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基于适配体-金属有机框架模拟酶比色检测牛妊娠相关糖蛋白9
1
作者 卢春霞 刘长彬 +3 位作者 张振良 卢守亮 倪建宏 王超丽 《化学研究与应用》 北大核心 2025年第2期335-343,共9页
本研究以金属有机框架Fe-MIL-101作为过氧化物模拟酶,bPAG9适配体为识别探针,基于间接竞争原理建立了一种比色检测bPAG9方法。在方法建立过程中,将互补于适配体的生物素-cDNA固定在微孔板上,加入适配体功能化Fe-MIL-101,适配体与互补链c... 本研究以金属有机框架Fe-MIL-101作为过氧化物模拟酶,bPAG9适配体为识别探针,基于间接竞争原理建立了一种比色检测bPAG9方法。在方法建立过程中,将互补于适配体的生物素-cDNA固定在微孔板上,加入适配体功能化Fe-MIL-101,适配体与互补链cDNA杂交,当测试样品中含有bPAG9时,适配体与bPAG9结合后从互补链上脱落,然后Fe-MIL-101催化无色过氧化物酶底物产生比色输出信号,通过比色信号的变化实现对bPAG9的定性和定量分析。在优化条件下,bPAG9在缓冲液中线性检测范围为1~100 ng·mL^(-1)(R>0.996),检出限为0.25 ng·mL^(-1)。bPAG9在空白血清中加标回收率为85.2%~102.4%,相对标准偏差小于10%。将本方法应用人工受精28d的奶牛血清检测,妊娠诊断结果显示,本方法诊断敏感性、特异性和准确率分别为91.6%、92.1%和91.8%。本方法具有无创、简便、准确性高等特点,具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 妊娠相关糖蛋白 适配体 金属有机框架 早期妊娠诊断 奶牛
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牛羊早期妊娠诊断技术研究进展
2
作者 张振良 吕占民 +3 位作者 卢守亮 卢春霞 倪建宏 刘长彬 《福建农业学报》 北大核心 2025年第1期91-98,共8页
规模化养殖中,母畜空怀将使养殖场遭受严重的经济损失,应用早期妊娠诊断技术,可有效降低空怀母畜数量,缩短产犊(羔)间隔,提高养殖效益。本文从诊断方法、诊断时间、诊断准确率等方面对牛羊早期妊娠临床诊断法和妊娠相关标志物诊断法进... 规模化养殖中,母畜空怀将使养殖场遭受严重的经济损失,应用早期妊娠诊断技术,可有效降低空怀母畜数量,缩短产犊(羔)间隔,提高养殖效益。本文从诊断方法、诊断时间、诊断准确率等方面对牛羊早期妊娠临床诊断法和妊娠相关标志物诊断法进行综述。在临床诊断中,B超妊娠诊断较普遍,妊娠28~35 d超声检查可以获得比较可靠的结果,但其可靠性很大程度上取决于所用设备频率、操作者技能。在妊娠相关标志物诊断中,孕酮(Progesterone,P_(4))浓度检测法操作繁琐,对检测环境要求高,难以在生产中大面积推广。早期妊娠因子是受精后最早出现的特异性指标,但目前其检测完全依赖于使用玫瑰花环抑制试验,后续需开发简便的检测方法。干扰素刺激基因和外泌体miRNAs可能有助于牛羊早期妊娠诊断,但这些技术尚处于研究开发阶段。商业化的妊娠相关糖蛋白(pregnancy-associated glycoproteins,PAGs)检测试剂盒可作为B超妊娠诊断的替代方法,用于确定牛羊的早期妊娠或晚期胚胎损失。未来需要研发国产的商业化PAG检测试剂盒,以降低检测成本。本文通过总结不同检测方法的优缺点及实际应用效果,为生产者选择早期妊娠诊断方法提供参考,为牛羊早期妊娠诊断方法后期研究方向提供参考。 展开更多
关键词 牛 羊 妊娠诊断 MIRNAS PAGs
