芦丁对湖羊乳腺氧化应激相关指标及核因子E2相关因子2信号通路基因表达的影响

1

作者 丁红研 李玉 +4 位作者 赵畅 冯士彬 王希春 汤继顺 吴金节 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期2629-2640,共12页

本试验旨在研究饲粮中添加芦丁对产后湖羊乳腺氧化应激相关指标及核因子E2相关因子2(NRF2,基因为NFE2L2)信号通路基因表达的影响。选取体重相近且分娩日期相近的湖羊30只,随机分为3组,每组10只。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂在基... 本试验旨在研究饲粮中添加芦丁对产后湖羊乳腺氧化应激相关指标及核因子E2相关因子2(NRF2,基因为NFE2L2)信号通路基因表达的影响。选取体重相近且分娩日期相近的湖羊30只,随机分为3组,每组10只。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂在基础饲粮中添加50和100 mg/kg BW芦丁的饲粮。预试期7 d,正试期56 d。结果表明:1)与对照组相比,饲粮中添加50 mg/kg BW芦丁能够减少湖羊乳腺腺泡内炎性细胞数量,100 mg/kg芦丁组湖羊乳腺腺泡内未见炎性细胞。2)与对照组相比,饲粮中添加100 mg/kg BW芦丁显著或极显著提高乳腺组织中过氧化氢酶(CAT)(P<0.01)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)(P<0.05)活性以及总抗氧化能力(T-AOC)(P<0.05),饲粮中添加50和100 mg/kg BW芦丁极显著降低过乳腺组织中过氧化氢(H_(2)O_(2))含量(P<0.01)。3)与对照组相比,饲粮中添加100 mg/kg BW芦丁极显著提高乳腺组织细胞内NRF2的蛋白表达水平(P<0.01),显著提高乳腺组织中NFE2L2 mRNA相对表达量(P<0.05),显著降低乳腺组织中Kelch样ECH关联蛋白1(KEAP1)mRNA相对表达量(P<0.05)。4)与对照组相比,饲粮中添加50 mg/kg BW芦丁显著提高乳腺组织中谷氨酸-半胱氨酸连接酶修饰亚基(GCLM)mRNA相对表达量(P<0.05);饲粮中添加100 mg/kg BW芦丁显著或极显著提高乳腺组织中GCLM(P<0.01)、GSH-Px(P<0.05)、硫氧还蛋白(TXN)(P<0.05)、铁蛋白重链1(FTH1)(P<0.01)、转醛醇酶1(TALDO1)(P<0.05)、苹果酸酶1(ME1)(P<0.05)和血红素氧合酶1(HMOX1)mRNA相对表达量,显著提高乳腺组织中B淋巴细胞瘤2(BCL2)mRNA相对表达量(P<0.05)。由此可见,饲粮中添加50和100 mg/kg BW芦丁能够减少湖羊乳腺腺泡内炎性细胞数量,并发挥抗氧化应激作用,通过调节NRF2信号通路的基因表达水平,改善产后湖羊乳腺的健康状态。 展开更多

关键词 湖羊 芦丁 乳腺组织 抗氧化 NRF2信号通路

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玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备及间接竞争ELISA检测方法的初步建立 被引量：1

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作者 李东娜 王照鹏 +6 位作者 杨威 刘磊 唐佳佳 张良 丁红研 刘国文 李小兵 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第5期85-86,共2页

为了研究玉米赤霉烯酮的间接竞争ELISA检测方法,试验采用牛血清白蛋白与玉米赤霉烯酮的耦联物(ZEN-BSA)做包被抗原,标准玉米赤霉烯酮(ZEN)做竞争抗原,以制备的可稳定分泌抗ZEN的单克隆抗体为基础,初步建立了ZEN间接竞争ELISA检测方法。... 为了研究玉米赤霉烯酮的间接竞争ELISA检测方法,试验采用牛血清白蛋白与玉米赤霉烯酮的耦联物(ZEN-BSA)做包被抗原,标准玉米赤霉烯酮(ZEN)做竞争抗原,以制备的可稳定分泌抗ZEN的单克隆抗体为基础,初步建立了ZEN间接竞争ELISA检测方法。结果表明:间接竞争ELISA检测方法线性范围为0.363 2～78.985 2μg/L,最低检测限为0.231 9μg/L;曲线回归方程为y=68.711-25.666x,其中R2=0.987 1,批内平均变异系数为3.10%,批间平均变异系数为6.26%,与相似毒素的交叉反应率均小于0.01%。说明建立的检测方法可以用于ZEN的检测。 展开更多

关键词 玉米赤霉烯酮 单克隆抗体 ELISA

原文传递

奶牛载脂蛋白B100基因克隆及原核表达

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作者 张加力 王力 +7 位作者 杨文涛 丁红研 张良 陈灰 刘兆喜 赵晨旭 王哲 李小兵 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第11期43-46,共4页

本研究根据GenBank已收录奶牛ApoB100基因序列,设计特异性引物获得目的基因。经pGM-T载体克隆,对重组质粒进行BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切鉴定并测序,序列同源性达100%;将目的基因连接到pET-28a表达载体中,提取质粒,转化到Rosetta(DE3)中,筛... 本研究根据GenBank已收录奶牛ApoB100基因序列,设计特异性引物获得目的基因。经pGM-T载体克隆,对重组质粒进行BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切鉴定并测序,序列同源性达100%;将目的基因连接到pET-28a表达载体中,提取质粒,转化到Rosetta(DE3)中,筛选的阳性克隆经IPTG诱导。SDS-PAGE初步分析表明,成功获得分子质量为35ku的蛋白质;Western blotting结果呈阳性,表明通过本试验成功获得了目的蛋白。 展开更多

