Fiber-knob嵌合型溶瘤腺病毒对胶质瘤细胞的体外感染和杀伤活性分析

1

作者 刘文茉 王立正 +1 位作者 于彬 于湘晖 《吉林大学学报(理学版)》 北大核心 2025年第1期201-206,共6页

针对恶性胶质瘤是颅内最常见的恶性肿瘤,患者的平均生存时间较短,传统治疗方法难以实现根治,而新兴的溶瘤病毒疗法存在扩散能力有限,治疗效果不理想等问题,通过基因工程技术对人5型腺病毒(Ad5)衣壳蛋白进行修饰,构建一种纤维蛋白头节区(... 针对恶性胶质瘤是颅内最常见的恶性肿瘤,患者的平均生存时间较短,传统治疗方法难以实现根治,而新兴的溶瘤病毒疗法存在扩散能力有限,治疗效果不理想等问题,通过基因工程技术对人5型腺病毒(Ad5)衣壳蛋白进行修饰,构建一种纤维蛋白头节区(knob)嵌合替换型溶瘤腺病毒,以提升其对胶质瘤细胞的感染和靶向能力.利用来自B亚群Ad37的knob替换Ad5的knob,证实其可利用唾液酸为受体,从而增强对胶质瘤等CAR(coxsackievirus and adenovirus receptor)低表达肿瘤细胞的感染和杀伤能力,并在体外模型中提升对血脑屏障的穿透效率,为恶性胶质瘤的治疗提供新的解决方案. 展开更多

关键词 恶性胶质瘤 溶瘤腺病毒 基因工程

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铁、锰氧化还原细菌研究概况 被引量：12

2

作者 鲍志戎 于湘晖 +2 位作者 李惟 杨宏 张杰 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第1期48-50,共3页

铁、锰氧化还原细菌研究概况鲍志戎，于湘晖，李惟（吉林大学分子生物学系，长春１３００２３）杨宏，张杰（中国市政工程东北设计院，长春１３００２１）组成地壳的各种元素的化合态和分布地域都在不断变化之中，通常，把这种变化称为... 铁、锰氧化还原细菌研究概况鲍志戎，于湘晖，李惟（吉林大学分子生物学系，长春１３００２３）杨宏，张杰（中国市政工程东北设计院，长春１３００２１）组成地壳的各种元素的化合态和分布地域都在不断变化之中，通常，把这种变化称为元素循环。元素循环与生命过程密切相... 展开更多

关键词 细菌 氧化还原细菌 铁 锰

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重组HIV-1腺病毒载体活疫苗的冻干保护剂研究 被引量：10

3

作者 张一折 滕洪刚 +3 位作者 吕帅然 姜春来 于湘晖 孔维 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第2期104-106,共3页

目的研制重组HIV-1腺病毒载体活疫苗的冻干保护剂。方法在重组HIV-1腺病毒载体活疫苗中加入不同配比的保护剂,在适宜条件下制备成冻干剂型。根据冻干后外观、病毒滴度和热稳定性试验等结果,筛选出冻干保护剂的最适配方。结果以人血白蛋... 目的研制重组HIV-1腺病毒载体活疫苗的冻干保护剂。方法在重组HIV-1腺病毒载体活疫苗中加入不同配比的保护剂,在适宜条件下制备成冻干剂型。根据冻干后外观、病毒滴度和热稳定性试验等结果,筛选出冻干保护剂的最适配方。结果以人血白蛋白、海藻糖、甘露醇、右旋糖苷和蔗糖等成分按比例配伍制备的保护剂,对重组HIV-1腺病毒载体活疫苗显示了较好的保护作用。冻干前后疫苗病毒感染性滴度下降在0.17LogCC ID50/ml以内;37℃放置1周,滴度下降0.3LogCC ID50/ml左右;37℃放置3周后,滴度下降约为0.6LogCC ID50/ml。而无保护剂的液体疫苗对照于37℃放置1周,滴度下降近2.5个LogCC ID50/ml。结论以人血白蛋白、海藻糖、甘露醇、右旋糖苷和蔗糖等配伍而制备的保护剂效果较好。 展开更多