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多胎绵羊两年三产高频繁殖技术优化试验 被引量：1
3
作者 樊文华 李国保 +8 位作者 杨华 倪建宏 周华倩 杨永林 余乾 张文喆 赵宗胜 闫佳许 王政力 《黑龙江动物繁殖》 2024年第3期8-12,共5页
为建立多胎绵羊两年三产高频繁殖技术,以404只多胎萨福克经产母羊为研究对象,通过CIDR+PMSG法同期发情、人工输精、B超早期妊娠诊断施行两年三产,比较分析子宫颈口输精和腹腔内窥镜输精母羊的妊娠率,优化操作流程,分析经济效益。结果表... 为建立多胎绵羊两年三产高频繁殖技术,以404只多胎萨福克经产母羊为研究对象,通过CIDR+PMSG法同期发情、人工输精、B超早期妊娠诊断施行两年三产,比较分析子宫颈口输精和腹腔内窥镜输精母羊的妊娠率,优化操作流程,分析经济效益。结果表明:采用CIDR+PMSG法实施同情发情母羊的发情率为95%,腹腔内窥镜输精母羊的妊娠率为87%,子宫颈口输精母羊的妊娠率为80%,腹腔内窥镜输精优于子宫颈口输精。两年三产高频繁殖技术母羊的产羔率为318%,比一年一产(212%)提高106%;同期发情及子宫颈口输精处理的成本40元/只,只均经济效益334.04元。说明两年三产高频繁殖技术可进一步提高多胎绵羊的繁殖效率,增加养殖效益。 展开更多
关键词 绵羊 两年三产 高频繁殖技术 产羔率 经济效益
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牛附睾和附睾液分析与牛附睾尾精子在模拟附睾液中存活试验 被引量：1
4
作者 倪建宏 刘长彬 +1 位作者 张宾 Graham W Kay 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期937-941,共5页
【目的】新鲜精液在离开生殖腺后存活时间很短。相关研究表明副睾液为精子的存活提供了特殊的环境。试验探讨和研究牛附睾精子在体外模拟附睾液中的存活试验的各因素的影响。【方法】试验对公牛附睾头部和尾部的摩尔渗透压和蛋白质浓度... 【目的】新鲜精液在离开生殖腺后存活时间很短。相关研究表明副睾液为精子的存活提供了特殊的环境。试验探讨和研究牛附睾精子在体外模拟附睾液中的存活试验的各因素的影响。【方法】试验对公牛附睾头部和尾部的摩尔渗透压和蛋白质浓度进行了分析,牛附睾尾部精子在不同蛋白浓度的CEP-2溶液中,在4℃条件下孵育120 h。每24 h做一次精子活力检测。【结果】5 d后精子活力仍然超过60%。附睾头、尾部的渗透压分别为(287.0±13.7)mOsm和(310.8±17.0)mOsm。蛋白浓度分别为(37.43±12.55)mg/mL和(50.58±11.08)mg/mL。【结论】附睾尾精子在蛋白浓度为40 mg/mL,渗透压为345 mOsm时,精子存活率最高。 展开更多
关键词 牛 附睾尾部精子 CEP-2稀释液
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波尔山羊腹腔内窥镜鲜胚移植试验 被引量：2
5
作者 倪建宏 杨永林 +2 位作者 石国庆 卢守亮 任正友 《草食家畜》 2003年第3期33-34,共2页
2002年10～11月在山东省东营市蓝海集团绵野公司种羊场使用两种超排药物对40只经产波尔山羊进行超排处理,供体羊有两只未发情,超排有效率为95％(38/40)。共回收胚胎388枚,其中可用胚311枚,每只获胚胎10.21枚(388/38),平均可用胚8.18枚(3... 2002年10～11月在山东省东营市蓝海集团绵野公司种羊场使用两种超排药物对40只经产波尔山羊进行超排处理,供体羊有两只未发情,超排有效率为95％(38/40)。共回收胚胎388枚,其中可用胚311枚,每只获胚胎10.21枚(388/38),平均可用胚8.18枚(311/38),可用胚率80.15％(311/388)。同期处理受体399只,有320只发情,同期率为80.20％,运用腹腔内窥镜技术移植受体267只,其中44只供体移植双胚。经试情150只受体未返情,受胎率为56.18％(150/267)。 展开更多
