从噬菌体15肽库中筛选乙脑病毒糖蛋白模拟肽 被引量：3

1

作者 任君萍 马文煜 +3 位作者 杨乔欣 丁天兵 肖毅 宋建华 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期332-334,共3页

目的用抗JEV E蛋白的mAb 2H4筛选噬菌体15肽库，以研究JEV E蛋白模拟肽。方法用生物素标记的mAb 2H4，对噬菌体随机15肽库进行3轮筛选。经ELISA鉴定后，随机挑取10个阳性噬菌体克隆测序，并与JEV E蛋白进行同源性比较。结果筛选到的噬... 目的用抗JEV E蛋白的mAb 2H4筛选噬菌体15肽库，以研究JEV E蛋白模拟肽。方法用生物素标记的mAb 2H4，对噬菌体随机15肽库进行3轮筛选。经ELISA鉴定后，随机挑取10个阳性噬菌体克隆测序，并与JEV E蛋白进行同源性比较。结果筛选到的噬菌体能与mAb 2H4特异地结合，并且这种结合可被天然JEV抗原所抑制。10个阳性噬菌体克隆的氨基酸序列相同，均为RQDPQWPYANSTIAR。同源分析表明，在JEV E蛋白不同区域有两个同源性较高的序列：STXAR和WXXAXST。阳性噬菌体展示肽也能与抗天然JEV抗原的鼠血清产生特异性反应。结论筛选的该噬菌体克隆展示肽可模拟JEV E 蛋白的部分抗原性。 展开更多

关键词 噬菌体肽库 单克隆抗体 表位 日本脑炎病毒 筛选 糖蛋白模拟肽

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日本脑炎病毒受体功能缺陷细胞的筛选和鉴定 被引量：3

2

作者 任君萍 张伟 +4 位作者 黄庆生 高淑娴 宋建华 丁天兵 马文煜 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2007年第2期81-84,F0003,共5页

目的筛选并鉴定日本脑炎病毒(JEV)受体功能缺陷的BHK-21细胞突变株。方法用化学诱变剂ICR-191人工诱变JEV易感细胞系BHK-21,经JEV攻击,对存活细胞克隆化,RT-PCR筛选JEV RNA阴性细胞,用流式细胞术,免疫荧光和空斑实验鉴定其对JEV的敏感... 目的筛选并鉴定日本脑炎病毒(JEV)受体功能缺陷的BHK-21细胞突变株。方法用化学诱变剂ICR-191人工诱变JEV易感细胞系BHK-21,经JEV攻击,对存活细胞克隆化,RT-PCR筛选JEV RNA阴性细胞,用流式细胞术,免疫荧光和空斑实验鉴定其对JEV的敏感性。结果筛选到1株JEV RNA阴性细胞3A10-3F。流式细胞术检测3A10-3F细胞与JEV的结合率为2.10%,免疫荧光和空斑实验证实其对JEV感染有相当程度的抵抗,在JEV感染复数MOI 1时3A10-3F细胞培养上清中JEV最高滴度比BHK-21细胞中JEV最高滴度下降2个数量级。结论用化学诱变法筛选到1株JEV受体功能缺陷细胞,为进一步鉴定JEV受体,深入研究JEV致病机理提供了有益线索。 展开更多

关键词 日本脑炎病毒(JEV) 病毒受体 BHK-21细胞

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日本脑炎病毒糖蛋白模拟短肽的筛选和基因定位 被引量：2

3

作者 任君萍 马文煜 +3 位作者 杨乔欣 肖毅 丁天兵 黎志东 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第14期1290-1292,共3页

