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切胶纯化表达蛋白包涵体的可行性分析 被引量:38
1
作者 于在江 马学恩 周建华 《生物技术》 CAS CSCD 2007年第3期46-48,共3页
目的:高效率地纯化以包涵体形式表达的蛋白。方法:将SDS-PAGE电泳后的目的蛋白用4mol/L的乙酸钠显现出来,切割下来的目的蛋白可直接用于免疫,将切割下来的目的蛋白装在透析袋中,在电场中将游离的目的蛋白洗脱下来可用于ELISA检测。结果... 目的:高效率地纯化以包涵体形式表达的蛋白。方法:将SDS-PAGE电泳后的目的蛋白用4mol/L的乙酸钠显现出来,切割下来的目的蛋白可直接用于免疫,将切割下来的目的蛋白装在透析袋中,在电场中将游离的目的蛋白洗脱下来可用于ELISA检测。结果:用该法得到的蛋白经ELISA和Western blot检测均能保持其原有的抗原性,并用该法纯化的蛋白成功制备了相应的多抗和单抗。结论:证实了回收的蛋白仍能保留原有的抗原性,与传统的方法比较,方法简单且比较经济实用特别是包涵体,为切胶纯化蛋白提供了一个新的方法。 展开更多
关键词 SDS-PAGE 包涵体 蛋白纯化
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北京西南地区城市人群血压、血脂、血糖状况调查分析 被引量:10
2
作者 柴秀莲 王立岩 +1 位作者 刘吉武 于在江 《北京医学》 CAS 2010年第2期123-126,共4页
目的调查北京西南地区城市在职工作人员血压、血脂、血糖异常的发生率,分析其与正常体重、超重、肥胖的关系。方法在2008年度于我中心体检的41320人中,随机选取城市在职工作人员10000例,年龄在20~60岁人群为样本。按我国体质指数建议指... 目的调查北京西南地区城市在职工作人员血压、血脂、血糖异常的发生率,分析其与正常体重、超重、肥胖的关系。方法在2008年度于我中心体检的41320人中,随机选取城市在职工作人员10000例,年龄在20~60岁人群为样本。按我国体质指数建议指标,分类出体重正常、超重、肥胖人群;再根据不同的年龄段统计出不同人群、不同年龄段高血压、高血脂、高血糖的发生率。结果①在10000例受调查者中,超重2831例,占28.31%;肥胖1436例,占14.36%;体重正常5733例,占57.33%。②体重正常5733例,其中高血压636例(11.09%),高血脂536例(9.35%),高血糖278例(4.85%)。③超重2831例,其中高血压745例(26.32%),高血脂628例(22.18%),高血糖349例(12.33%)。④肥胖1436例,其中高血压588例(40.95%),高血脂454例(31.62%),高血糖234例(16.30%)。结论①北京西南地区城市人群中超重和肥胖人群比例增高趋势明显;②高血压、高血脂、高血糖的发生率与体重的增加有明显关系,不同年龄的发生率不同。 展开更多
关键词 超重 肥胖 血压 血脂 血糖
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猪流感病毒H1N1血凝素基因和神经氨酸酶基因在大肠杆菌中的表达 被引量:3
3
作者 张烨 于在江 +5 位作者 唐启慧 陈禹保 辛丽 陈永坤 陈清轩 舒跃龙 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期162-167,共6页
克隆、表达和鉴定猪流感病毒H1N1 HA,NA基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。在成功克隆猪流感病毒H1N1全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重... 克隆、表达和鉴定猪流感病毒H1N1 HA,NA基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。在成功克隆猪流感病毒H1N1全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重组表达质粒pET32a(+)/HA(截短),pET32a(+)/NA(截短),pGEX4T-1/NA,转化大肠杆菌BL21/Rosetta,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱和GSTrap 4B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果显示,重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致。ELISA和Western blotting试验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。本研究成功克隆和表达了猪流感病毒H1N1 HA、NA基因序列,为猪流感病毒H1N1诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪流感病毒H1N1 血凝素 神经氨酸酶 克隆表达