关键词 波尔山羊 腹腔内窥镜 鲜胚移植 超数排卵 同期发情 受胎率
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中国美利奴“U”品系羊重复超排效果试验 被引量：7
6
作者 倪建宏 杨永林 +1 位作者 皮文辉 石国庆 《黑龙江动物繁殖》 2000年第3期3-4,共2页
在一个发情季节里对15只中国美利奴“U”品系母羊实施2次重复超排试验。结果表明，第1次处理15只羊有13只发情配种，超排有效率86.7%，黄体总数128枚，平均9.84枚/只，回收卵97枚，可用胚数63枚，平均4.85%枚/只。第2次处理有3只羊未发... 在一个发情季节里对15只中国美利奴“U”品系母羊实施2次重复超排试验。结果表明，第1次处理15只羊有13只发情配种，超排有效率86.7%，黄体总数128枚，平均9.84枚/只，回收卵97枚，可用胚数63枚，平均4.85%枚/只。第2次处理有3只羊未发情，其中有1只羊为上次处理后未发情羊，超排有效率为80%，12只供体羊共有黄体113枚，平均9.42枚/只，回收卵86枚，可用胚57枚，平均4.75枚/只，其中有1只羊发生子宫粘连。2次超排所获头均黄体数和可用胚数差异不显著（P＞0.05），说明在一个发情季节里对母羊实施重复超排可以获得比较好的效果。 展开更多
关键词 中国美利奴 “U”品系羊 重复超排 黄体 可用胚
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中国美利奴多胎品系绵羊BMPR-IB基因多态性与排卵数、产羔数的相关研究 被引量：2
7
作者 倪建宏 刘长斌 +1 位作者 张宾 卢守亮 《新疆农垦科技》 2009年第6期22-23,共2页
本试验分析检测了中国美利奴多胎品系绵羊群体中BMPR-IB基因多态性分布与情期排卵数,结果表明:绵羊群体中BB、B+、++基因型的情期排卵数平均为4.0、3.5和1.56个,BB、B+基因型比++基因型的母羊分别多排2.44和1.94个卵,反映了该基因具有... 本试验分析检测了中国美利奴多胎品系绵羊群体中BMPR-IB基因多态性分布与情期排卵数,结果表明:绵羊群体中BB、B+、++基因型的情期排卵数平均为4.0、3.5和1.56个,BB、B+基因型比++基因型的母羊分别多排2.44和1.94个卵,反映了该基因具有明显增加排卵数的作用,产羔数平均增加为0.64个和0.73个,差异极显著,BMPR-IB基因是影响中国美利奴多胎品系绵羊高产的主效基因。 展开更多
关键词 中国美利奴多胎品系绵羊 BMPR—IB基因多态性 排卵数 产羔数
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不同药物在绵羊同期发情中的应用试验
8
作者 倪建宏 杨永林 +2 位作者 皮文辉 石国庆 曾培坚 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2001年第z1期74-75,共2页
关键词 同期发情 不同药物 发情同步化 孕酮海绵栓 绵羊
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南非肉用美利奴羊冷冻胚胎移植
9
作者 倪建宏 张宾 +3 位作者 杨永林 刘长彬 何明祝 蒲新竹 《新疆农垦科技》 2011年第2期43-44,共2页
南非肉用美利奴羊原产地南非，起源于德国肉用美利奴羊，被毛白色，是优良的肉毛兼用型品种。1996年该品种被引入澳大利亚。该品种羊无角．体大而宽深，胸部开阔，臀部宽广，腿部坚实而粗壮。