目的　寻找 JEV m Ab 2 F2识别的抗原表位 ,为 JEV小分子多肽疫苗合理设计提供依据 .方法　链亲和素包被塑料平皿 ,加入生物素标记 2 F2与噬菌体随机 15肽库 ,再洗脱 ,扩大培养进行三轮淘筛 ,经夹心 EL ISA、竞争 EL ISA鉴定后 ,挑取 1... 目的　寻找 JEV m Ab 2 F2识别的抗原表位 ,为 JEV小分子多肽疫苗合理设计提供依据 .方法　链亲和素包被塑料平皿 ,加入生物素标记 2 F2与噬菌体随机 15肽库 ,再洗脱 ,扩大培养进行三轮淘筛 ,经夹心 EL ISA、竞争 EL ISA鉴定后 ,挑取 10个阳性克隆 ,DNA测序 ,与 JEV E蛋白同源分析 .结果　筛选到的噬菌体能特异地与 2 F2结合 ,并且这种结合可被天然抗原所抑制 . 10个克隆的氨基酸序列相同 :-HTPQWSPSQYRPSL R- ,同源分析在 JEV E蛋白 2 2 4～ 2 2 9aa得到一个同源性较高的序列 :PXXSPS.结论　 PXXSPS可能为 JEV E蛋白的一个模拟表位 . 展开更多

关键词 日本脑炎病毒 单克隆抗体 噬菌体 肽库 表位

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乙型脑炎病毒E蛋白Ⅲ区基因的克隆表达及亲合层析纯化

4

作者 任君萍 高淑娴 +4 位作者 张伟 雷迎峰 丁天兵 宋建华 马文煜 《科学技术与工程》 2007年第14期3373-3377,共5页

克隆表达JEVE蛋白Ⅲ区基因,序列测定正确后进行融合表达、纯化。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从JEVcDNA中扩增Ⅲ区基因,用限制性内切酶消化后插入到PMD-18T载体,序列测定正确后,再亚克隆到融合表达载体pET32a中。转化大肠杆菌BL21(DE... 克隆表达JEVE蛋白Ⅲ区基因,序列测定正确后进行融合表达、纯化。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从JEVcDNA中扩增Ⅲ区基因,用限制性内切酶消化后插入到PMD-18T载体,序列测定正确后,再亚克隆到融合表达载体pET32a中。转化大肠杆菌BL21(DE3),目的基因经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了氨基端带6个连续组氨酸残基的JEVEⅢ区蛋白。在变性条件下对目的蛋白进行纯化,获得了融合6个组氨酸残基的JEVEⅢ区蛋白,蛋白纯度大于80%。证实构建了JEVEⅢ基因的重组表达载体,并获得了高纯度的融合表达蛋白,为以后的深入研究奠定了基础。 展开更多

关键词 日本脑炎病毒 克隆 表达 纯化

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日本脑炎病毒受体功能缺陷细胞与亲代细胞膜分子差异的鉴定

5

作者 任君萍 马文煜 丁天兵 《科学技术与工程》 2008年第18期5155-5160,共6页

鉴定日本脑炎病毒(JEV)受体功能缺陷细胞3A10-3F与亲代细胞BHK-21膜分子表达的差异,以发现JEV受体候选分子。3A10-3F与BHK-21细胞膜蛋白用氯仿去脂法分别提取,通过二维电泳(2-DE)分离。经ImageMaster 2D软件分析比较后,选取差异点做液... 鉴定日本脑炎病毒(JEV)受体功能缺陷细胞3A10-3F与亲代细胞BHK-21膜分子表达的差异,以发现JEV受体候选分子。3A10-3F与BHK-21细胞膜蛋白用氯仿去脂法分别提取,通过二维电泳(2-DE)分离。经ImageMaster 2D软件分析比较后,选取差异点做液质联用质谱分析(LC-MS/MS)。发现有23个蛋白点在两组2-DE凝胶中有显著差异表达,LC-MS/MS鉴定了14个蛋白质,其中有4个膜蛋白,即钙结合蛋白annexin 1,annexin 2;电压依赖的离子通道(VDACs)蛋白VDAC1,VDAC2。上述结果为深入鉴定JEV受体分子特性与功能,阐明JEV致病机理提供了线索。 展开更多

关键词 日本脑炎病毒(JEV) 受体 二维电泳(2-DE) 质谱(MS)