关键词 HIV-1腺病毒载体活疫苗 冷冻干燥 保护剂

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四川地区宫颈癌患者组织中部分高危HPV亚型感染及E6基因序列分析 被引量：5

4

作者 邱爱东 乌恩奇 +6 位作者 任源 于湘晖 吴永革 金英花 姜春来 查晓 孔维 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第5期441-444,共4页

目的 调查四川地区宫颈癌患者组织中高危人乳头瘤病毒（HPV）33、52和58亚型的感染状况及E6基因突变特性,为制备适合中国人群的HPV疫苗提供流行病学资料.方法 采用PCR技术,并结合基因测序分析.结果 对四川地区2003～2004年60份宫颈癌患... 目的 调查四川地区宫颈癌患者组织中高危人乳头瘤病毒（HPV）33、52和58亚型的感染状况及E6基因突变特性,为制备适合中国人群的HPV疫苗提供流行病学资料.方法 采用PCR技术,并结合基因测序分析.结果 对四川地区2003～2004年60份宫颈癌患者癌组织DNA进行HPV检测,获得HPV52和HPV58亚型各4份,检出率为6.7%;HPV33亚型1份,检出率为1.7%.对所获得的各份HPV33、52和58E6基因测序,均有碱基突变.结论 HPV52型感染率在四川地区相对较高.与GenBank标准株相比,四川地区发现的HPV33和HPV52 E6基因有多处突变,与日本发现的HPV33和HPV52突变株相近. 展开更多

关键词 人乳头瘤病毒 宫颈癌 E6基因 突变

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HIV-1膜蛋白在甲醇型酵母中的表达和抗原性的研究 被引量：3

5

作者 赵丽辉 于湘晖 +3 位作者 姜春来 吴永革 沈家骢 孔维 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期457-461,共5页

通过计算机辅助分析了中国广西B/C重组亚型HIV-1病毒株的Env蛋白(共851氨基酸残基)氨基酸的疏水性、潜在的抗原表位,与其它亚型的Env蛋白在氨基酸组成的保守性方面进行了比较,选择了env基因的469-511aa,538-674aa和700-734aa三段保守性... 通过计算机辅助分析了中国广西B/C重组亚型HIV-1病毒株的Env蛋白(共851氨基酸残基)氨基酸的疏水性、潜在的抗原表位,与其它亚型的Env蛋白在氨基酸组成的保守性方面进行了比较,选择了env基因的469-511aa,538-674aa和700-734aa三段保守性及抗原性都较强的氨基酸序列构建成嵌合基因,将嵌合基因构建到毕赤酵母Pichia pastoris表达载体pPICZαB中,利用甲醇诱导表达,对表达的蛋白进行了Wester blot和SDS-PAGE分析,结果表明,三段基因能在毕赤酵母Pichia pastoris中表达,产物为40kD的特异性诱导糖蛋白,通过Ni-sepharose 4B金属Ni螯合层析柱分离纯化表达蛋白,酶联免疫检测结果表明,纯化的抗原有很强的抗原特异性,可以用于HIV检测试剂的研制和开发。 展开更多

关键词 毕赤酵母 ENV基因 嵌合基因 抗原特异性

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艾滋病疫苗国家工程实验室的设计与筹建 被引量：3

6

作者 张喜珍 于湘晖 +4 位作者 吴永革 陈妍 姜春来 单亚明 孔维 《实验技术与管理》 CAS 北大核心 2014年第9期229-231,共3页

从实验室的基础设施建设、人才与团队建设及实验室运行机制、制度建设等方面介绍了吉林大学艾滋病疫苗国家工程实验室的设计与筹建过程、实验室建设的整体思路和设计原则,以及细胞实验室和疫苗研究平台等功能实验室的建设。该实验室建... 从实验室的基础设施建设、人才与团队建设及实验室运行机制、制度建设等方面介绍了吉林大学艾滋病疫苗国家工程实验室的设计与筹建过程、实验室建设的整体思路和设计原则,以及细胞实验室和疫苗研究平台等功能实验室的建设。该实验室建设过程中注意节约资金,合理利用现有资源,打造出一个既具有产学研结合特色,又适合高科技人才培养与发展的,结构科学、布局合理、具备良好科研氛围和动力的疫苗国家工程实验室。 展开更多