关键词 德国肉用美利奴羊 冷冻胚胎移植 南非 兼用型品种 澳大利亚 原产地 被毛 种羊
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肉羊胚胎移植成活的影响因素实例分析 被引量：7
10
作者 郭延华 刘长彬 +8 位作者 万鹏程 倪建宏 王立民 周平 杨永林 方志忠 顾宏伟 付炳哲 卢全胜 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期2138-2145,共8页
【目的】胚胎移植技术是获得优秀种质资源的一种重要应用技术,研究影响胚胎存活和妊娠的因素。【方法】回顾性调查分析影响胚胎移植后成活的胚胎和受体因素。【结果】三种胚胎运输方式的妊娠率极显著低于就近移植的妊娠率(P<0.01);... 【目的】胚胎移植技术是获得优秀种质资源的一种重要应用技术,研究影响胚胎存活和妊娠的因素。【方法】回顾性调查分析影响胚胎移植后成活的胚胎和受体因素。【结果】三种胚胎运输方式的妊娠率极显著低于就近移植的妊娠率(P<0.01);胚胎卵裂期与囊胚期移植妊娠率差异不显著(P>0.05),但以2细胞移植的妊娠率最低;鲜胚与冻胚的妊娠率差异不显著(P>0.05),2枚胚胎的妊娠率高于1枚胚胎的妊娠率,胚胎妊娠率随着胚胎质量而下降;囊胚与受体同期性差-24 h,妊娠率差异不显著(P>0.05);放牧与舍饲的受体羊在胚胎妊娠率方面没有显著差异性(P>0.05)。【结论】胚胎和受体因素对胚胎发生成功妊娠具有重要的影响。 展开更多
关键词 绵羊 胚胎 受体 影响因素
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细毛羊胚胎冷冻移植试验 被引量：11
11
作者 石国庆 曾培坚 +3 位作者 杨永林 倪建宏 周鹏飞 皮文辉 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 1996年第1期41-41,共1页
细毛羊胚胎冷冻移植试验石国庆，曾培坚，杨永林，倪建宏，周鹏飞，皮文辉（新疆农垦科学院畜牧兽医所石河子８３２０００）前言细毛羊多为单胎，双胎极少，终生正常繁殖后代仅５～７只。为挖掘开发优秀细毛母羊繁殖潜力，增加羔羊数量... 细毛羊胚胎冷冻移植试验石国庆，曾培坚，杨永林，倪建宏，周鹏飞，皮文辉（新疆农垦科学院畜牧兽医所石河子８３２０００）前言细毛羊多为单胎，双胎极少，终生正常繁殖后代仅５～７只。为挖掘开发优秀细毛母羊繁殖潜力，增加羔羊数量，使用外源激素，超数排卵，人工授精... 展开更多
关键词 羊 细毛羊 胚胎冷冻 胚胎移植 繁殖
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绵羊腹腔内窥镜子宫角深部冷冻精液输精试验 被引量：5
12
作者 石国庆 曾培坚 +2 位作者 杨永林 倪建宏 皮文辉 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2001年第z1期72-73,共2页
采用人用黄体酮 ,PMSG对绵羊进行同期发情处理 ,46只绵羊 48h同期发情率为 95 .6 5 % (4 4/ 46 ) ,用解冻后活力仅 0 .2的冷冻精液 ,借助腹腔内窥镜子宫角深部输精 ,情期受胎率 72 .73% (32 / 44 ) ,与澳大利亚Salamoan教授腹腔内窥镜... 采用人用黄体酮 ,PMSG对绵羊进行同期发情处理 ,46只绵羊 48h同期发情率为 95 .6 5 % (4 4/ 46 ) ,用解冻后活力仅 0 .2的冷冻精液 ,借助腹腔内窥镜子宫角深部输精 ,情期受胎率 72 .73% (32 / 44 ) ,与澳大利亚Salamoan教授腹腔内窥镜子宫角冷冻精液输精情期受胎率 74.0 4% (77/ 10 4)且冻后活力 0 .5 ,仅差 1.31个百分点 ,差异不显著 (P <0 .0 5 ) ,而与常规冷冻精液输精的情期受胎率 5 5 .45 % (178/ 32 1)相比 ,高出 17.78个百分点 ,差异极显著 (P <0 .0 1)。 展开更多