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病毒入胞机制的研究

6

作者 任君萍 丁天兵 马文煜 《医学与哲学（B）》 2006年第4期48-50,共3页

病毒吸附、穿入宿主细胞是一个复杂的过程,多年来一直是病毒性疾病预防和治疗选择的靶点。对病毒入胞机制研究的不断深入,不仅使我们更好地理解、认识病毒的致病性,而且有助于抗病毒新药的开发和疫苗的研制。列举有关实例说明:病毒入胞... 病毒吸附、穿入宿主细胞是一个复杂的过程,多年来一直是病毒性疾病预防和治疗选择的靶点。对病毒入胞机制研究的不断深入,不仅使我们更好地理解、认识病毒的致病性,而且有助于抗病毒新药的开发和疫苗的研制。列举有关实例说明:病毒入胞机制是研究病毒与宿主细胞相互作用的重要环节,从而提出:病毒入胞机制研究具有丰富的哲学内涵。 展开更多

关键词 病毒入胞 宿主细胞 致病性

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乙型脑炎病毒E蛋白在巴斯德毕赤酵母中的表达 被引量：5

7

作者 吴玉水 任君萍 +6 位作者 黄庆生 丁天兵 张伟 宋建华 朱忠勇 张红毅 马文煜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期130-131,135,共3页

目的 :用巴斯德毕赤酵母系统表达乙型脑炎病毒 (JEV)E蛋白。方法 :将JEVE蛋白基因亚克隆入真核表达载体 pPIC9K ,以电穿孔法转化酵母SMD116 8。用MD平板筛选重组子、G4 18筛选高拷贝转化子 ,经甲醇诱导表达后 ,SDS PAGE和免疫印迹分析... 目的 :用巴斯德毕赤酵母系统表达乙型脑炎病毒 (JEV)E蛋白。方法 :将JEVE蛋白基因亚克隆入真核表达载体 pPIC9K ,以电穿孔法转化酵母SMD116 8。用MD平板筛选重组子、G4 18筛选高拷贝转化子 ,经甲醇诱导表达后 ,SDS PAGE和免疫印迹分析表达产物。结果 :由于糖基化不同 ,所表达产物的相对分子质量 (Mr)约为 1130 0 0和 780 0 0 ,表达量约为5 0mg/L。结论 :在巴斯德比赤酵母中成功地表达了JEVE蛋白 。 展开更多

关键词 乙型脑炎病毒 E蛋白 基因克隆 蛋白表达 巴斯德毕赤酵母 电穿孔法

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抗人μ链单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用 被引量：5

8

作者 杨敬 丁天兵 +2 位作者 任君萍 宋建华 马文煜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期325-327,共3页

目的:制备高效价的鼠源性抗人μ链单克隆抗体(mAb),并建立可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法。方法:以人IgM全分子免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合,用间接ELISA法筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗μ链mAb的杂交瘤细胞株... 目的:制备高效价的鼠源性抗人μ链单克隆抗体(mAb),并建立可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法。方法:以人IgM全分子免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合,用间接ELISA法筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗μ链mAb的杂交瘤细胞株。mAb的特性(效价、Ig亚类、特异性及相对亲和力)采用ELISA及Westernblot法鉴定。以纯化的mAb包被建立ELISA捕捉法,并用于可疑乙脑患者标本中特异性IgM抗体的检测。结果:筛选到1株可稳定分泌抗人μ链mAb的细胞株2E5。mAb腹水的ELISA效价为1×10-6,Ig亚类(型)为IgG1(κ),相对亲和力为1×10-5。Westernblot结果显示mAb2E5仅与IgM的μ链结合,Mr为75000。以辛酸硫酸铵法纯化的mAb2E5包被,建立了ELISA捕捉法,用于30份乙脑患者血清IgM的检测,敏感性及特异性良好。结论:成功地制备1株抗人μ链mAb2E5,建立了可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法。 展开更多