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流感病毒H3N2血凝素基因和神经氨酸酶基因在大肠杆菌中的表达 被引量:1
4
作者 张烨 于在江 +5 位作者 黄捷勤 唐启慧 陈禹保 辛丽 陈永坤 舒跃龙 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期213-218,共6页
克隆、表达和鉴定流感病毒H3N2 HA,NA基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。在成功克隆流感病毒H3N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重组表... 克隆、表达和鉴定流感病毒H3N2 HA,NA基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。在成功克隆流感病毒H3N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重组表达质粒pET32a(+)/HA(截短),pET32a(+)/NA(截短),pGEX4T-1/HA,转化大肠杆菌BL21/Rosetta,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱和GSTrap 4B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果显示,重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致。ELISA和Western blotting试验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。成功克隆和表达了流感病毒H3N2 HA、NA基因序列,可为流感病毒H3N2诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究提供参考。 展开更多
关键词 流感病毒H3N2 血凝素 神经氨酸酶 克隆表达
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禽流感病毒H5N1血凝素基因和神经氨酸酶基因在真核酵母菌中的表达 被引量:2
5
作者 邹淑梅 于在江 +5 位作者 张烨 辛丽 陈永坤 陈禹保 陈清轩 舒跃龙 《实验动物科学》 2011年第3期1-5,共5页
目的克隆、表达和鉴定禽流感病毒H5N1血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。方法在成功克隆禽流感病毒H5N1全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达... 目的克隆、表达和鉴定禽流感病毒H5N1血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。方法在成功克隆禽流感病毒H5N1全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pMET A上,构建了重组表达质粒pMET A/HA(49~1 587 bp)、pMET A/NA(121~1 200 bp),电转化真核酵母菌pMAD16,甲醇诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果重组蛋白在酵母菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示蛋白表达后形成了二聚体,蛋白纯度占总蛋白的95%以上,ELISA和Western Blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。结论本研究成功克隆和表达了禽流感病毒H5N1 HA、NA基因序列,为禽流感病毒H5N1诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究提供了依据。 展开更多
关键词 禽流感病毒H5N1 血凝素 神经氨酸酶 真核酵母表达