关键词 腹腔内窥镜 冷冻精液输精 受胎率 绵羊
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萨福克羊精液低温液态保存效果的研究 被引量：11
13
作者 刘福元 陈玲香 +2 位作者 杨永林 倪建宏 白丁平 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第25期10887-10889,共3页
[目的]为了提高萨福克羊精液低温液态保存的效果。[方法]用葡萄糖、柠檬酸钠、乳糖、卵黄为主要成分配制了5种萨福克羊精液稀释液,分别4、81、21、6倍稀释精液并5℃保存,通过观测精子存活时间、有效存活时间、生存指数等指标,筛选出精... [目的]为了提高萨福克羊精液低温液态保存的效果。[方法]用葡萄糖、柠檬酸钠、乳糖、卵黄为主要成分配制了5种萨福克羊精液稀释液,分别4、81、21、6倍稀释精液并5℃保存,通过观测精子存活时间、有效存活时间、生存指数等指标,筛选出精液保存时适宜的稀释液、渗透压、pH值及稀释倍数。[结果]4倍稀释不利于精液保存,8、121、6倍稀释精液保存效果好(P<0.01),结合母羊受胎率稀释保存倍数以8倍为宜;以葡萄糖3.0 g、柠檬酸钠2.0 g、卵黄10 ml为主要成分的稀释液保存效果优于其他4种稀释液(P<0.05)。稀释液pH值和渗透压与精液越接近保存效果越好。[结论]调整稀释液成分、稀释倍数、pH值、渗透压,可以提高萨福克羊精液低温液态保存效果。 展开更多
关键词 萨福克羊 精液 低温保存
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绵羊腹腔内窥镜子宫角深部冷冻精液输精试验 被引量：4
14
作者 石国庆 曾培坚 +2 位作者 杨永林 倪建宏 皮文辉 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 1998年第2期34-34,共1页
绵羊腹腔内窥镜子宫角深部冷冻精液输精试验石国庆曾培坚杨永林倪建宏皮文辉（新疆农垦科学院畜牧兽医所石河子市８３２０００）引言自１９７２年中国首次引入澳大利亚美利奴细毛羊以来，绵羊冷冻精液保存输精技术便随后开始研究，到１... 绵羊腹腔内窥镜子宫角深部冷冻精液输精试验石国庆曾培坚杨永林倪建宏皮文辉（新疆农垦科学院畜牧兽医所石河子市８３２０００）引言自１９７２年中国首次引入澳大利亚美利奴细毛羊以来，绵羊冷冻精液保存输精技术便随后开始研究，到１９９０年秋，新疆农垦科学院畜牧兽医... 展开更多
关键词 绵羊 冷冻精液 输精 繁殖 腹腔内窥镜
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奶牛活体采卵的影响因素分析 被引量：5
15
作者 刘长彬 曲明悦 +8 位作者 蒲新竹 姜志涛 晁旭东 曾学伟 赵万军 汪新兰 张宾 石国庆 倪建宏 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期6-12,共7页