关键词 单克隆抗体 μ链 杂交瘤 ELISA

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我国首例与HIV感染者长期无保护性接触未引发感染的报告 被引量：5

9

作者 黎志东 徐志凯 +3 位作者 邢爱华 杨乔欣 任君萍 张亮 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第16期1522-1524,共3页

目的　通过某女 HIV感染的确认及其丈夫 HIV感染的排除 ,报告我国首例与 HIV感染者长期无保护性接触而未引发 HIV感染的案例 .方法　初筛实验用酶联免疫吸附(EL ISA)实验及明胶颗粒凝集 (PA )实验检测 HIV- 1抗体及HIV- 2抗体 ,确认实... 目的　通过某女 HIV感染的确认及其丈夫 HIV感染的排除 ,报告我国首例与 HIV感染者长期无保护性接触而未引发 HIV感染的案例 .方法　初筛实验用酶联免疫吸附(EL ISA)实验及明胶颗粒凝集 (PA )实验检测 HIV- 1抗体及HIV- 2抗体 ,确认实验用蛋白免疫印迹 (WB)实验检测 HIV- 1抗体及 HIV- 2抗体 .结果　某女 ,EL ISA实验结果 HIV- 1抗体阳性 ,HIV- 2抗体阴性 .复检结果相同 .PA实验结果 HIV-1阳性 .WB实验出现 HIV- 1特异性条带 gp160 ,gp12 0 ,p66,p5 5 ,gp41,p31,p2 4,p17,无 HIV- 2特异性条带出现 .结果为 HIV- 1抗体阳性 ,HIV- 2抗体阴性 .某男 ,EL ISA实验结果 :HIV- 1抗体及 HIV- 2抗体均为阴性 ,PA实验结果为阴性 .3mo及 6mo后复查 ,EL ISA,PA实验结果仍为阴性 .结论　某女为 HIV感染者 ,某男可排除 HIV感染的可能性 .某男与感染者长期无保护性接触未感染 HIV,也未因与感染者长期共同生活而感染 HIV. 展开更多

关键词 中国 HIV感染 性交 艾滋病 无保护性接触

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SARS冠状病毒核衣壳蛋白的重组表达及其单克隆抗体的制备 被引量：3

10

作者 王平 黄庆生 +5 位作者 薛小平 雷迎峰 王海涛 任君萍 丁天兵 徐志凯 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期50-52,共3页

　目的: 表达SARS冠状病毒核衣壳蛋白(N蛋白),并以表达产物为免疫原制备特异性单克隆抗体 (mAb)。方法: 采用RT- PCR方法, 从灭活的病毒抗原标本中扩增编码N蛋白的基因。测序确认后, 再亚克隆至原核表达载体中。从SDS -PAGE凝胶中回收... 　目的: 表达SARS冠状病毒核衣壳蛋白(N蛋白),并以表达产物为免疫原制备特异性单克隆抗体 (mAb)。方法: 采用RT- PCR方法, 从灭活的病毒抗原标本中扩增编码N蛋白的基因。测序确认后, 再亚克隆至原核表达载体中。从SDS -PAGE凝胶中回收原核表达产物后免疫BALB/c小鼠, 经融合、筛选制备特异性mAb。结果: 从标本中扩增出 1 269bp的DNA, 测序结果证实为N蛋白基因。将该基因克隆至原核表达载体中后, 在大肠杆菌中获得了较好的表达。表达产物经SDS- PAGE后, 在Mr约为 43 000处可见 1条明显的诱导表达带。Westernblot的结果表明, 该电泳带与SARS患者的恢复期血清呈特异的免疫反应。从SDS- PAGE凝胶中回收表达产物并免疫BALB/c小鼠, 制备出 3株抗N蛋白的mAb。这些mAb与SDS- PAGE凝胶上Mr约为 43 000的蛋白带也呈现很强的免疫反应。结论: 所获的重组N蛋白及特异性mAb, 将为进一步建立SARS病毒感染早期诊断的方法奠定了基础。 展开更多