关键词 国家工程实验室 艾滋病疫苗 基础设施 实验团队

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鼠白细胞介素15真核表达质粒的构建及活性鉴定 被引量：3

7

作者 姜春来 马红霞 +3 位作者 于湘晖 吴永革 李惟 孔维 《吉林大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期238-240,共3页

从经PMA刺激的小鼠脾细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术获得鼠白细胞介素15(mIL-15)基因,将其克隆至真核表达质粒VR1012中,转染COS-7细胞,将转染细胞裂解,Westernblot检测.表明获得了mIL-15真核表达载体,其具有完整的带有信号肽的mIL-15序... 从经PMA刺激的小鼠脾细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术获得鼠白细胞介素15(mIL-15)基因,将其克隆至真核表达质粒VR1012中,转染COS-7细胞,将转染细胞裂解,Westernblot检测.表明获得了mIL-15真核表达载体,其具有完整的带有信号肽的mIL-15序列,重组结果正确,Westernblot检测阳性.并获得有生物活性的mIL-15蛋白. 展开更多

关键词 鼠白细胞介素15 克隆 活性鉴定

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四川地区宫颈癌组织HPV18和HPV45 E6基因突变分析 被引量：2

8

作者 乌恩奇 任源 +7 位作者 邱爱东 张国楠 姜春来 樊英 于湘晖 吴永革 查晓 孔维 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2006年第2期263-267,共5页

采用聚合酶链反应技术对四川地区2003～2004年收集的60例宫颈癌患者的癌组织DNA进行人乳头瘤病毒（HPV）E6基因扩增，获得HPV18和45型E6基因．序列分析发现，18型三例E6基因有同样的两处同义突变；45型两例E6基因发生突变，一例有两处... 采用聚合酶链反应技术对四川地区2003～2004年收集的60例宫颈癌患者的癌组织DNA进行人乳头瘤病毒（HPV）E6基因扩增，获得HPV18和45型E6基因．序列分析发现，18型三例E6基因有同样的两处同义突变；45型两例E6基因发生突变，一例有两处碱基突变，另一例发生六处碱基突变，其中两处涉及氨基酸变化，均位于E6抗原决定簇区．HPV45型E6基因中134位c→t，157位c→t，259位g→t和341位t→c的碱基点突变未见报道．另外，该地区HPV18和45型突变株之间存在碱基互变，它们之间的最小差异比野生型HPV18和HPV45之间的差异小4．05％，该数值比在非洲发现的突变株的要小很多，该结果支持HPV18和HPV45可能起源于非洲的观点． 展开更多

关键词 HPV-18 HPV-45 E6突变 宫颈癌

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中国流行株HIV-1B/C重组亚型包膜蛋白真核表达载体的构建及稳定表达细胞株的筛选 被引量：2

9

作者 马红霞 于湘晖 +2 位作者 姜春来 吴永革 孔维 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第4期365-367,共3页

目的获得高质量的中国流行株HIV-1B/C重组亚型包膜蛋白抗原。方法改造表达载体,以构建中国流行株HIV-1B/C重组亚型包膜蛋白基因带有筛选标记的真核细胞表达质粒,将所构建质粒转染真核细胞,用含有抗性的培养基筛选出能够高效、持续表达... 目的获得高质量的中国流行株HIV-1B/C重组亚型包膜蛋白抗原。方法改造表达载体,以构建中国流行株HIV-1B/C重组亚型包膜蛋白基因带有筛选标记的真核细胞表达质粒,将所构建质粒转染真核细胞,用含有抗性的培养基筛选出能够高效、持续表达包膜蛋白的稳定表达细胞株。结果所构建的表达载体pVRPEnv转染细胞后可表达目的蛋白,并建立了稳定表达细胞系。结论获得了可以高效、持续稳定表达中国流行株HIV-1B/C重组亚型包膜蛋白的细胞株。 展开更多