针对活体生物材料缺乏,活体采卵技术(Ovum pick-up)应运而生,因其具有系谱清楚适于科学研究而成为获取卵母细胞的主要途径之一。因此,研究活体采卵影响因素具有重要意义。就活体采卵在采卵间隔周期、超排处理、高产牛所处年龄段、患繁... 针对活体生物材料缺乏,活体采卵技术(Ovum pick-up)应运而生,因其具有系谱清楚适于科学研究而成为获取卵母细胞的主要途径之一。因此,研究活体采卵影响因素具有重要意义。就活体采卵在采卵间隔周期、超排处理、高产牛所处年龄段、患繁殖疾病与否及连续采卵进行试验,研究其采卵效率及对卵巢生理机能的影响。结果显示,①采卵间隔时间不同,以每周2次采卵所获卵母细胞数要多于每周1次的,差异不显著,但每周2次的优质卵母细胞率高于每周1次,且差异显著;②经超排处理后获卵母细胞数显著高于对照组,优质卵母细胞率有所提高,差异不显著;③青年牛和成年牛的平均获卵数和优质卵母细胞率差异均不显著;④健康牛平均获卵数显著高于患有繁殖疾病的牛只,优质卵母细胞率也显著高于患牛;⑤奶牛连续采卵和1次采卵的平均获卵率和优质卵母细胞率差异均不显著。综上,奶牛活体采卵受很多因素的影响,上述5方面的因素为主要影响因素。 展开更多
关键词 奶牛 活体采卵 影响因素
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牛妊娠相关糖蛋白16(bPAG16)基因密码子优化及表达 被引量：5
16
作者 刘长彬 卢春霞 +1 位作者 卢守亮 倪建宏 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期1-8,共8页
【目的】对bPAG16基因进行优化和合成,构建proEM-bPAG16重组表达载体,将重组质粒转染至HEK293细胞中,获得bPAG16重组蛋白,为家畜早期妊娠诊断技术的研发提供技术支撑。【方法】通过生物学技术对bPAG16基因密码子进行优化和人工合成,经T4... 【目的】对bPAG16基因进行优化和合成,构建proEM-bPAG16重组表达载体,将重组质粒转染至HEK293细胞中,获得bPAG16重组蛋白,为家畜早期妊娠诊断技术的研发提供技术支撑。【方法】通过生物学技术对bPAG16基因密码子进行优化和人工合成,经T4 DNA连接酶将bPAG16基因插入到proEM载体中,构建重组载体proEM-bPAG16,将其转染至HEK293细胞中进行瞬时表达,重组蛋白经Ni-IDA亲和柱纯化后,采用SDSPAGE、Western Blot检测其表达效果。【结果】优化后的bPAG16基因密码子适用指数(CAI)由原来的0.77提高到0.96,GC含量由48%提高到58%。重组载体proEM-bPAG16双酶切后分别获得1179 bp和4369 bp的2条片段,与预期值一致;重组质粒测序结果显示,其核苷酸序列与优化后基因完全一致,氨基酸未发生突变;SDS-PAGE和Western Blot鉴定结果显示,获得重组蛋白bPAG16(rbPAG16)相对分子质量约48 kDa,经Ni-IDA亲和层析纯化后,其纯度达到90%以上。【结论】通过密码子优化策略及重组蛋白技术高效表达了rbPAG16,为奶牛早孕快速检测技术的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 妊娠相关糖蛋白 密码子优化 重组蛋白 奶牛 早孕诊断
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胚胎移植技术在优质细毛羊育种中的研究与应用 被引量：3
17
作者 石国庆 刘守仁 +4 位作者 杨永林 倪建宏 皮文辉 周平 万鹏程 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期351-353,共3页