关键词 SARS冠状病毒 核衣壳蛋白 原核表达 单克隆抗体

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应用噬菌体肽库研究银屑病相关的角蛋白K14,K17模拟表位(英文) 被引量：3

11

作者 张亮 刘玉峰 +2 位作者 杨乔欣 任君萍 黎志东 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第24期2244-2249,共6页

目的　获得与银屑病相关的角蛋白 K1 4和 K1 7同源序列的模拟表位 ,评估含有此基序的短肽与银屑病发病的关系 .方法　将 1株抗角蛋白 K1 4和 K1 7同源序列的单克隆抗体 (m Ab) 5 G5经亲和层析纯化后进行生物素标记 ,对噬菌体递呈的随机 ... 目的　获得与银屑病相关的角蛋白 K1 4和 K1 7同源序列的模拟表位 ,评估含有此基序的短肽与银屑病发病的关系 .方法　将 1株抗角蛋白 K1 4和 K1 7同源序列的单克隆抗体 (m Ab) 5 G5经亲和层析纯化后进行生物素标记 ,对噬菌体递呈的随机 6肽库进行 3轮淘洗并进行 EL ISA检测 .挑取1 0个阳性克隆进行 DNA测序 ,分析所获数据 ,并进行竞争阻断实验 .结果　氨基酸序列分析表明模拟短肽的基序为 VL(x) AG,角蛋白 K1 4、K1 7的同源序列及链球菌 M蛋白均含有此基序 .携有这些短肽的噬菌体可与 m Ab5 G5特异结合 ,并可阻断单抗与角蛋白反应 .结论　含有此基序的短肽可以模拟 m Ab5 G5识别的与银屑病相关的角蛋白 K1 4和 K1 7同源序列的抗原表位 ,为银屑病特异性短肽的研究提供了一个新途径 。 展开更多

关键词 角蛋白 银屑病 肽库 募肽类 噬菌体 抗体 单克隆

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肺结核48例临床分析

12

作者 任君萍 《张家口医学院学报》 1999年第5期58-58,共1页

关键词 肺结核 诊断 治疗

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含日本脑炎病毒pre-M/E蛋白基因真核表达质粒的构建及免疫效果观察 被引量：2

13

作者 张富泉 任君萍 +2 位作者 马文煜 姜绍谆 黄庆生 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1997年第2期20-22,共3页

本文作者将日本脑炎病毒（ＪＥＶ）的前膜蛋白和囊膜蛋白（ｐｒｅＭ／Ｅ）的基因插入到真核表达载体ｐＳＧ５中，构建了重组表达载体ｐＳＧＪＥ。用其体外转染地鼠肾细胞ＢＨＫ－２１，经间接免疫荧光法（ＩＦＡ）检测，证实了ＪＥＶ－... 本文作者将日本脑炎病毒（ＪＥＶ）的前膜蛋白和囊膜蛋白（ｐｒｅＭ／Ｅ）的基因插入到真核表达载体ｐＳＧ５中，构建了重组表达载体ｐＳＧＪＥ。用其体外转染地鼠肾细胞ＢＨＫ－２１，经间接免疫荧光法（ＩＦＡ）检测，证实了ＪＥＶ－Ｅ的瞬时表达。大量制备和纯化重组质粒，经肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，结果显示该重组质粒可明显促进小鼠在受到ＪＥＶ活病毒攻击后特异性抗体的产生。 展开更多

关键词 日本脑炎病毒 基因 表达 疫苗 质粒 构建

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抗单纯疱疹病毒单克隆抗体CHA9靶基因的定位 被引量：2

14

作者 黎志东 杨乔欣 +3 位作者 任君萍 马文煜 吕欣 陈峥 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期272-274,共3页