关键词 APOB100 基因克隆 原核表达

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奶牛ApoB100基因的克隆、表达及多克隆抗体的制备

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作者 王力 张加力 +5 位作者 杨文涛 丁红研 张仁和 王哲 李小兵 赵权 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第9期15-17,21,共4页

为了进一步研究ApoB100在肝脏脂肪代谢中的功能,试验采用构建pET-28a-ApoB100表达质粒的方法对其进行研究。结果表明:用IPTG成功诱导表达出ApoB100蛋白,并且获得了高效价多克隆抗体。说明表达质粒pET-28a-ApoB100构建成功。

关键词 APOB100 基因克隆 多克隆抗体

原文传递

瘤胃酸中毒对山羊胃肠道功能、形态和菌群的影响

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作者 张道亮 丁红研 +8 位作者 王留幸 邰文俊 孔昊 赵畅 冯士彬 王希春 薛艳锋 吴金节 李玉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4760-4772,共13页

旨在通过诱导瘤胃酸中毒模型,探究瘤胃酸中毒对山羊胃肠道组织和菌群结构的影响。本试验选取8只健康波尔山羊为试验对象,对照组4只,造模后的酸中毒组4只。通过瘤胃插管灌服玉米面的方法构建山羊瘤胃酸中毒模型。取胃肠道组织进行HE染色... 旨在通过诱导瘤胃酸中毒模型,探究瘤胃酸中毒对山羊胃肠道组织和菌群结构的影响。本试验选取8只健康波尔山羊为试验对象,对照组4只,造模后的酸中毒组4只。通过瘤胃插管灌服玉米面的方法构建山羊瘤胃酸中毒模型。取胃肠道组织进行HE染色、RT-qPCR和Western blot检测,探究瘤胃酸中毒对山羊消化道组织形态、功能蛋白的影响。另外分别取瘤胃液和盲肠内容物,应用Illumina MiSeq高通量测序技术测定样本中细菌的16S rRNA,分析酸中毒对山羊胃肠道细菌群落组成的影响。结果显示:与对照组相比,酸中毒组山羊的瘤胃和小肠的组织形态出现损伤,其结构完整性被破坏;瘤胃和十二指肠中的MCT1 mRNA相对表达量和蛋白质表达量均极显著升高(P<0.01),而SLC5A8 mRNA相对表达量和蛋白表达量均极显著降低(P<0.01)。对瘤胃内容物进行高通量测序后,相较于对照组,酸中毒组Alpha多样性分析中Shannon指数显著低(P<0.05),拟杆菌门(Bacteroidetes)、互养菌门(Synergistetes)的相对丰富度极显著降低(P<0.01),纤维杆菌门(Fibrobacteres)、软壁菌门(Tenericutes)的相对丰度显著升高(P<0.05),瘤球菌属(Ruminococcus)、普雷沃氏菌属(Prevotella)的相对丰富度显著降低(P<0.05)。对盲肠内容物高通量测序后,与对照组相比,酸中毒组的瘤胃球菌属(Ruminococcus)、颤螺旋菌属(Oscillospira)的相对丰富度显著降低(P<0.05),梭菌属(Clostridium)相对丰富度显著升高(P<0.05)。综上可知,瘤胃酸中毒可使山羊消化道组织形态完整性破坏,相关蛋白表达受影响,导致消化道菌群结构发生紊乱。 展开更多

关键词 山羊 瘤胃酸中毒 胃肠道形态 高通量测序 菌群分析

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茶皂素对安徽白山羊断奶羔羊生长性能、血清指标及消化功能的影响 被引量：11

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作者 王留幸 吴沐林 +9 位作者 周佳茵 孟新月 董妍丽 丁红研 刘蕾红 王希春 冯士彬 吴金节 孙裴 李玉 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS 北大核心 2022年第1期19-25,48,共8页

为研究不同剂量茶皂素对安徽白山羊断奶羔羊生长性能、血清指标、胰腺消化酶活性和瘤胃发酵参数的影响,选取3月龄体重相近[(12.14±0.59)kg]的断奶羔羊21只,随机分为3组,即对照组、低浓度茶皂素组(0.625g·kg^(-1))和高浓度茶... 为研究不同剂量茶皂素对安徽白山羊断奶羔羊生长性能、血清指标、胰腺消化酶活性和瘤胃发酵参数的影响,选取3月龄体重相近[(12.14±0.59)kg]的断奶羔羊21只,随机分为3组,即对照组、低浓度茶皂素组(0.625g·kg^(-1))和高浓度茶皂素组(2.5g·kg^(-1)),每组7只,试验期56d。结果表明:①低浓度茶皂素组与其他2组相比,平均日增重显著升高,精料料重比显著下降。②低浓度和高浓度茶皂素组超氧化物歧化酶活性极显著升高,谷胱甘肽、过氧化物酶活性显著升高。③低浓度和高浓度茶皂素组免疫球蛋白A、免疫球蛋白G和免疫球蛋白M含量显著升高,免疫球蛋白G含量于试验第4周显著上升。④低浓度和高浓度茶皂素组胰蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性极显著升高。⑤低浓度和高浓度茶皂素组瘤胃液丙酸、正丁酸、正戊酸含量显著升高。综上而言,饲粮中添加不同剂量茶皂素能提高安徽白山羊断奶羔羊生长性能和抗氧化能力,改善免疫力和提高消化功能。 展开更多