采用 FSH、L H、PMSG、氟孕酮阴道海绵栓等激素进行超数排卵 ,通过人工授精、手术采卵、同期发情、胚胎移植、B超妊娠检查等技术 ,共处理优秀美利奴母羊 4 5 6只 ,获得可用胚胎 (A、B、C级胚胎 ) 30 33枚 ,平均 6 .6 5枚 /只(30 33/ 4 5... 采用 FSH、L H、PMSG、氟孕酮阴道海绵栓等激素进行超数排卵 ,通过人工授精、手术采卵、同期发情、胚胎移植、B超妊娠检查等技术 ,共处理优秀美利奴母羊 4 5 6只 ,获得可用胚胎 (A、B、C级胚胎 ) 30 33枚 ,平均 6 .6 5枚 /只(30 33/ 4 5 6 ) ,移植受体母羊 2 333只 ,冻胚受孕率 4 7.0 2 % (10 97/ 2 333) ,产羔数 14 2 6只 ,产羔率 12 9.99% (14 2 6 /10 97)。其中 ,公羔 6 85只 ,母羔 74 1只。优质细毛羊初生重公羔平均 4 .4 5 kg,母羔平均 4 .6 1kg。断奶重公羔平均38.2 4 kg,母羔平均 33.6 8kg。 12月龄平均体重公羊 76 .15 kg,母羊平均 6 2 .15 kg。周岁毛长公羊平均 11.6 7cm,剪毛量平均 12 .0 4 kg;母羊毛长平均 11.12 cm ,剪毛量平均 7.6 5 kg;平均净毛率达到 6 8.5 %。 2岁公羊体重平均 10 6kg,毛长平均 11.5 cm,剪毛量平均 11.85 kg,净毛率 6 9.5 %。2岁母羊体重平均 72 kg,毛长平均 11.0 cm,剪毛量平均8.5 kg,净毛率 6 9.0 6 %。羊毛纤维平均细度 18.71μm。 3岁公羊最大体重 14 8kg,母羊最大体重 10 2 kg。 展开更多
关键词 胚胎移植技术 育种 优质细毛羊 生长发育
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EGF和β-巯基乙醇对羔羊卵母细胞体外受精和体外发育的影响 被引量：9
18
作者 郭洪 万鹏程 +7 位作者 石文艳 倪建宏 代蓉 毛青青 朱汇 张宾 刘长彬 石国庆 《安徽农业科学》 CAS 2012年第11期6537-6540,共4页
[目的]为优化幼畜卵母细胞体外培养体系提供理论基础。[方法]研究在成熟液中添加EGF和β-巯基乙醇对绵羔羊卵母细胞受精和卵裂、囊胚情况的影响,并与成年绵羊卵母细胞进行比较。[结果]在成熟液中添加不同浓度的EGF对羔羊卵母细胞卵裂率... [目的]为优化幼畜卵母细胞体外培养体系提供理论基础。[方法]研究在成熟液中添加EGF和β-巯基乙醇对绵羔羊卵母细胞受精和卵裂、囊胚情况的影响,并与成年绵羊卵母细胞进行比较。[结果]在成熟液中添加不同浓度的EGF对羔羊卵母细胞卵裂率和囊胚率无显著影响(P>0.05)。添加不同浓度的β-巯基乙醇可以提高羔羊卵母细胞囊胚率,其中添加100μmol/Lβ-巯基乙醇有显著影响(P<0.05),但对卵裂率影响不显著(P>0.05)。羔羊卵母细胞卵裂率和囊胚率均显著低于成年羊(P<0.05)。添加100μmol/L的β-巯基乙醇能显著提高羔羊卵母细胞正常受精率(P<0.05),且与成年羊卵母细胞受精率差异不显著(P>0.05)。未添加β-巯基乙醇多精入卵率显著高于成年羊(P<0.05),而添加100μmol/L的β-巯基乙醇多精入卵率与成年羊差异不显著(P>0.05)。成熟液中不添加β-巯基乙醇时未受精率(20.0%)高于成年羊组(12.3%)和β-巯基乙醇(13.5%),但差异不显著(P>0.05)。[结论]添加100μmol/L的β-巯基乙醇能显著提高羔羊卵母细胞发育能力,提高正常受精的比例并减少多精子受精的发生,但羔羊卵母细胞发育能力仍显著低于成年羊。 展开更多
关键词 绵羔羊 卵母细胞 体外受精 EGF β-巯基乙醇
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中国美利奴(细毛型)胚胎冷冻移植试验 被引量：3
19
作者 石国庆 刘守仁 +2 位作者 杨永林 倪建宏 皮文辉 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 1999年第3期43-44,共2页