目的 :获得单纯疱疹病毒 (HSV)新糖蛋白 g30K的部分特征氨基酸信息 ,以期对该蛋白基因的准确定位有所帮助。方法 :将针对HSV新糖蛋白 g30K的单克隆抗体 (mAb)CHA9生物素化后 ,淘筛噬菌体随机 12肽库 ,经 3轮筛选后进行ELISA检测。随机挑... 目的 :获得单纯疱疹病毒 (HSV)新糖蛋白 g30K的部分特征氨基酸信息 ,以期对该蛋白基因的准确定位有所帮助。方法 :将针对HSV新糖蛋白 g30K的单克隆抗体 (mAb)CHA9生物素化后 ,淘筛噬菌体随机 12肽库 ,经 3轮筛选后进行ELISA检测。随机挑取 10个阳性克隆进行DNA测序 ,并进行序列比较以得到保守序列 ,然后对其疏水性进行预测。结果 :得到的保守氨基酸序列 (motif)为 PH/KHXHXGS 。携有此短肽的噬菌体可与CHA9特异结合而不与其它IgG出现交叉反应。疏水性分析证明其可能构成一个表位。结论 :筛选到一段具有含mAbCHA9靶抗原 HSV新糖蛋白 g30K部分氨基酸特征的短肽 ,为新基因的预测提供了参考依据 。 展开更多

关键词 单纯疱疹病毒 糖蛋白 随机肽库 基因定位

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乙型脑炎病毒E蛋白N端片段在大肠杆菌中的表达 被引量：1

15

作者 柳丽娟 吴玉水 +4 位作者 马文煜 宋建华 黄庆生 任君萍 丁天兵 《动物医学进展》 CSCD 2003年第4期108-109,共2页

利用 PCR扩增乙型脑炎病毒 E蛋白基因 5′端片段 ,克隆入原核表达载体 p ET-2 8a,转化大肠杆菌 BL2 1 ( ED3 )。经 IPTG诱导表达后 ,SDS-PAGE分析表达产物。结果表明 ,所表达的E蛋白片段的分子量约为 3 .4万 ,表达量约占菌体总蛋白的 3... 利用 PCR扩增乙型脑炎病毒 E蛋白基因 5′端片段 ,克隆入原核表达载体 p ET-2 8a,转化大肠杆菌 BL2 1 ( ED3 )。经 IPTG诱导表达后 ,SDS-PAGE分析表达产物。结果表明 ,所表达的E蛋白片段的分子量约为 3 .4万 ,表达量约占菌体总蛋白的 3 5%。 JEV E蛋白片段在大肠杆菌中的成功表达 ,为制备 JE实验室诊断抗原和分析 展开更多

关键词 乙型脑炎 病毒E蛋白 N端片段 大肠杆菌 基因表达 实验室 诊断 抗原 病毒性疾病

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病毒受体的研究方法 被引量：5

16

作者 丁天兵 任君萍 马文煜 《中国病毒学》 CSCD 2006年第2期189-193,共5页

关键词 病毒 受体 方法

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高迁移率族蛋白1在大肠埃希菌中的高效表达以及纯化 被引量：1

17

作者 姜南艳 张伟 +3 位作者 任君萍 顾炳权 沈建军 张惠中 《现代检验医学杂志》 CAS 2007年第3期26-28,共3页

目的克隆、表达高迁移率族蛋白1(HMGB1)。方法从人外周血淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得HMGB1基因;将该基因克隆到PMD18-T载体中,测序鉴定;将HMGB1基因插入pET32-A表达载体中,30℃诱导表达4h,进行SDS-PAGE分析;目的蛋白在变性条件下... 目的克隆、表达高迁移率族蛋白1(HMGB1)。方法从人外周血淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得HMGB1基因;将该基因克隆到PMD18-T载体中,测序鉴定;将HMGB1基因插入pET32-A表达载体中,30℃诱导表达4h,进行SDS-PAGE分析;目的蛋白在变性条件下经Ni2+-NTA亲和层析纯化后用Western-Blot证实。结果DNA测序证明,获得了HMGB1基因,其序列与Gen Bank中报道序列完全一致;SDS-PAGE分析表明,HMGB1蛋白在原核中获得高效表达,表达量约占菌体总蛋白的32%;诱导表达产物主要以包涵体形式存在,6 His-NTA纯化后获得目的蛋白,Western-Blot结果显示纯化蛋白具有良好的抗原性。结论成功表达和纯化了HMGB1基因。 展开更多