关键词 安徽白山羊 茶皂素 抗氧化 免疫 消化酶 瘤胃发酵参数

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β-伴大豆球蛋白对IPEC-J2细胞损伤的作用机制研究 被引量：3

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作者 孙智峰 王蕾 +7 位作者 刘羽佳 丁红研 王志 李思婷 王承智 李玉 王希春 吴金节 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2022年第1期27-35,共9页

【目的】研究β-伴大豆球蛋白通过核因子-κB(NF-κB)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、c-Jun N端激酶(JNK)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路对猪肠上皮细胞(IPEC-J2)造成损伤的差异,为探索β-伴大豆球蛋白引发仔猪肠道黏膜损伤... 【目的】研究β-伴大豆球蛋白通过核因子-κB(NF-κB)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、c-Jun N端激酶(JNK)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路对猪肠上皮细胞(IPEC-J2)造成损伤的差异,为探索β-伴大豆球蛋白引发仔猪肠道黏膜损伤的分子机制提供理论依据。【方法】采用β-伴大豆球蛋白体外诱导IPEC-J2损伤,试验设对照组T0(猪肠上皮细胞不做处理),试验组T1(加入5 mg/mLβ-伴大豆球蛋白)、T2(加入5 mg/mLβ-伴大豆球蛋白+1μmol/L NF-κB抑制剂二硫氨基甲酸肽吡咯烷(PDTC))、T3(加入5 mg/mLβ-伴大豆球蛋白+1μmol/L iNOS抑制剂Nω-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME))、T4(加入5 mg/mLβ-伴大豆球蛋白+1μmol/L JNK抑制剂SP600125)和T5(加入5 mg/mLβ-伴大豆球蛋白+1μmol/L p38抑制剂SB202190),处理24 h后观察细胞结构,测定各组细胞活性及细胞因子NO、TNF-α、IL-10、IFN-γ含量,细胞损伤相关基因NF-κB p65、iNOS、JNK、p38及其编码蛋白的表达水平。【结果】在IPEC-J2中加入5 mg/mLβ-伴大豆球蛋白24 h后,细胞数量减少,线粒体改变,染色质边集,细胞活性显著下降(P<0.05),NO、TNF-α、IFN-γ含量均极显著增加(P<0.01),而IL-10含量极显著减少(P<0.01),NF-κB p65、iNOS、JNK和p38 mRNA表达水平极显著升高(P<0.01),NF-κB、iNOS、JNK、p38蛋白表达量极显著上升(P<0.01);加入抑制剂后,细胞活性显著提高(P<0.05),细胞结构趋于完整和规则,IL-10含量极显著增加(P<0.01),而NO、TNF-α、IFN-γ含量极显著减少(P<0.01),NF-κB p65、iNOS、JNK和p38 mRNA及其编码蛋白表达受到抑制。其中T2组细胞活性显著高于T3、T4、T5组(P<0.05),细胞数量、形态和完整性最接近对照组细胞。【结论】β-伴大豆球蛋白主要通过NF-κB/iNOS信号通路对IPEC-J2造成损伤,PDTC对这种损伤作用的抑制效果最好。 展开更多

关键词 Β-伴大豆球蛋白 猪肠上皮细胞 细胞因子 免疫反应

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11S球蛋白通过核因子-κB、诱导型一氧化氮合酶、c-Jun N端激酶、p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路诱导猪小肠上皮细胞损伤的研究 被引量：2

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作者 王蕾 孙智峰 +7 位作者 彭成璐 丁红研 王志 李思婷 王承智 李玉 王希春 吴金节 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期1663-1674,共12页

本研究旨在利用细胞体外培养技术,分析11S球蛋白通过核因子-кB(NF-κB)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、c-Jun N端激酶(JNK)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路诱导猪小肠上皮细胞(IPEC-J2细胞)损伤的作用差异。试验随机分为6组:A... 本研究旨在利用细胞体外培养技术,分析11S球蛋白通过核因子-кB(NF-κB)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、c-Jun N端激酶(JNK)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路诱导猪小肠上皮细胞(IPEC-J2细胞)损伤的作用差异。试验随机分为6组:A组(对照组)无添加;B组添加5 mg/mL的11S球蛋白;C、D、E和F组分别添加1μmol/L的NF-κB抑制剂二硫氨基甲酸肽吡咯烷(PDTC)、iNOS抑制剂Nω-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)、JNK抑制剂SP600125和p38 MAPK抑制剂SB202190预处理后,分别添加5 mg/mL的11S球蛋白。培养24 h后,CCK-8检测细胞活性,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(INF-γ)和白细胞介素-10(IL-10)含量,苏木精-伊红(HE)染色法观察细胞及细胞核形态,用透射电子显微镜观察细胞超微结构,实时荧光定量PCR检测NF-κB、iNOS、JNK、p 38 MAPK mRNA相对表达量,Western blot检测NF-κB、iNOS、JNK、p38 MAPK蛋白表达水平。结果显示:1)与A组相比,B组细胞活性极显著降低(P<0.01);与B组相比,C、D、E和F组细胞活性极显著升高(P<0.01),且C组细胞活性显著高于D、E和F组(P<0.05)。2)与A组相比,B组TNF-α、INF-γ和NO含量极显著升高(P<0.01),IL-10含量极显著降低(P<0.01);与B组相比,C、D、E和F组TNF-α、INF-γ和NO含量极显著降低(P<0.01),IL-10含量极显著升高(P<0.01)。3)与A组相比,B组NF-κB、iNOS、JNK和p38 MAPK蛋白表达水平和mRNA相对表达量极显著升高(P<0.01)。4)与B组相比,C和F组NF-κB、iNOS、JNK和p 38 MAPK mRNA相对表达量显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),D组NF-κB、iNOS和JNK mRNA相对表达量极显著降低(P<0.01),E组NF-κB、JNK和p 38 MAPK mRNA相对表达量显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01)。5)与B组相比,C、E和F组NF-κB、iNOS、JNK和p38 MAPK蛋白表达水平极显著降低(P<0.01),D组NF-κB、iNOS和JNK蛋白表达水平极显著降低(P<0.01)。6)HE染色及透射电镜观察可见,B组细胞损伤、胞质空泡化、核染色质聚集,C、D、E和F组细胞损伤受到抑制,且C组细胞结构形态的完整性优于D、E和F组。由此可见,11S球蛋白通过JNK/p38 MAPK/NF-κB/iNOS信号通路诱导IPEC-J2细胞损伤,且NF-κB信号通路在诱导细胞损伤的过程中发挥关键作用。 展开更多