中国美利奴（细毛型）羊属于单胎繁殖家畜，双胎很少，仅占８％～１０％，母羊正常繁殖年龄一般在７～８岁，终生仅能繁殖后代６～８只。为充分发挥中国美利奴（细毛型）优秀母羊的繁殖潜能，迅速增加其后代的数量，采用外源激素，超数... 中国美利奴（细毛型）羊属于单胎繁殖家畜，双胎很少，仅占８％～１０％，母羊正常繁殖年龄一般在７～８岁，终生仅能繁殖后代６～８只。为充分发挥中国美利奴（细毛型）优秀母羊的繁殖潜能，迅速增加其后代的数量，采用外源激素，超数排卵、人工授精、手术采卵、同期发情... 展开更多
关键词 中国美利奴羊 细毛羊 胚胎移植 冷冻移植
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牛妊娠相关糖蛋白6基因密码子优化及其在HEK293细胞中的表达 被引量：3
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作者 刘长彬 卢春霞 +2 位作者 石国庆 倪建宏 卢守亮 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期2597-2606,共10页
[目的]解决天然牛妊娠相关糖蛋白(bPAG)不易分离纯化的问题,获得高效异源表达且具有良好免疫反应性的bPAG6,为国产bPAG检测产品的研发提供技术支持。[方法]根据宿主细胞对密码子的偏好性,利用MaxCodon^TM在不改变氨基酸序列的前提下,对b... [目的]解决天然牛妊娠相关糖蛋白(bPAG)不易分离纯化的问题,获得高效异源表达且具有良好免疫反应性的bPAG6,为国产bPAG检测产品的研发提供技术支持。[方法]根据宿主细胞对密码子的偏好性,利用MaxCodon^TM在不改变氨基酸序列的前提下,对bPAG6基因密码子进行优化,采用全基因合成技术扩增优化后的bPAG6基因,构建proEM-bPA G6重组载体,并转染至HEK293细胞中进行高效表达;然后通过SDS-PAGE电泳、Western blotting和ELISA检测重组蛋白的表达效果及免疫反应性,并利用在线生物信息学分析软件对重组蛋白的结构及功能进行预测。[结果]优化后bPAG6基因的密码子适用指数(CAI)由0.80提高到0.96,G+C含量由49.4%提高到58.8%,其蛋白编码区(CDS)长度为1137 bp,共编码379个氨基酸残基。将全基因合成技术扩增获得的bPAG6基因插入proEM载体构建proEM-bPA G6重组载体,经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定可获得2条与预期结果相符的片段[proEM载体(4369 bp)和bPAG6基因(1176 bp)],测序结果也显示其碱基序列与优化后的bPAG6基因完全一致。proEM-bPA G6重组载体转染HEK293细胞表达获得的重组蛋白bPAG6分子量约46 kD。重组蛋白bPAG6可被抗bPAG6抗体识别,即具有良好的免疫反应性。重组蛋白bPAG6信号肽由N端的前15个氨基酸残基组成;存在5个N-糖基化位点,其N-糖基化修饰主要位于57Asn、73Asn、102Asn、124Asn和181Asn位点处;重组蛋白bPAG6为分泌性蛋白,无跨膜螺旋区,其二级结构由无规则卷曲(42.74%)、延伸链(31.93%)、α-螺旋(19.26%)和β-转角(6.07%)组成。[结论]通过基因优化及真核表达获得的重组蛋白bPAG6具有良好免疫反应性,可作为抗原应用于牛早期妊娠快速诊断产品的研发。 展开更多
关键词 牛妊娠相关糖蛋白6(bPAG6) 早期妊娠诊断 密码子优化 真核表达
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