嗜冷杆菌 P.glacincola。同时对其所产脂肪酶的性质进行了初步研究。该菌所产碱性脂肪酶最适反应温度为35℃,在5℃时仍有较高酶活,酶活达到23%,最适 pH 值为9,属低温碱性脂肪酶。 展开更多
关键词 脂肪酶 低温酶 海洋嗜冷菌
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