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妊娠晚期流感病毒感染对后代小鼠肺发育的影响
6
作者 张钰 韦红 +2 位作者 周剑芳 于在江 舒跃龙 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1318-1321,1331,共5页
目的:研究妊娠晚期流感病毒感染对后代小鼠肺组织形态和肺表面活性蛋白(surfactant protein,SP)-B、-C表达的影响。方法:用非致死量流感病毒A/四川/SWL1/2009 H1N1稀释液滴鼻感染孕15 d BALB/c孕鼠,待其自然生产,取后代小鼠。称取各时... 目的:研究妊娠晚期流感病毒感染对后代小鼠肺组织形态和肺表面活性蛋白(surfactant protein,SP)-B、-C表达的影响。方法:用非致死量流感病毒A/四川/SWL1/2009 H1N1稀释液滴鼻感染孕15 d BALB/c孕鼠,待其自然生产,取后代小鼠。称取各时点小鼠体重及肺组织重量;观察小鼠肺组织病理学改变;Western blotting法检测肺组织SP-B、-C表达的变化。结果:与对照组相比,感染组小鼠体重明显减轻,肺组织重量轻度增加,肺泡发育程度较低,肺泡隔厚度明显增加,辐射状肺泡计数(radial alveolar counting,RAC)明显减少,肺泡Ⅱ型上皮细胞数量无明显改变;SP-B的表达量在出生当天(P0)降低,在出生后4、7和14 d均明显升高,SP-C的表达在P0升高,在其它各检测时点显著降低。结论:妊娠晚期流感病毒感染可影响后代肺发育,改变后代肺组织SP-B、-C的表达模式,可能对后代肺功能产生深远影响。 展开更多
关键词 甲型流感病毒 H1N1亚型 小鼠 妊娠 肺发育 表面活性蛋白
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孕期流感病毒感染对后代小鼠肺表面活性蛋白表达的影响
7
作者 张钰 韦红 +2 位作者 周剑芳 于在江 舒跃龙 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期422-425,433,共5页
目的研究孕期流感病毒感染对后代小鼠肺组织形态和肺表面活性蛋白(surfactant protein,SP)-A、-D表达的影响,探讨影响机制。方法用非致死量甲型H1N1流感病毒A/四川/SWL1/2009 H1N1稀释液滴鼻感染孕15 d Balb/c孕鼠,在孕19 d随机选取孕... 目的研究孕期流感病毒感染对后代小鼠肺组织形态和肺表面活性蛋白(surfactant protein,SP)-A、-D表达的影响,探讨影响机制。方法用非致死量甲型H1N1流感病毒A/四川/SWL1/2009 H1N1稀释液滴鼻感染孕15 d Balb/c孕鼠,在孕19 d随机选取孕鼠剖宫取其胎盘组织,并收集羊水标本;取胎鼠肺组织。待余下孕鼠自然分娩后,取P0,P4,P7,P14 d小鼠肺组织。观察后代小鼠肺组织病理学改变;检测其肺组织SP-A、-D的表达水平。检测胎盘、胎鼠肺组织流感病毒基因;检测羊水白介素-6(interleukin-6,IL-6),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平。结果与对照组相比,感染组后代小鼠肺泡发育程度较低,肺泡隔厚度明显增加。SP-A的表达量从P4 d开始显著降低;SP-D的表达量从P7 d开始显著升高。未检测到胎盘或胎鼠肺组织流感病毒基因;羊水中IL-6,TNF-α水平明显升高。结论孕期流感病毒感染可能通过造成宫炎症环境间接改变后代肺组织形态和SP-A,-D的表达模式。 展开更多
关键词 流感病毒 肺表面活性蛋白 IL-6 TNF-α
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马传贫驴胎皮肤细胞弱毒疫苗株免疫马后病毒囊膜蛋白特异性抗体参数的测定
8
作者 王登峰 项伟 +3 位作者 郭巍 于在江 简子建 周建华 《新疆农业大学学报》 CAS 2008年第3期16-20,共5页