关键词 HIV-1 包膜蛋白 细胞系

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HIV-1外膜蛋白在毕赤酵母中的构建 被引量：2

10

作者 赵丽辉 于湘晖 +3 位作者 姜春来 吴永革 沈家骢 孔维 《分子科学学报》 CAS CSCD 2007年第3期217-219,共3页

为了进一步研究HIV-1外膜蛋白的结构和功能,获得足够量的糖蛋白,对HIV-1的外膜蛋白Env进行了修饰,利用PCR技术克隆目的基因,把Env基因构建到毕赤酵母Pichia pastoris表达载体中,把pPICZαB-Env表达载体转化到酵母中,根据基因重组技术,使... 为了进一步研究HIV-1外膜蛋白的结构和功能,获得足够量的糖蛋白,对HIV-1的外膜蛋白Env进行了修饰,利用PCR技术克隆目的基因,把Env基因构建到毕赤酵母Pichia pastoris表达载体中,把pPICZαB-Env表达载体转化到酵母中,根据基因重组技术,使Env基因和酵母基因组重组,筛选阳性重组子. 展开更多

关键词 毕赤酵母 ENV基因 重组子

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HIV-1中和抗体检测方法的建立 被引量：1

11

作者 赵东海 张喜珍 +2 位作者 马红霞 孔维 于湘晖 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第9期810-812,共3页

目的以荧光素酶作为报告基因,表达假病毒,建立快速、有效的HIV-1中和抗体检测方法。方法将HIV-1中国流行株B/C重组亚型和C亚型Envelope基因的真核表达质粒分别与带有荧光素酶报告基因的pNL4-3.Luc.R-E质粒共转染293T细胞,培养48h后收获... 目的以荧光素酶作为报告基因,表达假病毒,建立快速、有效的HIV-1中和抗体检测方法。方法将HIV-1中国流行株B/C重组亚型和C亚型Envelope基因的真核表达质粒分别与带有荧光素酶报告基因的pNL4-3.Luc.R-E质粒共转染293T细胞,培养48h后收获含有假病毒的上清液,感染表达CD4受体和一个辅助受体CCR5的HOS细胞,培养72h后,裂解细胞,检测荧光素酶含量。结果HIV-1的B/C重组亚型和C亚型Envelope基因真核表达质粒分别与pNL4-3.Luc.R-E质粒共转染的293T细胞,均有HIV-1结构蛋白Gagpol和Env的表达,相对分子质量分别为55000和160000,用产生的假病毒感染HOS-CD4-CCR5/CXCR4细胞后,产生的荧光素酶含量明显高于对照组。结论已建立了瞬时转染检测HIV-1中和抗体的方法,为今后抗体样本及病毒样本的检测提供了参考。 展开更多

关键词 人免疫缺陷病毒1型 中和抗体 荧光素酶 假病毒

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hKv4.3基因5＇非翻译区序列S160功能分析 被引量：1

12

作者 李皓 姜春来 +3 位作者 于湘晖 吴永革 李惟 孔维 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2008年第7期1384-1389,共6页

hKv4.3基因是形成瞬时外向钾电流Ito的主要分子基础,它在心脏和神经细胞中大量表达,但在其它组织中则未见大量表达.为了研究hKv4.3表达在基因水平的调节,将hKv4.3基因的5′非翻译区的一段序列(+2^+160,称之为S160)克隆到报告质粒中,进... hKv4.3基因是形成瞬时外向钾电流Ito的主要分子基础,它在心脏和神经细胞中大量表达,但在其它组织中则未见大量表达.为了研究hKv4.3表达在基因水平的调节,将hKv4.3基因的5′非翻译区的一段序列(+2^+160,称之为S160)克隆到报告质粒中,进行瞬时表达.发现S160对hKv4.3基因的启动子和SV40的启动子都有强烈的抑制作用,没有方向特异性,但却有位置特异性.经删除突变分析,在S160片段中发现了一个抑制元件S(GAGGGGTTAA),它位于hKv4.3基因中转录起始位点下游20~30bp处.在此基础上,用RT-PCR方法对mRNA进行定量分析,初步确认这个抑制元件对蛋白表达的抑制过程是在翻译水平上. 展开更多