关键词 大豆球蛋白 IPEC-J2细胞 信号通路 细胞损伤

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β-伴大豆球蛋白通过上调NOD样受体蛋白-3表达诱导猪小肠上皮细胞焦亡 被引量：2

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作者 王蕾 孙智峰 +9 位作者 刘羽佳 李思婷 谢维娜 单兴根 田朋 杨悦 丁红研 李玉 王希春 吴金节 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期4057-4067,共11页

本试验旨在探讨β-伴大豆球蛋白通过上调NOD样受体蛋白-3(NLRP⁃3)表达诱导猪小肠上皮细胞(IPEC⁃J2)焦亡的作用机制。利用慢病毒转染IPEC⁃J2沉默目的基因NLRP⁃3,采用实时荧光定量PCR(RT⁃qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)验证目的基因... 本试验旨在探讨β-伴大豆球蛋白通过上调NOD样受体蛋白-3(NLRP⁃3)表达诱导猪小肠上皮细胞(IPEC⁃J2)焦亡的作用机制。利用慢病毒转染IPEC⁃J2沉默目的基因NLRP⁃3,采用实时荧光定量PCR(RT⁃qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)验证目的基因沉默效果。慢病毒转染成功沉默目的基因NLRP⁃3后,将样本分为4组:A组为对照组(未转染),B组为阴性对照组(转染慢病毒空载体),C组为干扰组(转染携带NLRP⁃3干扰片段的慢病毒载体),D组为β-伴大豆球蛋白调节组(转染携带NLRP⁃3干扰片段的慢病毒载体+10 mg/mL的β-伴大豆球蛋白)。利用细胞增殖毒性检测试剂盒检测细胞活性;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase⁃1)和白细胞介素-1β(IL⁃1β)含量;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)观察细胞阳性变化;透射电镜观察细胞形态;RT⁃qPCR和Western blot检测NLRP⁃3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Caspase⁃1、IL⁃1β和消皮素D(GSDMD)的mRNA相对表达量及蛋白表达水平。结果表明:1)与A组相比,B组的NLRP⁃3 mRNA相对表达量及蛋白表达水平无显著差异(P>0.05)。C组细胞NLRP⁃3 mRNA相对表达量及蛋白表达水平均极显著低于A组和B组(P<0.01)。2)与A组相比,C组细胞Caspase⁃1含量显著降低(P<0.05),IL⁃1β含量极显著降低(P<0.01),NLRP⁃3、ASC、Caspase⁃1、IL⁃1β、GSDMD mRNA相对表达量和蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。3)与B组相比,C组细胞Caspase⁃1和IL⁃1β含量极显著降低(P<0.01),NLRP⁃3、ASC、Caspase⁃1、IL⁃1β、GSDMD mRNA相对表达量和蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。4)与C组相比,D组细胞活性极显著降低(P<0.01),IL⁃1β和Caspase⁃1含量极显著升高(P<0.01),TUNEL染色显示细胞呈阳性表达,透射电镜观察可见D组细胞肿胀、细胞膜破裂、胞浆内容物流出,线粒体变性肿胀,NLRP⁃3、ASC、Caspase⁃1、IL⁃1β和GSDMD mRNA相对表达量和蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。综上所述,β-伴大豆球蛋白上调NLRP⁃3表达,并通过NLRP⁃3/Caspase⁃1/GSDMD信号通路介导IPEC⁃J2细胞焦亡。 展开更多

关键词 Β-伴大豆球蛋白 NLRP⁃3 慢病毒 IPEC⁃J2 细胞焦亡

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芦丁对围产期湖羊瘤胃发酵、瘤胃菌群结构及抗氧化性能的影响 被引量：1

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作者 熊程坤 张道亮 +8 位作者 杨悦 丁红研 赵杰 李玉 王希春 冯士彬 赵畅 汤继顺 吴金节 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期2898-2909,共12页

