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重组杆状病毒表达的EIAVEnv蛋白与含有env基因重组痘苗病毒的联合免疫 被引量：2
1
作者 代春铭 张晓燕 +2 位作者 张然然 邵一鸣 沈荣显 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期410-414,共5页
目的 :构建新型的马传染性贫血病毒 (EIAV)的候选疫苗。方法 :利用BAC To BAC杆状病毒表达系统 ,将中国马传贫驴白细胞弱毒疫苗 (EIAVDLV)及其亲本株 (EIAVLN)env基因导入到杆状病毒基因组中。转染昆虫细胞后 ,得到的重组病毒用SDS PAGE... 目的 :构建新型的马传染性贫血病毒 (EIAV)的候选疫苗。方法 :利用BAC To BAC杆状病毒表达系统 ,将中国马传贫驴白细胞弱毒疫苗 (EIAVDLV)及其亲本株 (EIAVLN)env基因导入到杆状病毒基因组中。转染昆虫细胞后 ,得到的重组病毒用SDS PAGE和Westernblot检测表达产物。以本实验室构建的含有EIAVenv基因的重组痘苗病毒 ,单独或与重组杆状病毒表达的EIAVEnv蛋白联合免疫小鼠。结果 :构建的重组杆状病毒能正确表达全长Env蛋白。与单独免疫组相比 ,联合免疫组免疫应答显著增强 ,其中中和抗体的滴度提高5～ 9倍。结论 :含有EIAVenv基因的重组痘苗病毒与Env蛋白抗原联合免疫 ,能够诱导高滴度的中和抗体。 展开更多
关键词 EIAV Env蛋白 重组杆状病毒 重组痘苗病毒 免疫应答
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EIAV env基因在痘苗病毒中的表达及其免疫效果的观察
2
作者 代春铭 张晓燕 +1 位作者 邵一鸣 沈荣显 《中国病毒学》 CSCD 2003年第5期473-477,共5页
将马传贫驴白细胞弱毒疫苗及其亲本株env基因克隆到痘苗病毒表达载体pSC65的pE/L启动子下游,通过同源重组插入到痘苗病毒天坛株基因组TK区,经蓝白斑筛选获得重组痘苗病毒rvv-DLVenv和rvv-LNenv,Western blot检测目的蛋白的表达,结果表... 将马传贫驴白细胞弱毒疫苗及其亲本株env基因克隆到痘苗病毒表达载体pSC65的pE/L启动子下游,通过同源重组插入到痘苗病毒天坛株基因组TK区,经蓝白斑筛选获得重组痘苗病毒rvv-DLVenv和rvv-LNenv,Western blot检测目的蛋白的表达,结果表明重组痘苗病毒能够有效表达完整的EIAV Env蛋白,其肌肉接种免疫小鼠后,表达的目的蛋白具有良好的免疫原性,能够诱导机体产生有效的体液和细胞免疫应答,其中以细胞免疫效果更为显著,CTL特异性裂解最高可达28％。本研究为EIAV基因工程疫苗的开发研制奠定了基础。 展开更多
关键词 重组痘苗病毒 免疫应答 马传染性贫血病病毒 EIAVEnv蛋白基因 痘苗病毒 表达
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重组杆状病毒表达的EIAV Env蛋白与含有env基因重组痘苗病毒的联合免疫
3
作者 代春铭 张晓燕 +2 位作者 张然然 邵一鸣 沈荣显 《畜牧市场》 2009年第2期12-16,共5页
目的:构建新型的马传染性贫血病毒(EIAV)的候选疫苗。方法:利用BAC-To-BAC杆状病毒表达系统,将中国马传贫驴白细胞弱毒疲苗(EIAV DLV)及其亲本株(EIAV LN)env基因导入到杆状病毒基因组中。转染昆虫细胞后,得到的重组病毒用SDS-PAGE和Wes... 目的:构建新型的马传染性贫血病毒(EIAV)的候选疫苗。方法:利用BAC-To-BAC杆状病毒表达系统,将中国马传贫驴白细胞弱毒疲苗(EIAV DLV)及其亲本株(EIAV LN)env基因导入到杆状病毒基因组中。转染昆虫细胞后,得到的重组病毒用SDS-PAGE和Western blot检测表达产物。以本实验室构建的含有EIAV Env基因的重组痘苗病毒,单独或与重组杆状病毒表达的EIAV Env蛋白联合免疫小鼠。结果:构建的重组杆状病毒能正确表达全长Env蛋白。与单独免疫组相比,联合免疫组免疫应答显著增强,其中中和抗体的滴度提高5～9倍。结论:含有EIAV Env基因的重组痘苗病毒与Env蛋白抗原联合免疫,能够诱导高滴度的中和抗体。 展开更多
关键词 EIAV Env蛋白 重组杆状病毒 重组痘苗病毒 免疫
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含鸡传染性贫血病毒VP1、VP2基因重组火鸡疱疹病毒的构建 被引量：4
4
作者 刘长军 王端 +5 位作者 秦运安 鄢明华 王笑梅 代春铭 李刚 赵晓岩 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期412-415,共4页