关键词 hKv4.3基因 抑制子 启动子 删除突变

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狗心脏中I_(to)相关钾离子通道表达分析 被引量：1

13

作者 李皓 于湘晖 +3 位作者 姜春来 吴永革 李惟 孔维 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第1期8-11,共4页

目的探讨钾离子通道Kv4·3和Kv1·4在正常与心衰的心肌组织中的表达差别,为进一步阐明心衰的发病机理奠定基础。方法建立狗的心衰模型,用Western blot方法对正常与心衰的狗心肌组织中Kv4·3、Kv1·4及辅助亚基Mink的表... 目的探讨钾离子通道Kv4·3和Kv1·4在正常与心衰的心肌组织中的表达差别,为进一步阐明心衰的发病机理奠定基础。方法建立狗的心衰模型,用Western blot方法对正常与心衰的狗心肌组织中Kv4·3、Kv1·4及辅助亚基Mink的表达进行分析。结果在心衰时,Kv4·3表达有明显下降;Kv1·4表达有所上升,在心肌组织的不同部位,即外层和内层Kv1·4的表达明显不同;同时Mink的表达在心肌外层也有明显下降。结论心衰时,心肌组织中形成Ito的钾离子通道Kv4·3和Kv1·4以及辅助亚基Mink的蛋白表达变化之间可能存在着一些相关性。 展开更多

关键词 心衰 钾离子通道 辅助亚基 表达

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四川地区宫颈癌HPV59型感染及其E6基因突变 被引量：1

14

作者 乌恩奇 任源 +6 位作者 邱爱东 张国楠 姜春来 于湘晖 吴永革 查晓 孔维 《中国病毒学》 CAS CSCD 2005年第6期673-674,共2页

宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤,特定型别的人乳头瘤病毒(HPV)感染是引发宫颈癌的主要因素[1].根据HPV致癌性的不同可分为高危型,低危型.Munoz N[2]等对来自9个国家的1918例宫颈癌组织进行各型HPV筛查,最终确认HPV-16、18、26、31、33、35... 宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤,特定型别的人乳头瘤病毒(HPV)感染是引发宫颈癌的主要因素[1].根据HPV致癌性的不同可分为高危型,低危型.Munoz N[2]等对来自9个国家的1918例宫颈癌组织进行各型HPV筛查,最终确认HPV-16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73及82型为高危型.李洁等[3]用核酸印迹技术对1986至1994年间来自我国14个省市自治区的1008宫颈癌组织进行HPV型别检测,发现HPV-16、18、31、35、51、58等型的存在,并发现各地区主要流行型别随地理位置有所差异. 展开更多

关键词 HPV-59 E6 突变 PCR 宫颈癌

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重组MVA病毒载体疫苗的冻干保护剂研究 被引量：1

15

作者 张一折 姜春来 +4 位作者 王忠诚 于湘晖 吴永革 刘成山 孔维 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第2期174-176,共3页