旨在研究饲粮中添加芦丁对围产期湖羊瘤胃发酵、瘤胃菌群结构及抗氧化性能的影响。选择30只围产期相近、体重[(62.90±2.80)kg]相似的24月龄围产期湖羊,随机分为3组,每组10个重复。芦丁在基础饲粮中的添加剂量分别为0 mg·kg^(-... 旨在研究饲粮中添加芦丁对围产期湖羊瘤胃发酵、瘤胃菌群结构及抗氧化性能的影响。选择30只围产期相近、体重[(62.90±2.80)kg]相似的24月龄围产期湖羊,随机分为3组,每组10个重复。芦丁在基础饲粮中的添加剂量分别为0 mg·kg^(-1)BW(CON组)、50 mg·kg^(-1)BW(Ⅰ组)和100 mg·kg^(-1)BW(Ⅱ组)。预试期7 d,正式试验期56 d。产后28 d晨饲前,每组随机选取5只羊屠宰,检测瘤胃组织形态、瘤胃发酵参数、抗氧化性能及瘤胃菌群结构。结果发现:1)各组围产期湖羊日粗饲料采食量、日干物质采食量和日中性洗涤纤维采食量差异均不显著(P>0.05);2个试验组围产期湖羊的产后体重、末体重(FBW)和平均日增重(ADG)均高于CON组,但差异不显著(P>0.05),各组产羔数量及羔羊体重无显著变化(P>0.05);2)Ⅱ组围产期湖羊瘤胃乳头长度显著高于CON组(P<0.05);3)Ⅰ组瘤胃液中谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性显著高于CON组(P<0.05);4)与CON组相比,Ⅱ组围产期湖羊瘤胃液中菌体蛋白、原虫蛋白、乙酸、丙酸、戊酸和总挥发性脂肪酸(TVFA)浓度显著升高(P<0.05),微生物蛋白浓度极显著升高(P<0.01);5)CON组和Ⅰ组围产期湖羊瘤胃细菌第一优势菌门为厚壁菌门,第二优势菌门为拟杆菌门;Ⅱ组第一优势菌门为拟杆菌门,第二优势菌门为厚壁菌门。与CON组相比,Ⅱ组厚壁菌门和螺旋体门相对丰度均显著降低(P<0.05),拟杆菌门相对丰度显著升高(P<0.05)。各组围产期湖羊瘤胃细菌的优势菌属均为普雷沃菌属。与CON组相比,Ⅰ组普雷沃菌属相对丰度显著升高(P<0.05);Ⅱ组普雷沃菌属相对丰度极显著升高(P<0.01),Ⅱ组密螺旋体属相对丰度显著降低(P<0.05)。综上表明,芦丁对围产期湖羊瘤胃组织形态有改善作用,能够提高瘤胃抗氧化能力,改变瘤胃菌群结构,有效改善围产期湖羊瘤胃发酵功能。 展开更多

关键词 芦丁 围产期湖羊 瘤胃组织 抗氧化性能 瘤胃发酵 瘤胃菌群结构

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腺苷酸活化蛋白激酶信号转导通路在奶牛酮病发生和发展过程中的调控机制 被引量：1

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作者 董记红 吴金节 +7 位作者 王希春 冯士彬 丁红研 刘国文 李心慰 李小兵 王哲 李玉 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期1035-1041,共7页

奶牛酮病是围产期奶牛常见的营养代谢性疾病,给奶牛业造成了巨大的损失。奶牛酮病发生时,相关的能量代谢激素也发生了明显的变化,主要是胰高血糖素和胰岛素。腺苷酸活化蛋白激酶被认为是机体的能量感受器,一些能量代谢激素可以引起其活... 奶牛酮病是围产期奶牛常见的营养代谢性疾病,给奶牛业造成了巨大的损失。奶牛酮病发生时,相关的能量代谢激素也发生了明显的变化,主要是胰高血糖素和胰岛素。腺苷酸活化蛋白激酶被认为是机体的能量感受器,一些能量代谢激素可以引起其活性的变化。本文就胰高血糖素和胰岛素对腺苷酸活化蛋白激酶信号转导通路发生作用机制做一论述,旨在为下一步研究奶牛酮病提供理论支持。 展开更多

关键词 胰高血糖素 胰岛素 腺苷酸活化蛋白激酶 奶牛酮病

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茶黄素通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路促进小鼠乳腺肿瘤细胞凋亡 被引量：1

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作者 田朋 谢维娜 +7 位作者 丁红研 单兴根 刘畅 李玉 赵畅 冯士彬 王希春 吴金节 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期1288-1297,共10页

本试验旨在研究茶黄素促进小鼠乳腺肿瘤细胞凋亡的作用机制。采用不同浓度[0(A组)、48(B组)、88(C组)、128μmol/L(D组)]茶黄素处理小鼠乳腺肿瘤细胞(C-127细胞)24 h,采用CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡情况,荧光显微镜... 本试验旨在研究茶黄素促进小鼠乳腺肿瘤细胞凋亡的作用机制。采用不同浓度[0(A组)、48(B组)、88(C组)、128μmol/L(D组)]茶黄素处理小鼠乳腺肿瘤细胞(C-127细胞)24 h,采用CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡情况,荧光显微镜检测细胞活性与坏死情况,透射电镜观察细胞形态,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测半胱氨酸特异性天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA相对表达量,Western Blot法检测活化后的Caspase-3(Cleaved-Caspase-3)、PI3K、Akt、Bcl-2和Bax的蛋白表达水平。结果显示:1)与A组相比,B组细胞存活率显著降低(P<0.05),C组、D组细胞存活率极显著降低(P<0.01)。2)与A组相比,B组、C组、D组细胞凋亡率极显著升高(P<0.01)。3)与A组相比,B组Akt的mRNA相对表达量极显著降低(P<0.01),PI3K、Bcl-2的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05),Caspase-3、Bax的mRNA相对表达量显著升高(P<0.05);C组和D组PI3K、Bcl-2和Akt的mRNA相对表达量极显著降低(P<0.01),Caspase-3和Bax的mRNA相对表达量极显著升高(P<0.01)。4)与A组相比,B组Bcl-2的蛋白表达水平极显著降低(P<0.01),Cleaved-Caspase-3的蛋白表达水平极显著升高(P<0.01);C组和D组Cleaved-Caspase-3和Bax的蛋白表达水平极显著升高(P<0.01),PI3K、Akt、Bcl-2的蛋白表达水平极显著降低(P<0.01)。5)荧光显微镜和透视电镜观察可见,随着茶黄素浓度的升高,细胞活性逐渐降低,坏死细胞逐渐增多,线粒体变大,线粒体嵴增多;染色质浓缩分布在核膜周围或一侧,呈眼球状;自噬体内吞噬线粒体、内质网和一些细胞内的胞质成分,再与细胞膜融合后,形成凋亡小体。综上所述,茶黄素可通过PI3K/Akt信号通路促进促凋亡基因的表达,降低抗凋亡基因的表达,从而促进小鼠乳腺肿瘤细胞凋亡,达到抗肿瘤的作用;并且,随着茶黄素浓度的增大,茶黄素促进小鼠乳腺肿瘤细胞凋亡的作用增强。 展开更多