采用PCR方法 ,以传染性贫血病毒 (CIAV)DNA为模板 ,扩增并克隆了CIAV的VP1、VP2基因 ,并进行了序列分析。经基因修饰 ,将这两个基因分别加上表达元件后连接作为目的基因。通过同源重组技术 ,将目的基因插入到火鸡疱疹病毒 (HVT)gC基因... 采用PCR方法 ,以传染性贫血病毒 (CIAV)DNA为模板 ,扩增并克隆了CIAV的VP1、VP2基因 ,并进行了序列分析。经基因修饰 ,将这两个基因分别加上表达元件后连接作为目的基因。通过同源重组技术 ,将目的基因插入到火鸡疱疹病毒 (HVT)gC基因区 ,构建了一株含CIAVVP1、VP2基因表达单元的重组HVT(VP1VP2_rHVT)。体内、体外传代结果表明该重组病毒性状稳定。采用PCR扩增及Southernblot杂交检测 ,证实了CIAVVP1、VP2基因的插入。 展开更多
关键词 鸡传染性贫血病毒 重组火鸡疱疹病毒 VP1、VP2基因
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马立克氏病病毒(MDV)814株糖蛋白B(gB)基因的克隆及序列分析 被引量：2
5
作者 刘长军 王端 +2 位作者 赵晓岩 鄢明华 代春铭 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第S1期28-31,共4页
从感染致弱的Ⅰ型马立克氏病病毒（ＭＤＶ）８１４株的细胞中提取病毒基因组ＤＮＡ，以ｄｉｇｏｘｉｎｇｅｎｉｎ标记ＭＤＶ强毒ＧＡ株糖蛋白Ｂ（ｇＢ）基因片段作为探针，进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ－ｂｌｏｔ杂交定位。将包含ＭＤＶ ８１... 从感染致弱的Ⅰ型马立克氏病病毒（ＭＤＶ）８１４株的细胞中提取病毒基因组ＤＮＡ，以ｄｉｇｏｘｉｎｇｅｎｉｎ标记ＭＤＶ强毒ＧＡ株糖蛋白Ｂ（ｇＢ）基因片段作为探针，进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ－ｂｌｏｔ杂交定位。将包含ＭＤＶ ８１４株ｇＢ基因的基因组片段克隆于ｐＵＣ１９质粒中。酶切鉴定后，进行序列分析。结果表明该 ｇＢ基因具有高度的保守性，编码区序列同已发表的Ⅰ型马立克氏病病毒 ｇＢ基因序列完全一致，但启动子上游区域有差异。 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 GB基因
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鸡马立克氏病基因工程疫苗的研究进展
6
作者 代春铭 《中国动物保健》 2000年第2期8-9,共2页
鸡马立克氏病的预防是养鸡业面临的重大问题之一,我国养鸡业每年因该病造成的损失近亿元。为此,针对马立克氏病的疫苗开发一直非常活跃,但新的强毒株的出现,使疫苗的预防效果不能尽如人意。目前,基因工程疫苗的开发、应用已全面展开,这... 鸡马立克氏病的预防是养鸡业面临的重大问题之一,我国养鸡业每年因该病造成的损失近亿元。为此,针对马立克氏病的疫苗开发一直非常活跃,但新的强毒株的出现,使疫苗的预防效果不能尽如人意。目前,基因工程疫苗的开发、应用已全面展开,这意味着疫苗可望战胜强毒的侵袭,实现充分的预防效果,本文详细介绍了基因工程苗的研究进展。 展开更多
关键词 鸡马立克氏病 基因工程疫苗 免疫机理
全文增补中
表达EIAV Gag蛋白的DNA载体与重组痘苗病毒联合免疫效果的观察
7
作者 代春铭 张晓燕 +4 位作者 王书晖 刘颖 段丹丽 沈荣显 邵一鸣 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第20期2057-2061,共5页
将中国马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗及其亲本株的gag基因通过同源重组插入到痘苗病毒天坛株的TK区,经蓝白斑筛选获得重组痘苗病毒rvv-DLVgag和rvv-LNgag.Westernblot检测可知重组痘苗病毒能够有效表达完整的EIAVGag蛋白.使用本实... 将中国马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗及其亲本株的gag基因通过同源重组插入到痘苗病毒天坛株的TK区,经蓝白斑筛选获得重组痘苗病毒rvv-DLVgag和rvv-LNgag.Westernblot检测可知重组痘苗病毒能够有效表达完整的EIAVGag蛋白.使用本实验室构建的表达EIAVDLV和LNGag蛋白的DNA载体单独或与表达相应蛋白的重组痘苗病毒联合免疫小鼠,结果表明各免疫组小鼠体内均产生了针对EIAV的特异性体液和细胞免疫应答.统计学分析显示,联合免疫组与单独免疫组相比,诱导的特异性结合抗体滴度无显著性变化,而淋巴细胞增殖应答和CTL水平则显著增强,CTL杀伤率最高可达31%,DLVGag蛋白与LNGag蛋白诱导的免疫应答强度无显著性差异.研究结果有助于阐明我国按照传统路线研制成功的EIAV弱毒疫苗的免疫机制,并为EIAV基因工程疫苗的开发研制奠定基础. 展开更多
关键词 g蛋白 重组痘苗病毒 联合免疫 表达 LN 免疫组 CTL 弱毒疫苗 马传染性贫血病毒 亲本
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