目的研制重组MVA病毒载体疫苗的耐热冻干保护剂。方法在重组MVA病毒载体疫苗中加入不同配比的保护剂,在适宜的条件下制备成冻干剂型。根据冻后外观、病毒滴度和热稳定性等结果,筛选出保护剂的最适配方。结果以海藻糖、甘露醇、右旋糖苷... 目的研制重组MVA病毒载体疫苗的耐热冻干保护剂。方法在重组MVA病毒载体疫苗中加入不同配比的保护剂,在适宜的条件下制备成冻干剂型。根据冻后外观、病毒滴度和热稳定性等结果,筛选出保护剂的最适配方。结果以海藻糖、甘露醇、右旋糖苷和肌醇等按比例、配伍而成的保护剂,对MVA病毒载体疫苗显示了较好的保护性,疫苗冻干前后病毒滴度下降在0.12LgPFU/ml以内,37℃放置1周,滴度下降0.35LgPFU/ml左右;放置3周,滴度下降不超过1LgPFU/ml。而无保护剂的液体疫苗对照于37℃放置1周,滴度下降近1LgPFU/ml;放置3周,滴度下降3.5LgPFU/ml左右。结论以海藻糖、甘露醇、右旋糖苷和肌醇等配伍而成的保护剂是一种良好的疫苗保护剂。 展开更多

关键词 MVA病毒载体疫苗 冷冻干燥 保护剂 冻干保护剂

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人黏蛋白1串联重复区DNA疫苗诱导小鼠的免疫应答 被引量：1

16

作者 张淑子 张海红 +2 位作者 于湘晖 孔维 李维 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第10期729-732,共4页

目的观察人黏蛋白1串联重复区(MUC1 VNTR)DNA疫苗诱导BALB/c小鼠的体液及细胞免疫应答。方法将含有33个黏蛋白1重复区序列(33m)的重组质粒pVR1012-33m,经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,并加强免疫2次,每次100μg,间隔2周,分别以空载体pVR1012... 目的观察人黏蛋白1串联重复区(MUC1 VNTR)DNA疫苗诱导BALB/c小鼠的体液及细胞免疫应答。方法将含有33个黏蛋白1重复区序列(33m)的重组质粒pVR1012-33m,经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,并加强免疫2次,每次100μg,间隔2周,分别以空载体pVR1012和生理盐水为对照。末次免疫后取小鼠血清及脾淋巴细胞,Western blot检测血清抗体特异性,LDH法检测CTL反应活性,MTS/PMS法检测脾淋巴细胞增殖活性。结果重组质粒免疫组小鼠血清中检出了MUC1 VNTR抗原特异性抗体。用重组质粒pVR1012-33m免疫BALB/c小鼠后,在效靶比为100:1和33:1时,可显著地诱导特异性CTL应答。在MUC1 VNTR抗原肽的刺激下,免疫小鼠脾淋巴细胞得到增殖,与空载体和生理盐水对照组相比,差异均有显著意义。结论DNA疫苗pVR1012-33m在BALB/c小鼠体内可诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答,为预防、治疗性MUC1 VNTR疫苗的研制提供了一定的实验依据。 展开更多

关键词 黏蛋白l串联重复区 DNA疫苗 细胞免疫 体液免疫

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hKv4.3最小功能启动子区与上游抑制元件分析 被引量：1

17

作者 李皓 姜春来 +3 位作者 于湘晖 吴永革 李惟 孔维 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2005年第5期846-851,F006,共7页

通过克隆hKv4.3的启动子区和相关的上游调控元件,对hKv4.3基因在转录水平的调控进行了分析.对启动子区5′端一系列的删除突变分析证明,hKv4.3基因的最小功能启动子区是位于转录起始位点附近的-156～+2bp序列.经序列分析发现,这个启动子... 通过克隆hKv4.3的启动子区和相关的上游调控元件,对hKv4.3基因在转录水平的调控进行了分析.对启动子区5′端一系列的删除突变分析证明,hKv4.3基因的最小功能启动子区是位于转录起始位点附近的-156～+2bp序列.经序列分析发现,这个启动子缺乏典型的TATA-box,却存在另外3个元件,即E-box(CANNTG),CArG-box[CC(A/T)6GG]和CACC-box(GGTGC),其中CArG-box对该启动子活性起关键作用.同时在启动子区找到一个未见报道的大小为10bp的抑制子T,删除抑制子T,则启动子活性增加1倍以上. 展开更多