关键词 C-127细胞 茶黄素 细胞凋亡 PI3K/AKT信号通路

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茶皂素对安徽白山羊小肠黏膜形态及肠道菌群的影响 被引量：8

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作者 李玉 孟新月 +11 位作者 凌嫄 李稳稳 董妍丽 丁红研 毕如涛 刘光 刘蕾红 李锦春 王希春 冯士彬 孙裴 吴金节 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS 北大核心 2021年第5期25-32,共8页

随机选取体重相近[(12.14±0.59)kg]的3月龄白山羊断奶羔羊21只,断奶时间不超过3 d,随机分为对照组、低浓度(0.625 g·kg^(-1))茶皂素组和高浓度(2.5 g·kg^(-1))茶皂素组,每组7只,饲喂56 d后采集小肠上皮组织,检测其形态... 随机选取体重相近[(12.14±0.59)kg]的3月龄白山羊断奶羔羊21只,断奶时间不超过3 d,随机分为对照组、低浓度(0.625 g·kg^(-1))茶皂素组和高浓度(2.5 g·kg^(-1))茶皂素组,每组7只,饲喂56 d后采集小肠上皮组织,检测其形态结构变化,并取小肠内容物,分析其微生物组成,探究茶皂素对安徽白山羊断奶羔羊小肠黏膜形态和肠道菌群的影响。结果表明:①与对照组相比,添加茶皂素极显著增加十二指肠、空肠、回肠绒毛长度及绒毛长度/隐窝深度的比值,极显著降低隐窝深度。②与对照组相比,茶皂素组广古菌门、拟杆菌门、疣微菌门、红椿杆菌纲、产芽孢菌纲、双歧杆菌目、甲烷杆菌目、双歧杆菌科和甲烷杆菌科相对丰度显著增加,茶皂素组放线菌纲相对丰度显著下降;与低浓度茶皂素组相比,高浓度茶皂素组红蝽菌目、红蝽菌科和丹毒丝菌科相对丰度显著升高。综上所述,茶皂素能促进白山羊羔羊小肠各段发育,提高肠道有益菌群丰度,降低有害菌群比例,改善肠道菌群结构。 展开更多

关键词 白山羊 茶皂素 小肠黏膜形态 肠道菌群

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胰岛素、胰高血糖素对体外培养犊牛肝细胞CPT-Ⅰ和CPT-ⅡmRNA表达的影响 被引量：1

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作者 丁红研 李玉 +7 位作者 史珍 杨威 张仁和 杨文涛 邓清华 刘国文 王哲 李小兵 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期638-640,652,共4页

体外原代培养犊牛肝细胞,添加不同浓度的胰岛素(insulin,INS)(0、1、10、100、1 000nmol/L)和胰高血糖素(glucagon,GLN)(0、1、10、100、1 000nmol/L),每个处理做3个重复,分别培养1h后,提取总RNA。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)的方法,检测... 体外原代培养犊牛肝细胞,添加不同浓度的胰岛素(insulin,INS)(0、1、10、100、1 000nmol/L)和胰高血糖素(glucagon,GLN)(0、1、10、100、1 000nmol/L),每个处理做3个重复,分别培养1h后,提取总RNA。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)的方法,检测肉碱棕榈酰转移酶Ⅰ(carnitine palmitoyl transferase,CPT-Ⅰ)和肉碱棕榈酸转移酶Ⅱ(carnitine palmitoyl transferase,CPT-Ⅱ)mRNA表达的变化。结果显示,随着培养液中INS含量的升高,肝细胞中CPT-ⅠmRNA和CPT-ⅡmRNA的表达量逐渐降低,呈现一定的剂量依赖性。随着培养液中GLN含量的升高,肝细胞中CPT-ⅠmRNA和CPT-ⅡmRNA的表达量均升高,呈现一定的剂量依赖性,且当GLN的添加浓度高于100nmol/L时,CPT-ⅠmRNA和CPT-ⅡmRNA的表达量显著升高(P<0.01)。结果表明,INS可在一定程度上抑制脂氧化关键酶的表达,GLN可显著促进脂氧化关键酶的表达。 展开更多

关键词 肉碱棕榈酰转移酶Ⅰ 肉碱棕榈酰转移酶Ⅱ 肝细胞 胰岛素 胰高血糖素

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大豆抗原蛋白对断奶仔猪细胞因子及肠上皮紧密连接蛋白Claudin-1 mRNA表达的影响 被引量：7

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作者 李宝 李玉 +4 位作者 马良友 冯士彬 丁红研 王希春 吴金节 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1511-1517,共7页

