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汉坦病毒疫苗株Z10与Z37重组核蛋白NP的表达纯化及其特异结合基因组末端反向重复序列的功能研究 被引量：3
1
作者 刘合宾 刘克洲 +1 位作者 翁景清 朱智勇 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期110-117,共8页
汉坦病毒是引起肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒型肺炎综合征(HPS)的主要病原体。其基因组由三节段的单股负链RNA组成,即S、M与L基因片段。汉坦病毒基因组的一个重要特点是每个基因片段的两个末端都有一段长18个核苷酸的高度保守的反向... 汉坦病毒是引起肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒型肺炎综合征(HPS)的主要病原体。其基因组由三节段的单股负链RNA组成,即S、M与L基因片段。汉坦病毒基因组的一个重要特点是每个基因片段的两个末端都有一段长18个核苷酸的高度保守的反向重复序列,互补可形成双链发夹结构,并且这一特点为不同型病毒所共有。为了研究该基因组末端保守的反向重复序列的功能,首先构建了汉坦病毒中国疫苗株Z10(汉滩型)及Z37(汉城型)的核蛋白原核表达载体,并在大肠杆菌中高效表达。经NI NAT亲和柱和HiPrep16/10DEAE离子交换柱液相色谱(FPLC)二步提纯,获得高纯度的重组核蛋白,并分别以胰蛋白酶消化后,用Westernblotting进行区分和鉴定。以T4DNA激酶同位素标记一对人工合成互补的18个核苷酸反向重复序列,制备双链探针。然后将该探针与纯化的Z10、Z37株的核蛋白NP进行非变性凝胶电泳迁移改变实验(EMSA)后发现,重组的Z10、Z37株的核蛋白NP,在体外均可特异地结合其基因组末端反向重复序列形成的双链探针。该结果表明,汉坦病毒基因组末端的反向重复序列是核蛋白重要结合位点,这对理解汉坦病毒核蛋白功能以及病毒复制过程中病毒粒子的包装机制有重要的意义。 展开更多
关键词 汉坦病毒 疫苗 重组核蛋白 表达 纯化 汉坦病毒型肺炎综合征
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反转录病毒MSCV介导汉坦病毒核蛋白基因在NIH3T3细胞中整合和表达 被引量：1
2
作者 刘合宾 刘克洲 +1 位作者 翁景清 朱智勇 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期298-302,共5页
汉坦病毒是引起肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒型肺炎综合征(HPS)的主要病原体。由S基因编码的核蛋白(NP)主要与机体的细胞免疫有关,并调节病毒的复制及诱导细胞程序性死亡。构建了汉坦病毒Z10株核蛋白cDNA与含有pac基因的反转录病毒... 汉坦病毒是引起肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒型肺炎综合征(HPS)的主要病原体。由S基因编码的核蛋白(NP)主要与机体的细胞免疫有关,并调节病毒的复制及诱导细胞程序性死亡。构建了汉坦病毒Z10株核蛋白cDNA与含有pac基因的反转录病毒鼠干细胞病毒(MSCV)重组体MSCV-FlagNP,通过磷酸钙转录法导入产病毒的包装细胞系BOSC23中,产生完整的重组MSCV-FlagNP病毒。然后以重组病毒感染NIH3T3细胞,利用Puromycin的选择特性(pac基因)对感染细胞进行连续压力筛选,获得了转核蛋白抗性细胞。利用Southernblot和PCR方法分别对核蛋白基因在抗性细胞染色体整合情况及其完整性进行了鉴定。并且用Westernblot在抗性细胞中可检测到核蛋白的表达。进一步以Flag单克隆抗体介导的免疫荧光染色联合共聚焦激光扫描荧光显微镜,分析了内源性Flag融合核蛋白在抗性细胞内分布,发现核蛋白主要分布于胞浆及胞核周围区,并且部分核蛋白可聚集形成胞浆包涵体。转核蛋白基因细胞模型的建立,对进一步研究汉坦病毒核蛋白功能以及病毒复制机制有重要意义。 展开更多
关键词 核蛋白基因 汉坦病毒 胞浆 介导 表达 NIH 3T3细胞 ac基因 反转录病毒 利用
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肾综合征出血热灭活疫苗的纯化 被引量：3
3
作者 朱智勇 翁景清 +8 位作者 李岩金 陆群英 李敏红 姚苹苹 朱函坪 唐汉英 傅桂明 赵芝雅 刘合宾 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2000年第1期25-26,共2页
目的为提高肾综合征出血热（ＨＦＰＳ）疫苗的免疫效果和减少副反应。方法用ＥＬＩＳＡ检测ＨＦＲＳ 病毒抗原的方法，比较疫苗原液通过不同孔径滤膜的浓缩效果；比较离子交换和凝胶过滤的纯化效果。结果用 孔径３０万相对分子质量滤膜... 目的为提高肾综合征出血热（ＨＦＰＳ）疫苗的免疫效果和减少副反应。方法用ＥＬＩＳＡ检测ＨＦＲＳ 病毒抗原的方法，比较疫苗原液通过不同孔径滤膜的浓缩效果；比较离子交换和凝胶过滤的纯化效果。结果用 孔径３０万相对分子质量滤膜浓缩时，过滤液中仍有部分病毒抗原检出，经１０万相对分子质量滤膜过滤后，过滤液 中检测不到病毒抗原；用 Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ＦＦ凝胶柱层析浓缩时，经波长 ２８０ ｎｍ检测到 ３个吸收峰，其中仅在第 １峰中检 测到病毒抗原，收集第１峰，几乎回收全部病毒抗原，去除杂蛋白约９０％左右。结论本纯化方法适合于ＨＦＲＳ疫 苗的规模化生产。 展开更多