为研究马传贫驴胎皮肤细胞弱毒疫苗株(FDDV-EIAV)免疫马后体液免疫在免疫保护中的作用,将6匹EIAV阴性马分为2组,第1组(6#,7#,8#,9#),分别接种1 mL 1000TCID50EIAV FDDV11,第2组(4#,5#)接种1 mL驴胎皮肤细胞培养上清作为对照组,定期采集... 为研究马传贫驴胎皮肤细胞弱毒疫苗株(FDDV-EIAV)免疫马后体液免疫在免疫保护中的作用,将6匹EIAV阴性马分为2组,第1组(6#,7#,8#,9#),分别接种1 mL 1000TCID50EIAV FDDV11,第2组(4#,5#)接种1 mL驴胎皮肤细胞培养上清作为对照组,定期采集免疫接种后210 d内的血清,利用ELISA方法测定试验马血清中针对EIAV囊膜蛋白特异抗体参数。通过测定囊膜蛋白特异性抗体滴度、抗体亲和力和抗体构象变化,发现该疫苗免疫马18 d后出现针对囊膜蛋白的特异性抗体,整个监测期内其抗体水平较低;抗体亲和力虽有波动,但亲和力水平较高;抗体构象指数都在2.0附近波动,表示囊膜蛋白特异性抗体主要为构象性抗体。免疫210 d后,所有马均用1 mL 1×10-5血清稀释的EIAV强毒辽宁株(EIAV L21)进行攻击,攻毒后,对照马分别在第10天、第13天出现发热,第16天,第18天死亡,其它所有免疫马未见体温升高和其它临床症状,表明FDDV11能够产生良好的免疫保护作用。抗体参数分析表明FDDV11产生的体液免疫与马传贫致病株感染马后产生体液免疫截然不同,暗示体液免疫在EIAV感染马免疫保护中的可能起着重要作用。 展开更多
关键词 EIAV 体液免疫应答 囊膜蛋白抗体 抗体亲和力 抗体构象
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马传染性贫血病毒基质蛋白p15单克隆抗体的制备
9
作者 张萍 于在江 +4 位作者 韩秀娥 王雪峰 朱远茂 周建华 魏萍 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期730-733,共4页
为制备抗马传染性贫病毒(EIAV)的单克隆抗体(MAb),本研究用纯化的重组EIAV基质蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术,建立了抗EIAV基质蛋白p15抗体的杂交瘤细胞。应用重组p15和EIAV总蛋白为抗原建立的ELISA以及EIAV感... 为制备抗马传染性贫病毒(EIAV)的单克隆抗体(MAb),本研究用纯化的重组EIAV基质蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术,建立了抗EIAV基质蛋白p15抗体的杂交瘤细胞。应用重组p15和EIAV总蛋白为抗原建立的ELISA以及EIAV感染细胞的间接免疫荧光法,对杂交瘤细胞进行了有限稀释法筛选,获得了7株稳定分泌抗p15抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为:1F12、1E2、1E3、4B10、4H7、5E5、4G5。这些抗p15 MAb均能与感染驴胎皮肤细胞的EIAV和经SDS-PAGE分离的EIAV总蛋白中的相应蛋白结合。抗体效价叠加实验表明,这7株MAb中含有至少3种识别不同抗原决定簇的抗体。这些p15 MAb的获得有助于对EIAV和慢病毒的深入研究。 展开更多
关键词 马传染性贫血病毒 基质蛋白p15 单克隆抗体
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流感病毒H3N2血凝素基因和神经氨酸酶基因在真核酵母菌中的表达
10
作者 李梓 张烨 +6 位作者 唐启慧 陈禹宝 于在江 辛丽 陈永坤 陈清轩 舒跃龙 《实验动物科学》 2010年第4期6-10,共5页
目的克隆、表达和鉴定流感病毒H3N2血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。方法在成功克隆流感病毒H3N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体p... 目的克隆、表达和鉴定流感病毒H3N2血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。方法在成功克隆流感病毒H3N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pMET A上,构建了重组表达质粒pMET A/HA(52 bp~1 549 bp)、pMET A/NA(121 bp~1 260 bp),电转化真核酵母菌pMAD16,甲醇诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果重组蛋白在酵母菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示蛋白表达后形成了二聚体,蛋白纯度占总蛋白的95%以上,ELISA和Western Blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。结论本研究成功克隆和表达了流感病毒H3N2 HA、NA基因序列,为流感病毒H3N2诊断试剂和疫苗开发等进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 流感病毒H3N2 血凝素 神经氨酸酶 酵母菌 表达