关键词 HMGB1 逆转录 聚合酶链反应 基因表达

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日本脑炎病毒E蛋白在酵母双杂交系统中的表达及其对报告基因激活作用的检测 被引量：1

18

作者 丁天兵 张伟 +1 位作者 任君萍 马文煜 《生物技术通讯》 CAS 2003年第2期109-112,共4页

用日本脑炎病毒(JEV)E蛋白基因片段构建酵母双杂交诱饵载体,并检测其表达产物对酵母细胞有无毒性作用及对报告基因有无激活作用。用RT-PCR从JEV感染的鼠脑中扩增出JEVE蛋白基因片段,克隆入pUC19质粒,经测序正确后,再亚克隆入酵母双杂交... 用日本脑炎病毒(JEV)E蛋白基因片段构建酵母双杂交诱饵载体,并检测其表达产物对酵母细胞有无毒性作用及对报告基因有无激活作用。用RT-PCR从JEV感染的鼠脑中扩增出JEVE蛋白基因片段,克隆入pUC19质粒,经测序正确后,再亚克隆入酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中。将重组质粒导入酵母菌AH109,检测其表达产物在酵母细胞中对报告基因有无激活作用。成功获得JEVE蛋白基因片段,表达的E蛋白对酵母菌AH109无毒性,对报告基因亦无激活作用。为利用酵母双杂交GAL4系统3进行JEV细胞受体蛋白的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 日本脑炎病毒 E蛋白 酵母双杂交系统 报告基因 激活作用 检测 受体

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抗Doppel蛋白(叠朊蛋白)单克隆抗体细胞系的建立及其初步鉴定

19

作者 丁天兵 肖毅 +7 位作者 任君萍 吴玉水 杨敬 胡玲 郭振英 宋建华 马文煜 秦克锋 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期F003-F003,共1页

关键词 叠朊蛋白 单克隆抗体 杂交瘤 细胞系 抗Doppel蛋白

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真核表达单纯疱疹病毒糖蛋白模拟表位mgC及其基因免疫效果的观察

20

作者 杨乔欣 马文煜 +3 位作者 李圣青 黎志东 张亮 任君萍 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期422-423,共2页

目的鉴定单纯疱疹病毒HSV糖蛋白CgC一个短肽模拟表位mgC基因作为HSVDNA表位疫苗的可能性。方法将mgC基因克隆入真核载体pcDNA3.1中,并在CHO细胞中表达,免疫荧光法鉴定表达效果。DNA免疫不同种属小鼠,ELISA法观察HSVgC特异结合抗体的诱... 目的鉴定单纯疱疹病毒HSV糖蛋白CgC一个短肽模拟表位mgC基因作为HSVDNA表位疫苗的可能性。方法将mgC基因克隆入真核载体pcDNA3.1中,并在CHO细胞中表达,免疫荧光法鉴定表达效果。DNA免疫不同种属小鼠,ELISA法观察HSVgC特异结合抗体的诱生。结果含mgC的真核载体在哺乳动物细胞中可以成功表达外源蛋白。重组载体DNA在BALB/c小鼠体内可诱导抗天然HSVgC蛋白的抗体,而在C57BL鼠体内未见明显的抗体反应。结论成功构建了可表达模拟表位mgC的真核表达载体。证明了应用gC模拟短肽基因作为DNA免疫的基因源是可行的,但其对不同种属动物的反应性不同,提示DNA免疫还应针对不同免疫对象调整免疫策略。这一研究为HSV多表位组合多肽疫苗的研制提供了一个新的备选组份。 展开更多

关键词 单纯疱疹病毒 糖蛋白 表位 真核表达 基因免疫

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