关键词 HFRS 灭活疫苗 浓缩 凝胶柱层析 肾综合征出血热
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汉坦病毒中国疫苗株Z37M片段的克隆及序列分析 被引量：7
4
作者 朱函坪 刘合宾 +1 位作者 姚苹苹 朱智勇 《中国病毒学》 CSCD 2001年第1期15-21,共7页
汉坦病毒Z37株是从褐家鼠体内分离到的 ,用于生产双价肾综合征出血热疫苗的病毒毒株之一 ,血清分型为SEO型。利用RT PCR方法扩增Z37株M基因片段cDNA ,克隆入质粒载体 ,进行核苷酸序列测定及分析。Z37株M基因片段由 36 5 1个核苷酸组成 ... 汉坦病毒Z37株是从褐家鼠体内分离到的 ,用于生产双价肾综合征出血热疫苗的病毒毒株之一 ,血清分型为SEO型。利用RT PCR方法扩增Z37株M基因片段cDNA ,克隆入质粒载体 ,进行核苷酸序列测定及分析。Z37株M基因片段由 36 5 1个核苷酸组成 ,只有一个开放读码框架 ,共编码 1133个氨基酸。与HTN型病毒 ( 76 118、A9、HV 114)的核苷酸和氨基酸同源性分别为 71.8%～ 72 .1%、76 .2 %～ 76 .7% ,与SEO型 (R2 2、L99、80 39)的核苷酸和氨基酸同源性分别为 95 .3%～ 96 .1%、95 .3 %～ 98.9%。这一结果的获得进一步从分子水平确定了Z37株的型别 。 展开更多
关键词 汉坦病毒 Z37株 M片段 序列测定 中国疫苗株
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双价纯化肾综合征出血热疫苗临床观察 被引量：2
5
作者 朱智勇 翁景清 +7 位作者 李岩金 陆群英 李敏红 姚苹苹 朱函坪 傅桂明 赵芝雅 刘合宾 《浙江预防医学》 2002年第12期13-13,共1页
关键词 HFRS 双价纯化疫苗 免疫效果 肾综合征出血热 疫苗
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快速荧光灶抑制试验对我国部分肾综合征出血热毒株及病人血清的分型研究
6
作者 唐汉英 朱智勇 +4 位作者 翁景清 陆群英 姚苹苹 李敏红 刘合宾 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS CSCD 1999年第3期185-187,共3页
目的：探讨肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）毒株及病人血清分型方法。方法：快速荧光灶抑制试验（ＲＦＦＩＴ）。结果：６株来自黑线姬鼠和病人的毒株，其免疫血清对Ⅰ型标准株７６－１１８的中和效价较Ⅱ型标准株（ＵＲ）高４～２５６倍；... 目的：探讨肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）毒株及病人血清分型方法。方法：快速荧光灶抑制试验（ＲＦＦＩＴ）。结果：６株来自黑线姬鼠和病人的毒株，其免疫血清对Ⅰ型标准株７６－１１８的中和效价较Ⅱ型标准株（ＵＲ）高４～２５６倍；而另６株来自褐家鼠和大白鼠的毒株，包括Ｇｏｕ３和Ｋ２４的免疫血清，对Ⅱ型标准株ＵＲ的中和效价高于Ⅰ型７６－１１８株８～１２８倍；被检的所有毒株和病人血清都能准确地分型。结论：ＲＦＦＩＴ具有快速、简便、特异和准确灵敏的特点，不仅可检测中和抗体，且适用于ＨＦＲＳ病毒血清学分型。 展开更多
关键词 肾综合征出血热 血清学分型 RFFIT
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肾综合征出血热中国疫苗株Z_(37)M片段的克隆及序列分析
7
作者 朱函坪 刘合宾 朱智勇 《浙江预防医学》 1999年第12期61-62,共2页
肾综合征出血热是属布尼亚病毒属的一组抗原相关病毒引起的以发热、出血、肾损害为主的急性传染病。它至少有8个血清型,我国仅存在2个血清型,即HTN型(姬鼠型)和SEO型(家鼠型),Z_(37)株是我站1989年11月从褐家鼠分离到,后经酶斑选育出的... 肾综合征出血热是属布尼亚病毒属的一组抗原相关病毒引起的以发热、出血、肾损害为主的急性传染病。它至少有8个血清型,我国仅存在2个血清型,即HTN型(姬鼠型)和SEO型(家鼠型),Z_(37)株是我站1989年11月从褐家鼠分离到,后经酶斑选育出的一株具有血凝滴度高、抗原性强等特点的病毒,与我站分离的姬鼠型病毒Z_(10)株一起, 展开更多
关键词 肾综合征出血热 中国疫苗株 克隆 序列分析
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汉坦病毒Z10疫苗株M片段的克隆及在昆虫细胞表达的研究 被引量：2
8
作者 朱函坪 姚苹苹 +7 位作者 张传溪 刘合宾 陆群英 翁景清 李敏红 傅桂明 赵芝雅 朱智勇 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期854-855,共2页
关键词 汉坦病毒 Z10疫苗株 M片段 克隆 昆虫细胞 表达 研究
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汉坦病毒中国疫苗株Z10核蛋白免疫原性的研究 被引量：1
9
作者 姚苹苹 刘合宾 +7 位作者 朱函坪 陆群英 翁景清 李敏红 赵芝雅 傅桂明 张传溪 朱智勇 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期400-400,共1页
关键词 汉坦病毒 中国疫苗株Z10 核蛋白 免疫原性
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