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98%复硝酚钠粉剂在水稻上的应用效果
11
作者 于在江 汪宗仁 《垦殖与稻作》 2006年第4期63-63,共1页
阐述了98%复硝酚钠粉在水稻上的应用效果。试验结果表明:它是一种新型生物调节剂,成本低、见效快、无公害,能达到增产增收的目的。
关键词 98%复硝酚钠粉剂 调节剂 增产增收 水稻
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大棚黄瓜病虫害防治技术
12
作者 于在江 《新农村(黑龙江)》 2013年第2期70-70,共1页
随着大棚黄瓜面积的逐年增大,冬季人们仍然可以吃到新鲜美味的黄瓜。但在黄瓜的种植和生产过程中仍然会受到各种病虫害的侵扰,大棚黄瓜成株期经常发生的病害有霜霉病、角斑病等,冬季还容易发生各种影响植株和瓜条生长的瓜打顶、苦味... 随着大棚黄瓜面积的逐年增大,冬季人们仍然可以吃到新鲜美味的黄瓜。但在黄瓜的种植和生产过程中仍然会受到各种病虫害的侵扰,大棚黄瓜成株期经常发生的病害有霜霉病、角斑病等,冬季还容易发生各种影响植株和瓜条生长的瓜打顶、苦味瓜等等生理性病害,因此黄瓜生育期必须切实抓好病虫害的防控。 展开更多
关键词 关健词 黄瓜种植 温度 病虫害 防治
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黑龙江省东部玉米高产栽培技术
13
作者 于在江 《新农村(黑龙江)》 2013年第8期151-151,共1页
玉米具有高产、稳产、增产潜力大、适应性强、营养丰富、用途广泛等特点。在黑龙江省玉米区提高玉米单产水平,发挥其巨大的增产潜力对于满足不断增长的社会需求,确保我国粮食生产安全具有十分重大战略意义。
关键词 玉米 高产 栽培技术
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牛传染性鼻气管炎病毒抗体胶体金检测试纸条的制备 被引量:7
14
作者 梅力 李永清 +7 位作者 宋彦军 高晓龙 李佳 杨春江 韦海涛 于在江 王林 冯小宇 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期39-43,I0004,共6页
采用SF 9昆虫细胞-杆状病毒系统重组表达牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白抗原,经纯化鉴定后将gD蛋白用胶体金标记作为示踪抗原,未标记的gD抗原作为捕获抗原,并以羊抗牛IgG抗体作为质控抗体,建立了牛传染性鼻气管炎病毒双抗原夹心法胶体金检... 采用SF 9昆虫细胞-杆状病毒系统重组表达牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白抗原,经纯化鉴定后将gD蛋白用胶体金标记作为示踪抗原,未标记的gD抗原作为捕获抗原,并以羊抗牛IgG抗体作为质控抗体,建立了牛传染性鼻气管炎病毒双抗原夹心法胶体金检测试纸条。试验结果表明,该试纸条检测灵敏度高,特异性良好,与牛口蹄疫病毒、牛病毒性腹泻病毒等阳性血清无交叉反应。使用建立的胶体金试纸条和IDEXX牛传染性鼻气管炎病毒抗体ELISA检测试剂盒同时检测112份牛血清,阳性符合率为93.5%,阴性符合率为96.0%,总符合率为94.6%。说明该试纸条可以应用于临床牛传染性鼻气管炎病毒抗体的诊断和检测。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 gD蛋白 抗体 胶体金 试纸条
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直肠癌误诊腰骶神经痛一例报告
15
作者 于在江 杨树人 +2 位作者 曹铁臣 汪润生 郝良才 《吉林医学》 CAS 1985年第4期53-54,共2页
直肠癌是外科消化系统中常见的恶性肿瘤之一,文献报道其确诊率只占50%~70%,其误诊原因是多方面的。本例病人长期不能明确诊断,按腰骶神经痛进行治疗,确诊直肠癌已属晚期。病历摘要彭××,男性,35岁,病例号2486。 1983年8月(?... 直肠癌是外科消化系统中常见的恶性肿瘤之一,文献报道其确诊率只占50%~70%,其误诊原因是多方面的。本例病人长期不能明确诊断,按腰骶神经痛进行治疗,确诊直肠癌已属晚期。病历摘要彭××,男性,35岁,病例号2486。 1983年8月(?)患腰痛,曾按腰扭伤治疗。因自感腰骶部疼痛,伴有双下肢麻木,于1984年1月份去医院就医。1月18日并发腹痛诊断急性阑尾炎。本人拒绝手术。一个月后腰腹痛加剧,伴有脐周围疼,行阑尾切除术。术后腰痛加重,且向骶尾及两下肢放散。1984年3月12日神经科诊断腰骶神经痛,右坐骨神经痛,此时腰骶部坠痛感加剧,向臀部两侧放散,肛门不自主紧缩感。4月份开始排尿。 展开更多