选取70头24日龄"杜×长×大"断奶仔猪,随机分成7组,每组10头仔猪。对照组(A组)饲喂基础日粮,β-伴大豆球蛋白(β-Conglycinin,7S)(B、C、D组)和大豆球蛋白(Glycinin,11S)试验组(E、F、G组)分别添加500、2 000、5 000... 选取70头24日龄"杜×长×大"断奶仔猪,随机分成7组,每组10头仔猪。对照组(A组)饲喂基础日粮,β-伴大豆球蛋白(β-Conglycinin,7S)(B、C、D组)和大豆球蛋白(Glycinin,11S)试验组(E、F、G组)分别添加500、2 000、5 000μg/kg质量的7S或11S。仔猪断奶时开始饲喂大豆抗原蛋白,分别于24、26、28、30日龄采集血液,测量血清中细胞因子含量。于试验结束时,每组选取5头仔猪放血致死,采集小肠各段,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测小肠各段Claudin-1mRNA的相对表达量。结果显示,与对照组相比,随着7S和11S剂量的增加,血清中IL-2、IL-4、IL-6的含量升高,血清中INF-γ的含量降低。与对照组相比,7S与11S试验组中的D、G组各肠段Claudin-1mRNA的相对表达量均显著降低(P<0.01),C组的空肠前段、空肠中段和空肠后段均显著降低(P<0.01)。与7S试验组相比,除11SB、C组的回肠显著降低,其余各组均显著升高。试验表明,7S和11S均能够通过影响细胞因子的含量,引起断奶仔猪的体液和细胞免疫反应,降低断奶仔猪十二指肠和空肠Claudin-1mRNA相对表达量,引起仔猪肠道黏膜损伤,且7S比11S对仔猪的损伤程度更大。 展开更多

关键词 仔猪 Β-伴大豆球蛋白 大豆球蛋白 细胞因子 Claudin-1mRNA

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黄曲霉毒素B1间接竞争化学发光酶免疫分析方法的建立 被引量：8

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作者 张良 陈灰 +7 位作者 韩盈盈 丁红研 杨威 刘磊 唐佳佳 刘国文 王哲 李小兵 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期454-457,共4页

本试验建立了一种用于检测玉米中黄曲霉毒素B1的间接竞争化学发光酶免疫分析方法。以辣根过氧化物酶催化鲁米诺-过氧化氢-对碘苯酚作为发光体系,通过对包被抗原、检测抗体和酶标二抗浓度的优化建立其标准曲线。所建方法的线性范围为0.31... 本试验建立了一种用于检测玉米中黄曲霉毒素B1的间接竞争化学发光酶免疫分析方法。以辣根过氧化物酶催化鲁米诺-过氧化氢-对碘苯酚作为发光体系,通过对包被抗原、检测抗体和酶标二抗浓度的优化建立其标准曲线。所建方法的线性范围为0.31～20μg/L,相关系数R2=0.992 7,灵敏度为0.09μg/L,处理内和处理间变异系数分别小于9.79%和13.08%,样品加标回收率为70.3%～100.85%。采用所建立的方法对10份玉米样品进行检测,检测结果与进口ELISA试剂盒的相关系数为0.831。结果表明本研究所建的方法可用于实际样品的检测。 展开更多

关键词 黄曲霉毒素B1 化学发光酶免疫法 玉米

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非酯化脂肪酸对体外培养犊牛原代肝细胞中炎性因子表达及其活性的影响 被引量：7

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作者 史晓霞 王建国 +13 位作者 李玉 宋玉祥 丁红研 韩盈盈 张玉明 殷立恒 王婷婷 张仁和 郭立辉 邓清华 李心慰 李小兵 刘国文 王哲 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期92-96,共5页

在建立犊牛原代肝细胞体外培养模型的基础上,通过培养液中添加不同浓度的非酯化脂肪酸(Nonesterified fatty acids,NEFAs),运用实时荧光定量PCR和ELISA方法,测定NEFAs对肝细胞中炎性因子TNFα、IL-6和IL-1β的mRNA表达及其活性的影响。... 在建立犊牛原代肝细胞体外培养模型的基础上,通过培养液中添加不同浓度的非酯化脂肪酸(Nonesterified fatty acids,NEFAs),运用实时荧光定量PCR和ELISA方法,测定NEFAs对肝细胞中炎性因子TNFα、IL-6和IL-1β的mRNA表达及其活性的影响。结果显示,NEFAs作用肝细胞9h后,与对照组相比,高浓度NEFAs(1.8mmol/L)组肝细胞中TNFα、IL-1β的mRNA表达水平显著增加(P<0.05),IL-6的mRNA表达水平在2.4mmol/L时极显著增加(P<0.01),低浓度NEFAs(0.6、1.2mmol/L)组肝细胞中TNFα、IL-1β和IL-6的mRNA表达水平无显著差异(P>0.05);并且TNFα、IL-1β的活性在NEFAs浓度达到1.8、2.4mmol/L显著高于对照组(P<0.01),且呈剂量依赖性作用,IL-6的活性在在NEFAs浓度达到1.8mmol/L显著高于对照组(P<0.01),在2.4mmol/L也高于对照组,但差异不显著。结果表明,高浓度NEFAs在一定程度上能引起或加剧奶牛肝细胞炎性反应,可能是导致产后奶牛肝功能炎性损伤主要因素。 展开更多

关键词 非酯化脂肪酸 肝细胞 炎性因子

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胰岛素、胰高血糖素对体外培养犊牛肝细胞脂合成作用的影响 被引量：3

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作者 张世奇 丁红研 +3 位作者 史珍 张强 李心慰 李小兵 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期312-317,共6页