关键词 hKv4.3 最小功能启动子区 抑制子

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稳定表达HIV-1病毒样颗粒的293细胞系的筛选及其稳定性 被引量：1

18

作者 张喜珍 于湘晖 +4 位作者 赵东海 谷铁军 姜春来 吴永革 孔维 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第3期187-189,共3页

目的获得高效、稳定表达含有HIV-1主要结构蛋白gag、pol和env的病毒样颗粒的293细胞系。方法选择合适的真核细胞表达质粒与带有抗性基因的载体,共转染293真核细胞,用含有抗性的培养基筛选出稳定表达细胞株。结果HIV-1的gag、pol和env蛋... 目的获得高效、稳定表达含有HIV-1主要结构蛋白gag、pol和env的病毒样颗粒的293细胞系。方法选择合适的真核细胞表达质粒与带有抗性基因的载体,共转染293真核细胞,用含有抗性的培养基筛选出稳定表达细胞株。结果HIV-1的gag、pol和env蛋白均在293细胞中获得了表达,且不同代次的293细胞中蛋白表达情况无明显差异。结论成功筛选了稳定表达HIV-1病毒样颗粒的293细胞系,为进一步开发艾滋病疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 人免疫缺陷病毒 病毒样颗粒 细胞系

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课堂教学与大学生科研兴趣培养相结合的实践探索——以吉林大学生命科学学院“生物化学”课程为例 被引量：5

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作者 吴永革 马俊峰 +1 位作者 于湘晖 单亚明 《现代教育科学》 2019年第2期129-133,共5页

科学研究是一项十分艰难、辛苦的工作,如果对它没有浓厚的兴趣,没有十分的热情,则很难持久地进行下去,取得卓越的成就。课堂是学生积累知识、培养能力、提升素养的重要场所,知识的应用离不开科研,如何在课堂教学中培养学生对科研的兴趣... 科学研究是一项十分艰难、辛苦的工作,如果对它没有浓厚的兴趣,没有十分的热情,则很难持久地进行下去,取得卓越的成就。课堂是学生积累知识、培养能力、提升素养的重要场所,知识的应用离不开科研,如何在课堂教学中培养学生对科研的兴趣尤为关键。通过多年教学经验的积累和创新探索,本文从教学方法、教学内容、学习环境三个方面,总结出课堂教学与大学生科研兴趣培养相结合的途径,力争为后续研究指明方向。 展开更多

关键词 课堂教学 科研兴趣培养 教学改革 生物化学

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鼠白细胞介素-2(mIL-2)真核表达质粒的构建及蛋白检测

20

作者 姜春来 马红霞 +3 位作者 于湘晖 吴永革 李惟 孔维 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第3期193-195,共3页

目的构建重组鼠白细胞介素2的真核表达体系,获得mIL2基因的表达质粒,用其提高DNA疫苗的免疫原性。方法从经PMA刺激的小鼠脾细胞中提取总RNA,采用RTPCR技术调取鼠白细胞介素2基因,并将其克隆至真核表达质粒VR1012中,转染COS7细胞,将转染... 目的构建重组鼠白细胞介素2的真核表达体系,获得mIL2基因的表达质粒,用其提高DNA疫苗的免疫原性。方法从经PMA刺激的小鼠脾细胞中提取总RNA,采用RTPCR技术调取鼠白细胞介素2基因,并将其克隆至真核表达质粒VR1012中,转染COS7细胞,将转染细胞裂解,进行Westernblot检测。结果获得完整的带有信号肽的mIL2序列的质粒,经Westernblot检测阳性。结论构建了mIL2真核表达体系,并获得有生物活性的mIL2蛋白。 展开更多

关键词 真核表达质粒 检测 构建 蛋白 Western RT-PCR技术 真核表达体系 白细胞介素-2 COS-7细胞 IL-2基因 blot DNA疫苗 免疫原性 总RNA 细胞裂解 生物活性 脾细胞 PMA 信号肽 转染 小鼠 克隆

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