关键词 直肠癌 消化系统 直肠肿瘤 解剖学 魄门 肛门 下肢麻木 周围神经系统疾病 神经痛
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牛病毒性腹泻病毒抗体胶体金检测试纸条的制备 被引量:6
16
作者 梅力 杨春江 +7 位作者 韦海涛 于在江 李志军 陈会玲 杨小强 高晓龙 王林 冯小宇 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第2期45-48,I0006,共5页
采用sf9昆虫细胞-杆状病毒系统重组表达牛病毒性腹泻病毒P80蛋白抗原,经纯化鉴定后将P80蛋白用胶体金标记作为示踪抗原,未标记的P80抗原作为捕获抗原,并以羊抗牛IgG抗体作为质控抗体,建立了牛病毒性腹泻病毒抗体快速诊断试纸条。试验结... 采用sf9昆虫细胞-杆状病毒系统重组表达牛病毒性腹泻病毒P80蛋白抗原,经纯化鉴定后将P80蛋白用胶体金标记作为示踪抗原,未标记的P80抗原作为捕获抗原,并以羊抗牛IgG抗体作为质控抗体,建立了牛病毒性腹泻病毒抗体快速诊断试纸条。试验结果表明,该试纸条检测灵敏度高,特异性良好,与牛口蹄疫病毒、牛传染性鼻气管炎病毒无交叉反应。使用建立的胶体金试纸条和IDEXX牛病毒性腹泻病毒ELISA抗体检测试剂盒同时检测80头份牛血清,阳性结果符合率为86.7%,阴性结果符合率为100%,总符合率为95%。该试纸条可用于临床牛病毒性腹泻病毒抗体的诊断和检测。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻 P80抗原 抗体 胶体金 试纸条
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流感病毒样颗粒疫苗研究进展 被引量:13
17
作者 张立霞 于在江 +1 位作者 周剑芳 舒跃龙 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期402-408,共7页
流行性感冒(流感)是由正粘病毒科的负链RNA流感病毒引起的一种上呼吸道急性传染病,它传染性强、传播快、潜伏期短、发病率高,严重影响着人类的健康和全球经济的发展,对老年人和婴幼儿危害尤其大。在人类历史上曾经历过多次流感大流行... 流行性感冒(流感)是由正粘病毒科的负链RNA流感病毒引起的一种上呼吸道急性传染病,它传染性强、传播快、潜伏期短、发病率高,严重影响着人类的健康和全球经济的发展,对老年人和婴幼儿危害尤其大。在人类历史上曾经历过多次流感大流行,死亡惨重, 展开更多
关键词 流感病毒 病毒样颗粒 疫苗 人类历史 急性传染病 正粘病毒科 流行性感冒 上呼吸道
原文传递
杆状病毒表面展示甲型流感病毒核蛋白的免疫原性及保护效果的初步评价 被引量:6
18
作者 张立霞 周剑芳 +1 位作者 于在江 舒跃龙 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期265-272,共8页
流感病毒的核蛋白(Nucleoprotein,NP)高度保守,具有型特异性,能够诱导产生细胞介导的免疫应答,从而起到保护作用,抵抗不同亚型流感病毒的攻击。本研究利用杆状病毒表面展示技术,将杆状病毒GP64蛋白的信号肽(Signal peptide,SP)和胞质尾(... 流感病毒的核蛋白(Nucleoprotein,NP)高度保守,具有型特异性,能够诱导产生细胞介导的免疫应答,从而起到保护作用,抵抗不同亚型流感病毒的攻击。本研究利用杆状病毒表面展示技术,将杆状病毒GP64蛋白的信号肽(Signal peptide,SP)和胞质尾(Cytoplasmic tail,CT)与甲型流感病毒(A/Hubei/1/2010(H5H1))的NP蛋白融合表达,从而将NP蛋白展示在杆状病毒的表面,并对该病毒NP蛋白的免疫原性和保护效果进行了研究。Westernblot实验证明NP蛋白可以在Sf9细胞中有效表达。免疫电镜试验显示NP蛋白已成功展示在杆状病毒表面。通过小鼠感染实验,ELISA结果证明NP疫苗可以诱导产生高水平的IgG血清抗体。ELISPOT结果表明NP蛋白的2个细胞免疫抗原表位(NP57-66IQNSITIERM和NP441-450RTEIIKMMES)可以诱导小鼠脾淋巴细胞产生IFN-γ,利用NP57-66、NP441-450和NP蛋白均可刺激CD4+和CD8+T细胞产生IFN-γ,但主要以CD8+诱导为主,表明重组病毒可以产生有效的细胞免疫反应。利用小鼠鼠肺适应株A/PR/8/34(H1N1)进行攻毒实验,结果表明该重组病毒感染小鼠后可以降低小鼠肺病毒载量,减轻肺组织损伤,减少体重下降,并可以保护50%小鼠存活。 展开更多