为确定胰岛素(insulin,INS)和胰高血糖素(glucagon,GLN)对奶牛肝细胞脂合成作用的影响,本试验体外培养犊牛原代肝细胞,分别用不同浓度的INS和GLN处理肝细胞:对照组(0nmol/L)、浓度梯度组(1,10,100,1 000nmol/L)。培养1h后分别用免疫印迹... 为确定胰岛素(insulin,INS)和胰高血糖素(glucagon,GLN)对奶牛肝细胞脂合成作用的影响,本试验体外培养犊牛原代肝细胞,分别用不同浓度的INS和GLN处理肝细胞:对照组(0nmol/L)、浓度梯度组(1,10,100,1 000nmol/L)。培养1h后分别用免疫印迹(Western blot,WB)方法、荧光定量PCR(qRT-PCR)方法以及细胞免疫荧光(immunofluorescence,IF)方法检测INS和GLN处理体外培养肝细胞对关键转录因子固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)mRNA表达水平,SREBP-1c核质分布以及下游靶基因脂代谢关键酶乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和脂肪酸合成酶(FAS)mRNA表达水平的影响。结果显示:INS处理使SREBP-1c的表达水平和转录活性显著升高,入核量显著增加,其下游的脂合成关键酶ACC和FAS的基因表达水平也显著升高。而与之相反,GLN处理使SREBP-1c的表达水平和转录活性显著降低,入核量显著减少,其下游的脂合成关键酶ACC和FAS的基因表达水平也显著降低。以上结果说明,INS可通过增强SREBP-1c的活性从而促进肝细胞脂合成,增加肝脂沉积;而GLN则通过抑制SREBP-1c的活性从而降低肝细胞脂合成。 展开更多

关键词 胰岛素 胰高血糖素 固醇调节元件结合蛋白-1C 犊牛肝细胞 脂合成

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亚临床酮病奶牛的氧化抗氧化状态和乳品质 被引量：2

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作者 李玉 董记红 +9 位作者 林根祥 王希春 冯士彬 丁红研 孟婷婷 许伟 吴金节 王哲 刘国文 李心慰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期914-917,共4页

为研究亚临床酮病奶牛的氧化应激状态及其对奶牛乳品质的影响,分别选取21头亚临床酮病奶牛和21头健康奶牛,通过尾静脉采集非抗凝血,用于氧化抗氧化指标的检测;同时收集新鲜乳样,用于乳成分的检测。结果表明,与健康奶牛相比,亚临床酮病... 为研究亚临床酮病奶牛的氧化应激状态及其对奶牛乳品质的影响,分别选取21头亚临床酮病奶牛和21头健康奶牛,通过尾静脉采集非抗凝血,用于氧化抗氧化指标的检测;同时收集新鲜乳样,用于乳成分的检测。结果表明,与健康奶牛相比,亚临床酮病奶牛的总抗氧化能力、谷胱甘肽过氧化物酶、乳蛋白和总固形物活性、血清葡萄糖显著或极显著降低(P<0.05;P<0.01),乳脂肪比、非酯化脂肪酸、β-羟基丁酸、丙二醛含量显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01)。由此可见,亚临床酮病奶牛体内存在氧化应激,主要抗氧化酶活性降低,并且氧化应激状态显著高于健康奶牛,乳品质低于健康奶牛。 展开更多

关键词 亚临床酮病 奶牛 氧化应激 乳品质

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p38介导β-羟丁酸对原代培养犊牛肝细胞凋亡的影响 被引量：1

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作者 宋玉祥 李玉 +12 位作者 李心慰 史晓霞 丁红研 韩盈盈 李娜 张仁和 张玉明 王婷婷 殷立恒 郭立辉 李小兵 王哲 刘国文 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1889-1895,共7页

本试验旨在探讨β-羟丁酸(BHBA)对体外原代培养犊牛肝细胞凋亡的影响以及p38MAPK在其中的调控作用。选择培养72h的肝细胞,添加不同浓度的BHBA(0、0.6、1.2、2.4mmol/L),培养9h,每个浓度3个重复。另外选取细胞,p38MAPK抑制剂SB203580(10... 本试验旨在探讨β-羟丁酸(BHBA)对体外原代培养犊牛肝细胞凋亡的影响以及p38MAPK在其中的调控作用。选择培养72h的肝细胞,添加不同浓度的BHBA(0、0.6、1.2、2.4mmol/L),培养9h,每个浓度3个重复。另外选取细胞,p38MAPK抑制剂SB203580(10μmol/L)预处理1h后,添加BHBA,使其终浓度为2.4mmol/L;PI/Annexin V-FITC双染,运用荧光显微镜观察肝细胞凋亡情况;ELISA法检测p38的活性;实时荧光定量PCR方法检测p38、Caspase-3、Caspase-9、bcl-2基因的mRNA表达水平。结果表明,与对照组相比,1.2和2.4mmol/L BHBA组的肝细胞凋亡明显增加;p38酶活性明显升高;p38、caspase-3和caspase-9基因mRNA表达水平均显著增加(P<0.01),bcl-2基因mRNA表达水平显著降低(P<0.05);添加p38抑制剂后,caspase-3和caspase-9基因mRNA表达水平显著降低(P<0.01),bcl-2基因mRNA表达水平显著增加(P<0.05)。高浓度的BHBA可以诱导体外原代培养犊牛肝细胞凋亡,p38在BHBA诱导的细胞凋亡中发挥重要作用。 展开更多

关键词 BHBA P38 凋亡基因 肝细胞 犊牛

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