关键词 NP蛋白 H5N1禽流感病毒 杆状病毒表面展示技术 免疫原性和保护性
原文传递
流感病毒H1N1血凝素基因和神经氨酸酶基因在酵母菌中的表达 被引量:3
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作者 张烨 于在江 +5 位作者 辛丽 陈永坤 唐启慧 陈禹保 陈清轩 舒跃龙 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1068-1073,共6页
在成功克隆流感病毒H1N1全长HA(Hemagglulinin,HA)、NA(Neuramidinase,NA)基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pMETA上,构建了重组表达质粒pMETA/HA(52~1557bp)、pMETA/NA(121~1263bp),电转化真核酵母菌pM... 在成功克隆流感病毒H1N1全长HA(Hemagglulinin,HA)、NA(Neuramidinase,NA)基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pMETA上,构建了重组表达质粒pMETA/HA(52~1557bp)、pMETA/NA(121~1263bp),电转化真核酵母菌pMAD16,甲醇诱导表达,利用Ni^2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western blotting和ELISA方法检测其抗原性。SDS-PAGE显示重组蛋白在酵母菌中可以高效表达,蛋白纯度占总蛋白的95%以上,ELISA和Western blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。成功克隆和表达了流感病毒H1N1HA、NA基因序列,为流感病毒H1N1诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究提供了参考。 展开更多
关键词 流感病毒H1N1 血凝素 神经氨酸酶 酵母表达
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基于H5N1禽流感病毒HA2蛋白的通用型流感疫苗初步研究 被引量:3
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作者 辛丽 杨星钰 +4 位作者 于在江 薄红 周剑芳 秦堃 舒跃龙 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期521-528,共8页
为研究有效的通用流感疫苗,解决流感疫苗株定期更换的难题。本课题利用乙肝病毒核心抗原(Hepatitis B core atigen,HBcAg)蛋白可以形成病毒样颗粒(Virus like larticle,VLP)的特点,将高致病性人禽流感A/Hubei/1/2010(H5N1)HA2的76... 为研究有效的通用流感疫苗,解决流感疫苗株定期更换的难题。本课题利用乙肝病毒核心抗原(Hepatitis B core atigen,HBcAg)蛋白可以形成病毒样颗粒(Virus like larticle,VLP)的特点,将高致病性人禽流感A/Hubei/1/2010(H5N1)HA2的76~130氨基酸(Amino acid,AA)线性保守区(Linear conserved rgion,LCR)与HBcAg融合表达,并对其进行免疫学评价。其结果显示,优化后的LCR-HBc片段能够在pET30a大肠杆菌原核表达系统中大量表达。将纯化后的融合蛋白免疫小鼠,发现LCR-HBc疫苗组H5N1血凝素(Hemoglutination,HA)特异性IgG抗体滴度可达到1∶12 800以上。对免疫后小鼠的A/PR/8/34(PR8)致死剂量攻毒实验结果显示,LCR-HBc疫苗组肺病毒载量显著低于对照组(P〈0.01),对小鼠的保护率为50%。本研究的开展为流感通用型疫苗的研制提供科学线索。 展开更多
关键词 流感 通用型疫苗 病毒样颗粒 乙肝核心抗原
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